一、一氧化氮在阿霉素心肌病中的病理和生理作用的探讨（论文文献综述）
史睿[1]（2021）在《丹皮酚对阿霉素心肌病的作用及机制》文中指出研究背景:盐酸阿霉素是临床上主要用于治疗肿瘤的蒽环类药物,疗效显着,当达到一定累积量后,易对心肌细胞造成损伤,最终导致严重的心脏毒性。临床表现为不可逆性心肌病和充血性心力衰竭,进而限制了阿霉素的临床应用。虽然阿霉素心脏毒性的机制尚未完全阐明,但最终导致的心肌细胞受损是阿霉素心肌病发展的重要原因,如何有效减轻阿霉素引起的心肌损伤,是当前肿瘤心肌病研究领域的一项重要任务。丹皮酚是中药牡丹皮的主要活性成分,具有清热和活血化瘀的功效,临床上常用于镇痛抗炎,然而,丹皮酚在阿霉素心肌病中的作用尚不清楚。本研究通过建立阿霉素心脏病模型,探讨丹皮酚对阿霉素心肌病的作用及机制。研究目的:1.探究丹皮酚能否减轻阿霉素心肌病;2.如果能,阐明丹皮酚减轻阿霉素心肌病的机制。研究方法:1.将SPF级雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠随机分为四组:正常对照组（Control）,丹皮酚对照组（Control+Pae）,阿霉素模型组（Dox）,阿霉素处理加丹皮酚给药组（Dox+Pae）。采用腹腔注射阿霉素进行造模（15 mg/kg）,丹皮酚给药组全程给予灌胃（75,150,300 mg/kg/d）。造模完成后进行如下检测:用超声心动图评估各组大鼠心脏功能;用血流动力学检测大鼠左心室压力;取材后,用Masson染色观察大鼠心肌纤维化程度;用麦胚凝集素（WGA）染色评估大鼠心肌肥厚指标;采集SD大鼠血清,通过检测血清中乳酸脱氢酶（LDH）、肌酸激酶同工酶（CK-MB）含量反映心肌损伤程度;用TUNEL染色检测组织心肌细胞凋亡;用二氢乙锭（DHE）染色检测心肌细胞氧化应激水平;用透射电镜观察心肌细胞线粒体形态;用Western blotting检测细胞凋亡、氧化应激、线粒体呼吸以及线粒体动力学相关蛋白表达水平。2.C57BL/6小鼠皮下接种携带荧光素酶B16细胞造黑色素瘤模型,在模型成功后将其随机分为四组:正常对照组（Control）,丹皮酚对照组（Control+Pae）,阿霉素模型组（Dox）,阿霉素处理加丹皮酚给药组（Dox+Pae）。按上述相同方法造模,采用小鼠活体成像分析评估肿瘤大小。3.提取原代心肌细胞,将其随机分为四组:正常对照组（Control）,丹皮酚对照组（Control+Pae,50μM）,阿霉素模型组（Dox,3μM）,阿霉素处理加丹皮酚给药组（Dox+Pae,3μM+50μM）。各组给予相应处理并培养24 h后进行后续检测:用CCK-8试剂检测细胞活力;用LDH含量反映心肌细胞受损程度;用TUNEL染色检测原代心肌细胞凋亡;用Mito-SOX荧光强度反映心肌细胞线粒体活性氧（ROS）含量;用Mito-Tracker Red染色观察心肌细胞线粒体形态学变化;用Western blotting检测线粒体动力学相关蛋白表达水平。4.提取原代心肌细胞,在阿霉素处理前转染腺病毒,分别敲低和过表达Mfn2,然后给予丹皮酚处理,并进行后续检测:用CCK-8试剂检测细胞活力;用LDH含量反映心肌细胞受损程度;用TUNEL染色检测心肌细胞凋亡;用Mito-SOX荧光强度反映心肌细胞线粒体ROS含量;用Mito-Tracker Red染色观察心肌细胞线粒体形态学变化;用Western blotting检测Mfn2表达水平。研究结果:1.在整体动物水平,阿霉素可诱导大鼠心脏功能障碍,心肌纤维化增多和心肌肥厚;心肌细胞凋亡,氧化应激以及血清中心肌损伤标志物LDH,CK-MB增多;同时,心肌线粒体分裂增多,伴随线粒体融合蛋白Mfn2表达显着下调,但融合蛋白Mfn1、Opa1和分裂蛋白Drp1、Fis1的表达无明显差异;线粒体呼吸链复合体蛋白部分表达下调;然而上述作用均可被丹皮酚所抑制。2.小鼠活体成像结果表明,丹皮酚在减轻阿霉素心脏毒性的同时不影响其抗肿瘤活性。3.在离体细胞水平,丹皮酚减轻阿霉素引起的心肌细胞损伤,细胞凋亡和氧化应激,恢复细胞内融合蛋白Mfn2的表达,抑制线粒体过度分裂。4.在离体细胞水平,敲低Mfn2可阻断丹皮酚的心肌细胞保护效应,过表达Mfn2可抑制阿霉素引起的线粒体分裂,直接减轻细胞损伤和凋亡。研究结论:1.丹皮酚可改善阿霉素心肌病大鼠的心脏功能和结构,减轻心肌损伤,抑制阿霉素引起的线粒体分裂;2.丹皮酚通过上调线粒体融合蛋白Mfn2发挥抑制线粒体分裂和减轻心肌损伤的效应。
杨柳[2]（2021）在《组蛋白H3K9乙酰化修饰通过调控Pik3ca转录参与阿霉素诱导的H9c2细胞凋亡》文中研究说明目的:在阿霉素诱导的H9c2细胞模型中,我们评估了组蛋白H3K9乙酰化修饰对Pik3ca转录水平的影响以及Pik3ca通过诱导大鼠H9c2细胞凋亡的作用机制。研究方法:建立阿霉素诱导的H9c2细胞模型:实验分为:对照组（加入等量的完全培养基培养细胞8小时）,阿霉素组（1u M阿霉素培养细胞8小时）。采用CCK8及流式细胞术（Annexin V-FITC/PI）实验检测H9c2细胞活性和凋亡情况,蛋白质免疫印迹（Western blot）检测Bcl2,BAX,Cleaved-caspase3蛋白的表达情况。ChIP-Seq检测Pik3ca启动子区域组蛋白H3K9乙酰化水平。ChIP-q PCR检测H3K9ac抗体富集到的Pik3ca启动子区域片段的水平。应用实时定量聚合酶链式反应（rt-PCR）和Western blot实验方法检测Pik3ca的表达水平。细胞免疫荧光和Western blot检测Pik3ca si RNA的转染效率。细胞计数试剂盒（Cell Counting Kit8,CCK8）检测细胞活性,流式细胞术（Annexin V-FITC/PI）检测细胞凋亡率。Western blot检测H9c2细胞中PI3K,P-AKT,AKT,Bcl2,BAX和Cleaved-caspase3蛋白表达水平。结果:用1uM阿霉素培养H9c2细胞8小时,CCK8和流式细胞术实验表明H9c2细胞发生明显的凋亡,Bcl2蛋白表达下降,BAX和Cleaved-caspase3蛋白表达增加。ChIP-Seq测序分析发现阿霉素组与对照组相比,Pik3ca启动子区组蛋白H3K9乙酰化水平显着增加,同时应用ChIP-QPCR进一步证明了在阿霉素组中,H3K9ac抗体富集的Pik3ca启动子区域的片段明显高于对照组。实时定量聚合酶链式反应和Western blot实验结果表明相对于对照组,阿霉素组中Pik3ca的m RNA和蛋白的表达量升高,同时PI3K,P-AKT蛋白表达量升高。沉默Pik3ca后,CCK8和流式细胞术发现心肌细胞凋亡明显减少,在Western blot结果中,PI3K,P-AKT,Bcl2蛋白表达水平升高,AKT蛋白表达水平不变,BAX,Cleaved-caspase蛋白表达水平下降。结论:综上所述,在阿霉素诱导的H9c2细胞中,Pik3ca启动子区组蛋白H3K9乙酰化水平显着升高并促进了Pik3ca的转录。Pik3ca通过激活PI3K/AKT信号通路促进了阿霉素诱导H9c2细胞的凋亡,为阿霉素性心肌病的研究提供了新的理论基础。
于洋[3]（2021）在《基于转录组学与代谢组学体外水平分析探讨阿霉素的心脏毒性作用及其机制研究》文中指出目的:阿霉素是一种蒽环类抗生素,具有较强的抗肿瘤活性,但由于其严重的心脏毒性,限制了临床应用。阿霉素的剂量积累可引起不可逆的心肌损伤,导致心力衰竭和心脏纤维化,称为阿霉素心肌病。阿霉素心肌病的发病机制尚不完全清楚,组学分析可以帮助我们系统地了解阿霉素心肌病的发生发展过程。研究方法:基于体外模型,我们重点关注了阿霉素诱导的心肌细胞凋亡表型及心脏成纤维细胞的增殖与活化表型。在第一部分研究中,我们对阿霉素诱导的H9c2心肌细胞的RNA样本进行了二代测序,所获数据与下载自GEO数据库的GSE42177芯片数据集进行整合分析筛选出差异基因,应用DAVID数据库对差异基因进行GO与KEGG富集分析,应用STRING数据库与Cytoscape软件对差异基因进行蛋白蛋白互作分析。Western-blot与q PCR用于检测Slc19a2的蛋白水平与m RNA水平的表达量差异,转染sh RNA质粒用于敲减Slc19a2的表达。CCK-8法联合Annexin V/PI双染色法用于检测细胞凋亡水平。应用液相色谱质谱联用技术对H9c2细胞上清液进行代谢组学分析鉴定硫胺素及其他DMEM培养基成分的相对含量,应用ChIP-seq和ChIP-q PCR分析全基因组以及Slc19a2转录起始区的H3K9ac富集水平。在第二部分研究中,我们建立了H9c2心肌细胞与心肌成纤维细胞的条件培养模型,研究阿霉素诱导的心肌纤维化。采用CCK-8法和Ed U法检测心肌成纤维细胞增殖水平。用q PCR、western blotting和免疫荧光染色检测心肌成纤维细胞中Col1a1、Col3a1、Tgfb1和α-SMA等纤维化标志物的表达。采用液相色谱质谱联用技术对H9c2心肌细胞上清中的潜在因子进行鉴定和定量。通过功能缺失和回复试验检测HNMT/NMH轴的作用。结果:我们筛选出51个差异基因,其中24个基因表达上调。6个上调的差异基因被富集于GO:0005887,其中包含硫胺素的特异转运体基因Slc19a2。Western-blot和q PCR结果验证了阿霉素诱导H9c2细胞后Slc19a2表达水平明显上调。敲减Slc19a2可加重阿霉素诱导的H9c2细胞凋亡,提示Slc19a2基因可能具有抗细胞凋亡的保护作用。代谢组学分析结果显示,阿霉素干预后,H9c2细胞上清液中的硫胺素相对含量明显下降,提示硫胺素的转运活动增强。应用1-8mg/L的硫胺素浓度梯度干预H9c2细胞可逐步拮抗阿霉素的促凋亡作用。ChIPseq结果提示阿霉素干预后,Slc19a2的转录起始区H3K9ac水平明显上调,ChIPq PCR结果证实敲减Slc19a2可下调Slc19a2基因转录起始区的H3K9ac水平,此效应可通过额外补充硫胺素回复,提示在阿霉素诱导的H9c2细胞中,存在Slc19a2-硫胺素转运-H3K9ac-Slc19a2的反馈环参与拮抗细胞凋亡。在条件培养模型中,阿霉素暴露后细胞增殖和活化水平显着升高。类靶向代谢组学分析表明,NMH可能是H9c2心肌细胞上清中的关键因素,LC-MS对其进行定量,并在对照组条件培养液中补充浓度为0.15ng/m L的NMH进行验证。在机制研究方面,我们主要通过代谢通路分析HNMT。Western blotting和q PCR结果显示,阿霉素暴露后HNMT上调。在我们的条件培养液模型中,Hnmt的下调降低了阿霉素诱导的H9c2心肌细胞NMH的释放和心脏成纤维细胞增殖和激活水平的升高,此种现象可通过补充NMH回复,表明Hnmt/NMH轴参与了阿霉素诱导的纤维化。结论:硫胺素转运通过H3K9ac相关的反馈环路参与拮抗阿霉素诱导的H9c2细胞凋亡;阿霉素诱导的H9c2心肌细胞条件培养液通过HNMT/NMH轴促进心肌成纤维细胞的增殖和活化。
唐思学[4]（2021）在《紫薯块根花色苷对阿霉素诱导的心脏毒性的改善作用》文中研究指明花色苷作为一种天然色素,可以诱导内源性抗氧化防御,对人体具有许多保健功能。阿霉素（Doxorubicin,DOX）是癌症治疗的有效药物之一,但DOX的持续给药容易引起心肌细胞损伤和心肌纤维化。因此,研究采用植物源天然物质和抗氧化剂联合治疗并调节DOX诱导的心脏毒性具有重要的科学意义。本研究以紫薯块根为研究材料,用乙醇溶剂浸提结合超声波辅助法提取制备紫薯块根花色苷,利用大孔树脂AB-8和葡聚糖凝胶Sephadex LH-20层析柱进一步分离纯化,通过高速液相色谱-质谱联用技术（HPLC-DAD-ESI-MS）鉴定了紫薯块根花色苷（PSPA）的组成成分;采用DOX诱导H9C2心肌细胞的损伤模型,研究了 PSPA对DOX诱导的H9C2心肌细胞损伤的保护作用;建立DOX小鼠模型,通过分析血清和心脏组织中损伤标志物的分泌量、心脏组织形态的变化等,研究了 PSPA对阿霉素诱导的小鼠心脏毒性的影响机制,为紫薯花色苷资源的开发利用提供依据。（1）紫薯块根花色苷的分离纯化及成分鉴定。紫薯块根花色苷经过大孔树脂AB-8和葡聚糖凝胶Sephadex LH-20层析柱分离纯化后,测得样品中花色苷的含量为6300 mg/100 g,比粗提取液纯化率提高240.16%。成分分析结果表明,纯化后的紫薯块根花色苷（PSPA）共有10种成分,其中矢车菊素和芍药色素是PSPA的主要成分,分别占总PSPA的62.9%和21.46%,其次是矢车菊-3-O-葡萄糖苷（6.5%）和矢车菊-3-O-槐糖苷（2.8%）,还有少量的矢车菊-3-O-槐糖苷、矢车菊-3-O-丙二酰基己糖苷、芍药素衍生物、芍药素-3,5-O-二葡萄糖苷、芍药素-3-槐糖苷-5-葡萄糖苷和咖啡酸3-葡萄糖苷等成分。（2）研究了 PSPA对DOX诱导的H9C2心肌细胞损伤的影响。细胞毒性实验表明,在100-800μg/mL浓度范围内PSPA对H9C2心肌细胞没有毒性。DOX模型组与正常对照组（CON）比较,NO水平显着增加（p<0.05）,表明DOX建模成功并诱导H9C2心肌细胞释放大量的炎症性因子NO。PSPA灌胃组（DOX+PSPA）H9C2心肌细胞中NO、TNF-α和三甲胺-N-氧化物（TMAO）的分泌量较DOX模型组呈剂量依赖性显着降低（p<0.05）;乳酸脱氢酶（LDH）和肌酸激酶（CK）的活性呈剂量依赖性显着减少（p<0.05）。结果表明,PSPA通过抑制DOX诱导的炎症因子（NO和TNF-α）和TMAO的过度释放,以及LDH和CK的活性,对DOX诱导的H9C2心肌细胞损伤保护作用。（3）研究了 PSPA对DOX诱导的小鼠心脏毒性的影响。结果表明,DOX模型组小鼠的体重明显下降（p<0.05）、心脏指数明显增加（p<0.05）、脾脏指数明显下降（p<0.05）。但PSPA灌胃组（DOX+PSPA）在一定程度上缓解了这种现象,其中高剂量PSPA灌胃组（DOX+PSPA200）效果更显着（p<0.05）。PSPA灌胃组（DOX+PSPA）小鼠心脏组织中NO和MDA、心脏组织和血清中的TNF-α和TMAO的分泌量呈剂量依赖性显着降低（p<0.05）;心脏组织和血清中的LDH和CK的活性呈剂量依赖性显着减少（p<0.05）。心脏组织病理切片分析表明,DOX模型组小鼠心肌破裂和液泡变性、大量炎性细胞浸润和心肌细胞颗粒变性,表现出明显的心脏组织损伤形态。但PSPA灌胃组（DOX+PSPA）心肌肥大和间质性出血均有不同程度的改善,明显减轻了 DOX造成的心脏组织形态变化。说明,DOX引起小鼠心脏毒性和损伤,PSPA对DOX诱导的小鼠心脏毒性和损伤具有保护和改善作用。总之,通过体外和体内实验结果证明,PSPA可以有效减轻和保护DOX诱导的心脏毒性和心肌损伤,这些结果对PSPA作为功能性食品干预DOX诱导的心脏毒性的研究提供了一定的实验依据。
杨欣宇[5]（2021）在《稳心颗粒调控氧化应激和钙循环防治依鲁替尼诱发房颤的效应机制》文中研究说明背景近年来,随着肿瘤诊疗水平突飞猛进的提高、抗肿瘤药的不断涌现以及精准疗法的应用,肿瘤患者的生存期不断延长。然而,有研究显示,在带瘤生存者当中,约有1/3死于心血管疾病。因此,肿瘤心脏病学这一新兴交叉学科应运而生。依鲁替尼（ibrutinib）是一种布鲁顿酪氨酸激酶（Btk）抑制剂,用于临床治疗慢性淋巴细胞性白血病（CLL）,套细胞淋巴瘤和Waldenstrom巨球蛋白血症,可作为单一疗法或部分疗法联合应用。在既往的临床试验中,与用奥法木单抗治疗的患者相比,依鲁替尼显着提高了患者的生存率。尽管依鲁替尼相对于其他常规化疗显示出较小的毒性,但仍有证据表明,依鲁替尼可以增加出血风险以及心房颤动（AF）的发生率。据报道,接受依鲁替尼治疗的患者房颤发生率高达11%。因此,临床应用依鲁替尼治疗的患者面临巨大挑战。稳心颗粒（WXKL）是我国第一个抗心律失常中成药,其主要成分包括党参、黄精、三七、甘松和琥珀。多项研究表明,稳心颗粒对改善多种原因所致心律失常具有较好的临床疗效。稳心颗粒在改善p波离散度和维持阵发性房颤患者窦性心律方面似乎更有效,且可以降低室性早搏综合征（VPCs）的发生率,增加左室射血分数（LVEF）以及改善6分钟步行试验的结果。然而,其深层的机制尚不清楚。目的探索依鲁替尼增强小鼠房颤易感性的机制研究以及稳心颗粒治疗依鲁替尼诱发房颤小鼠氧化应激和钙循环信号通路的作用机制,为临床应用提供依据。方法1.采用食道Burst刺激,观察依鲁替尼诱发小鼠房颤的发生率和持续时间;超声心动图检测小鼠心房功能的指标;病理组织染色（Masson染色和天狼星红染色）观察心房组织纤维化程度,以及透射电子显微镜观察心房肌细胞的超微结构的变化。采用激光共聚焦显微镜和IonOptix系统检测细胞内Ca2+释放,观察依鲁替尼诱发房颤小鼠心房肌细胞钙火花、钙瞬变和线粒体活性氧簇生成的变化。2.采用蛋白质组学技术检测,观察依鲁替尼诱发房颤的心房肌蛋白表达情况,主要使用双向凝胶电泳技术对细胞的蛋白质进行高通量地分离和纯化,再用专业计算机软件进行图像分析,然后通过质谱技术及相关数据信息处理,对凝胶上的蛋白质点进行分析与鉴定,进而观察依鲁替尼诱发房颤小鼠心房肌的蛋白质组变化。3.采用蛋白印迹法（Western blot）进行验证,选取氧化应激信号通路相关蛋白NOX2、NOX4、XO和TGF-□作为对象,研究依鲁替尼诱发房颤小鼠心房肌氧化应激相关蛋白的影响。通过食道Burst刺激验证夹竹桃麻素通过减少心房肌细胞Ca2+释放以及抑制钙循环和氧化应激相关蛋白氧化的钙调蛋白激酶Ⅱ（ox-CaMKⅡ）和磷酸化的钙调蛋白激酶Ⅱ（p-CaMKⅡ,Ser286）的表达,从而减轻依鲁替尼诱发房颤小鼠的心房重构,进一步减少房颤的发生发展。4.采用构建化合物-靶点-疾病网络,筛选出在稳心颗粒调控的房颤的相关通路和靶标蛋白,进行GO富集分析以及KEGG通路分析。利用AutoDock Tools对活性氧（ROS）进行去水、加氢、计算电荷,然后运用AutoDock Vina对其进行分子对接。5.采用蛋白质组学技术检测稳心颗粒治疗依鲁替尼诱发房颤的心房肌蛋白表达情况,观察稳心颗粒治疗依鲁替尼诱发房颤小鼠心房肌差异蛋白的变化。结合分子靶点预测,筛选出稳心颗粒治疗房颤的共有靶标蛋白,然后对共有靶标进行富集分析。6.采用Western blot方法,选取氧化应激信号通路和钙循环通路相关蛋白,NOX2、NOX4、p22-phox、XO、ox-CaMKⅡ、p-CaMKII（Thr-286）和p-RyR2（Ser2814）作为对象,验证稳心颗粒对房颤小鼠心房肌氧化应激信号通路和钙循环信号通路相关蛋白的影响。结果1.食道Burst刺激心电图显示,模型组房颤的发生率较高,且持续时间明显延长。超声心动图测量心功能各项指标显示,模型组心房左右径较长,心房面积较大,E峰/A峰降低。光镜下模型组心肌细胞增大,排列紊乱,细胞间隙增宽,可见少量胶原纤维。透射镜下观察到房颤引起心肌超微结构改变,肌小节和肌质网少、线粒体肿胀及糖原沉积,闰盘分离。使用电生理相关技术检测,模型组的钙瞬变幅度明显增加,衰减时间延长。模型组的心房肌细胞内钙火花的发生频率明显增加。通过对线粒体ROS的检测,模型组心房肌细胞内线粒体ROS的产生是逐渐增加的,而DTT组的线粒体ROS产生的趋势减少。2.iTRAQ蛋白质组技术进行依鲁替尼诱发房颤后差异蛋白的鉴定及筛选。通过对差异蛋白的聚类分析、GO富集分析及KEGG通路分析信号通路的相关蛋白可能参与的病理生理过程。发现目前心律失常研究领域作为生物标记物的蛋白,如Xanthine dehydrogenase/oxidase,NADH-ubiquinone oxidoreductase chain 1,Deoxyguanosine kinase,NADH dehydrogenase[ubiquinone]1 beta subcomplex subunit 1 Biliverdin reductase B（Flavin reductase（NADPH））等。这些差异表达的蛋白质与ROS相关信号通路有关。3.Western blot检测结果显示,依鲁替尼治疗小鼠通过氧化应激增加ox-CaMK Ⅱ,p-CaMKⅡ（Ser286）,p-RyR2（Ser2814）和TGF-β的表达而引起钙超载和心房纤维化。夹竹桃麻素是一种NOX抑制剂,能够抑制氧化应激相关蛋白ox-CaMK Ⅱ和p-CaMKⅡ（Ser286）的表达,减轻了依鲁替尼诱发房颤小鼠的心房重构,进而减少房颤的发生发展。4.预测稳心颗粒治疗房颤的靶点,对“活性化合物—潜在靶点”网络进行分析得到64个关键靶点,进行靶点蛋白-蛋白相互作用（PPI）网络图。结果表明,Cat、IL-6、MAPK14、Casp3等是稳心颗粒治疗房颤的关键靶点。采用分子对接方法观察稳心颗粒的主要成分与关键靶点的最佳嵌合结构。通过GO功能富集分析和KEGG通路富集分析,氧化应激信号通路、钙离子信号通路,Toll样受体信号通路等。5.蛋白质组学方法鉴定稳心颗粒治疗依鲁替尼诱发房颤小鼠心房差异蛋白,筛选出336关键靶点,然后通过聚类分析、GO功能富集和KEGG通路富集分析。结合预测的分子靶点进行分析,筛选出25个共有关键靶点。通过GO功能富集分析和KEGG通路富集分析,氧化应激相关信号通路、钙离子信号通路,Toll样受体信号通路等直接或者间接参与房颤的形成,明确关键靶点间的相互作用。6.Western blot进行验证,选择氧化应激信号通路和钙循环信号通路的相关蛋白,深入研究稳心颗粒对依鲁替尼诱发房颤小鼠氧化应激信号通路相关蛋白NOX2、NOX4、p22-phox、XO、ox-CaMK II、p-CaMKⅡ（Thr-286）和 p-RyR2（Ser2814）表达的变化。进一步明确稳心颗粒能够通过调控氧化应激和钙循环相关信号通路上的关键蛋白,而改善房颤的发生发展。结论1.依鲁替尼通过激活NOX以增加ROS,导致ox-CaMKⅡ中的蛋氨酸281/282氧化,从而增加RyR2上的丝氨酸2814,导致舒张期Ca2+泄漏增强,从而促进小鼠心房肌的电重构和结构重构。夹竹桃麻素是一种NOX抑制剂,通过抑制氧化应激相关蛋白ox-CaMKⅡ和p-CaMKⅡ（Ser286）的蛋白表达,减轻了依鲁替尼诱发房颤小鼠的心房重构。2.分子预测结合蛋白质组学筛选出25个靶点蛋白,这些标志物主要涉及氧化应激和钙循环信号通路相关蛋白。稳心颗粒能够通过调控这些通路相关的蛋白表达,而改善房颤的发生和发展,从信号与物质、结构变化的内在关系阐明其分子作用机制,为临床应用提供重要依据。
谭若朋[6]（2021）在《右丙亚胺缓解阿霉素导致心房重构的机制研究》文中认为背景:肿瘤和心血管疾病是严重威胁人类健康的两种高发疾病。随着诊断和治疗水平的进步,恶性肿瘤患者的总体死亡率有所下降,但与肿瘤相关的心血管疾病死亡率却逐渐升高。肿瘤对于患者的心血管疾病影响除了肿瘤高代谢物质引起的心脏毒性、内皮损伤等直接损伤外,还有治疗手段带来的间接损伤,如化疗药物的心肌毒性,放射治疗引起的心脏损害。以阿霉素为代表的蒽环类药物是目前多种肿瘤联合化疗的基础用药,但其引发的心肌毒性却无法有效预防。蒽环类药物引起的心肌损伤已成为肿瘤患者死亡风险增加的重要原因。故早期检测和提前预防蒽环类药物的心肌毒性显得尤为重要。阿霉素心肌毒性在临床上主要表现为急性心力衰竭、慢性心力衰竭、阿霉素心肌病。但有关阿霉素引发房颤的临床研究较少,追其原因可能是在使用阿霉素的过程中房颤不易监测,可能患者在发生心衰的同时也发生房颤,研究上也主要集中于心衰的防治。本研究从结构重塑和电重塑两方面较为系统的阐述了阿霉素会增加房颤易感性,为临床上及早发现阿霉素诱发房颤,提前防治提供证据。目的:通过阿霉素小鼠心脏毒性模型,检测小鼠心房超微结构、纤维化、炎症的改变及缝隙连接蛋白43的表达与分布,检测小鼠心房电传导变化,探索缝隙连接蛋白43在阿霉素诱发房颤中的改变及右丙亚胺的改善作用方法:（1）将周龄在8-10周,体重大于25g的野生型雄性小鼠（C57BL/6J）共40只随机分为4组,分别为对照组（n=10）、DEX组（n=10）、DOX组（n=10）、DOX+DEX组（n=10）。第0周起每周1次连续4周:DEX组每只小鼠腹腔注射右丙亚胺（20mg/kg）,DOX组每只小鼠腹腔注射阿霉素（5mg/kg）,DEX+DOX组每只小鼠先腹腔注射右丙亚胺（20mg/kg）,30分钟后腹腔注射阿霉素（5mg/kg）,对照组每只小鼠腹腔注射等量生理盐水。（2）记录小鼠体重,用尾部无创血压计测量各组小鼠的收缩压。（3）使用超声Vevo770系统30MHz探头连续采集并评价各组小鼠左心房和舒张末期前后径大小和左心室的收缩功能。（4）使用Millar 1.1F EP导管经右侧颈外静脉进入右心系统进行心内起搏,并采集数据。（5）采用Mapping Lab64位电学标测系统采集并评价左心房电传导速度、左心房激动时间,左心房传导离散度。（6）采用H&E染色观察小鼠心房大体形态变化;采用Masson染色观察小鼠心房组织纤维化情况并计算纤维化面积;采用免疫荧光染色观察乳大鼠心肌细胞爬片和小鼠心房组织缝隙连接蛋白43的表达与分布。（7）采用Western blot检测心房组织CX43,CX45,PANX1,和α-Tublin表达水平。结果:1.与对照组小鼠相比,随着阿霉素的积累,DOX组小鼠的体重逐渐降低引起消瘦,但DOX+DEX组的小鼠体重有所缓解且有统计学意义。2.与对照组相比,DOX组小鼠心脏明显变小,主要反映在心重/胫骨长（HW/TL）。超声心动图显示随着药物的积累DOX组小鼠心房前后径逐渐变大,在右丙亚胺处理的小鼠中,其心房大小较DOX组小鼠明显改善。阿霉素组小鼠心室功能明显降低,EF值和FS值减少,且左室质量分数明显降低。3.与对照组相比,DOX组小鼠具有更高的房颤发生率,且房颤持续时间更长;上述变化在DOX+DEX组得到改善。4.与对照组相比,DOX组小鼠的心房传导速度明显减低,心房激活时间明显延长,心房传导离散度明显增加;上述变化在DOX+DEX组得到改善。5.对照组心房肌细胞肌丝排列规整,线粒体形态正常,嵴排列整齐紧密,结构清晰。阿霉素组心肌细胞部分消失,线粒体肿胀、排列分散,线粒体嵴断裂。DOX组也可见缝隙连接裂解、T管扩张、缝隙连接内有絮状或髓样分泌物的征象,上述变化在DOX+DEX组得到改善。6.与对照组相比,DOX组小鼠心房组织缝隙连接蛋白43表达减少,分布稀疏紊乱、边缘化。与对照组相比,阿霉素使乳大鼠心肌细胞和hCX43-Hela细胞缝隙连接蛋白43分布稀疏紊乱,且使CX43蛋白功能降低。上述变化在DOX+DEX组得到改善。结论:本研究认为缝隙连接蛋白43是阿霉素增加房颤易感性的重要靶点,而右丙亚胺可通过改善缝隙连接蛋白43的表达与分布缓解阿霉素引起的房颤易感性增加。
桑珍珍[7]（2021）在《miR-214对脓毒症心肌自噬的调控研究》文中研究表明心脏是脓毒症时最易损靶器官之一,经常表现为心肌细胞变性坏死、心肌收缩功能和舒张功能受损。脓毒症患者约有50%可发生心脏功能障碍,其死亡率高达70%～90%。脓毒症心肌功能障碍（sepsis-induced myocardial dysfunction,SIMD）,也称为脓毒症心肌抑制、脓毒性心肌病（Septic cardiomyopathy）,是脓毒症休克难以纠正,导致死亡的重要原因。目前,关于SIMD的发病机制主要包括:心肌抑制物;心肌能量代谢障碍;氧自由基;细胞凋亡;基因调控等许多因素共同作用引起心肌结构和功能异常。自噬（autophagy）是一种细胞维持内环境稳态的生物学机制,它通过降解并再循环利用细胞质中的长寿命蛋白以及衰老、废弃的细胞器等来为细胞的存活提供能量。自噬可由应激如缺血再灌注损伤、压力负荷等触发。自噬具有双重作用,适度的自噬促进细胞的存活,但过度自噬又可以导致细胞死亡,可见自噬是一把“双刃剑”。miR-214通过靶向调控PTEN在心肌细胞凋亡、氧化损伤、心肌纤维化、心室压力负荷等方面发挥重要调节作用,但miR-214对于维持细胞内环境稳态及自噬调节过程尚属未知,有必要进行深入研究。PTEN/Akt/mTOR信号通路被广泛报道是细胞凋亡和自噬激活的经典信号通路。我们假设miR-214可以调控PTEN/Akt/mTOR通路,抑制心肌细胞自噬,减轻脓毒症小鼠心脏功能障。我们从心功能、心脏形态学、心肌蛋白表达等方面观察miR-214对SIMD小鼠心脏功能的影响,探讨其作用机制,为SIMD的治疗提供新思路。本研究共分四部分。第一部分脓毒症患者的心功能及血浆中miR-214的表达水平目的:探讨脓毒症患者的心功能及血浆中miR-214的表达水平。方法:1.选择沧州市中心医院EICU自2018年10月至2021年02月收治的125例脓毒症患者作为研究对象,根据病情严重程度,分为脓毒症组（50例）和脓毒症休克组（75例）。根据床旁心脏超声检测的EF值结果,分为脓毒症无心肌抑制组（83例）和脓毒症心肌抑制组（42例）。选择健康体检者10例作为对照组。2.收集脓毒症患者入EICU时的基本资料,床旁超声检测患者入EICU时的心功能参数,及对症积极治疗后再行超声监测心功能参数。3.采用RT-qPCR方法检测患者入EICU时血液中miR-214的表达情况。4.使用Spearman相关分析检测血浆miR-214表达水平、超声下心功能参数、心肌酶学指标、脏器功能指标、APACHEⅡ评分、SOFA评分等之间的相关性。结果:1.在125例脓毒症患者中,42例出现心肌抑制,脓毒症心肌抑制的发病率为33.60%;2.与脓毒症无心肌抑制组患者相比,脓毒症心肌抑制患者血清中miR-214表达水平有所升高,差异有统计学意义（P<0.05）;3.脓毒症心肌抑制患者血浆中miR-214表达与EF、c TNI、SOFA评分呈正相关。小结:1.脓毒症心肌抑制组患者血浆中miR-214的表达明显升高。2.脓毒症心肌抑制患者血浆中miR-214表达与c TNI、SOFA评分呈正相关,与EF值呈负相关。第二部分脓毒症小鼠心肌自噬活性和miR-214表达变化目的:观察脓毒症小鼠心肌自噬活性和miR-214表达变化。方法:1.实验选取6-8周龄（18-22g）昆明小鼠,采用盲肠结扎穿孔术（cecal ligation puncture,CLP）复制脓毒症心肌损伤模型。将小鼠随机分为4组:对照组（假手术组）、脓毒症6h组、脓毒症12h组、脓毒症24h组,每组10只。2.采用全自动生化分析仪检测心肌损伤标记物:肌酸激酶同工酶（creatine kinase-MB,CK-MB）和乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase,LDH）的水平。3.采用酶联免疫吸附测定（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）检测血清肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor-alpha,TNF-α）、白细胞介素-1（Interleukin-10,IL-10）、心肌肌钙蛋白-I（Myocardial troponin I,cTnI）的水平。4.采用实时定量聚合酶链反应（Real-time polymerase chain reaction,RT-qPCR）检测心肌miR-214的表达水平。5.采用免疫荧光法检测心肌LC3B的水平,采用免疫组化法检测心肌p62的水平,Western blot法检测心肌LC3-II/I、p62的水平,评估心肌自噬情况。6.CLP术后6h,采用小动物超声仪检测小鼠心功能（LVEF及LVFS）。7.采用HE染色观察小鼠心肌组织形态学变化。采用透射电子显微镜观察小鼠心肌细胞自噬情况。结果:1.与对照组相比,脓毒症组小鼠血清CK-MB、LDH的水平及TNF-α、IL-10的水平随时间延长逐渐升高。CLP术后6h,心脏超声显示LVEF及LVFS明显降低,小鼠出现心功能障碍。CLP术后24h心肌组织HE染色出现明显的病理损伤;2.与对照组相比,脓毒症组小鼠在CLP术后6h时miR-214的表达水平明显升高,但随着时间延长则逐渐降低;3.与对照组相比,脓毒症组小鼠在CLP术后24h,心肌组织LC3B的水平明显升高,p62的水平明显降低,透色电镜下心肌细胞内出现自噬小体。小结:1.CLP术后24h,小鼠出现血清炎症因子升高、心肌酶学标记物升高、心功能障碍以及心肌组织病理改变,CLP术能够成功模拟脓毒症心肌损伤模型。2.脓毒症时小鼠心肌组织出现明显的自噬。3.脓毒症时小鼠心肌组织miR-214的表达出现先升高,后逐渐降低的动态变化。第三部分miR-214对脓毒症小鼠心肌自噬以及心功能的影响目的:观察miR-214在脓毒症小鼠心肌自噬中的作用。方法:1.实验选取6-8周龄（18-22g）昆明小鼠,采用盲肠结扎穿孔术（cecal ligation puncture,CLP）复制脓毒症心肌损伤模型。将小鼠随机分为6组:对照组、脓毒症组、miR-214过表达空白对照组、miR-214过表达组、miR-214抑制空白对照组、miR-214抑制组,每组10只。2.CLP术前3天,通过小鼠尾静脉注射腺病毒调控miR-214的表达。于CLP术后24h杀鼠,留取心脏及血清标本。3.采用全自动生化分析仪检测心肌损伤标记物:CK-MB和LDH的水平。4.采用ELISA法检测血清TNF-α、IL-10、cTnI的水平。5.采用实时定量聚合酶链反应（RT-qPCR）检测心肌miR-214的表达水平。6.采用免疫荧光法检测心肌LC3B的水平,采用免疫组化法检测心肌p62的水平,Western blot法检测心肌LC3-II/I、p62的水平,评估心肌自噬情况。7.CLP术后6h,采用小动物超声仪检测小鼠心功能（LVEF及LVFS）。8.采用HE染色观察小鼠心肌组织形态学变化。采用透射电子显微镜观察小鼠心肌细胞自噬情况。结果:1.与对照组相比,脓毒症组小鼠在CLP术后24h时心肌组织miR-214的表达水平升高了1.52倍。与脓毒症组相比,miRNA-214过表达组小鼠心肌组织miR-214的表达水平升高了3.64倍,miR-214抑制组小鼠心肌组织miR-214的表达水平降低了79.8%。miR-214过表达空白对照组及miR-214抑制空白对照组心肌组织miR-214的表达,与脓毒症组相比差异无统计学意义;2.与脓毒症组相比,过表达miR-214能显着降低脓毒症小鼠血清CK-MB、LDH的水平及TNF-α、IL-10的水平,减轻心肌组织自噬水平,改善心功能,减轻心肌组织的病理损伤;3.与脓毒症组相比,抑制miR-214能显着升高脓毒症小鼠血清CK-MB、LDH的水平及TNF-α、IL-10的水平,提高心肌组织自噬水平,使心功能恶化,加重心肌组织的病理损伤。小结:1.上调miR-214的表达,能抑制脓毒症小鼠心肌自噬,改善心功能。减轻心肌病理损伤。2.下调miR-214的表达,能促进脓毒症小鼠心肌自噬,加重心功能恶化,加重心肌病理损伤。第四部分miR-214通过调控PTEN/Akt/mTOR信号通路抑制心肌细胞自噬目的:明确miR-214是否通过调控PTEN/Akt/mTOR信号通路抑制心肌细胞自噬。方法:1.乳鼠心肌细胞分离和培养:新生1-2天的昆明小鼠表面消毒后取出心脏,D-hanks洗涤心脏,取出心室肌组织剪成小块,消化液消化,直至组织消化完全,收集消化液过滤、离心、重悬后,在含有10%胎牛血清及1%青链霉素的DMEM/F12完全培养基中差速贴壁2h。以0.1m M Brd U的DMEM培养液培养心肌细胞。2.脂多糖诱导的心肌损伤细胞自噬模型的构建:原代培养的乳鼠心肌细胞加入LPS（5μg/m L、10μg/m L、20μg/m L、50μg/m L4个不同终浓度）后培养24小时测定心肌细胞:1)生存率（MTT比色法检测各组细胞活力）2)凋亡率（流式细胞学检测凋亡率）3)自噬（用Western blot检测LC3-Ⅱ/I、p62蛋白水平）4)miR-214表达（RT-qPCR）。根据以上数据,确定LPS实验浓度为10μg/m L。3.LPS对心肌细胞miR-214表达、心肌细胞自噬的作用时间的影响:选择终浓度LPS10μg/m L刺激心肌细胞,分别在6h、12h、18h、24h测定心肌细胞自噬蛋白活性、miR-214表达。4.miR-214过表达和抑制对LPS诱导的心肌细胞自噬的影响:LPS10μg/m L刺激心肌细胞,同时给予miR-214过表达、抑制剂、阴性对照。24h后测定心肌细胞凋亡,Western blot检测LC3-Ⅱ/I、p62、PTEN、Akt、mTOR等自噬蛋白及自噬通路水平。5.PTEN/Akt/mTOR途径抑制剂处理后对LPS诱导的心肌细胞自噬的影响:Western blot检测LC3-Ⅱ/I、p62自噬蛋白水平。结果:1.在LPS（10μg/m L）诱导心肌细胞损伤24h后,心肌细胞存活百分率随浓度升高逐渐下降,与正常对照组相比均有统计学差异（P<0.05）;2.在LPS作用于心肌细胞6h后,心肌细胞存活百分率随LPS浓度升高逐渐下降,与正常对照组相比均有统计学差异（P<0.05）;3.与对照组相比,LPS（24h）组心肌细胞miR-214的表达水平升高了1.64倍。与对照组相比,miR-214过表达组心肌细胞miRNA-214的表达水平升高了10.15倍,miR-214抑制组心肌细胞miRNA-214的表达水平降低了72.56%。miR-214过表达空白对照组及miRNA-214抑制空白对照组心肌细胞miR-214的表达,与LPS组相比差异无统计学意义（P<0.05）;4.过表达miR-214能显着降低心肌细胞LC3-Ⅱ/I、PTEN的表达,升高p62、p/t-Akt、p/t-mTOR的表达,即降低脓毒症小鼠心肌细胞自噬;5.抑制miR-214能显着升高低心肌细胞LC3-Ⅱ/I、PTEN的表达,降低p62、p/t-Akt、p/t-mTOR的表达,即升高脓毒症小鼠心肌细胞自噬水平;6.PTEN抑制剂可抑制心肌细胞自噬,增强过表达miR-214抑制自噬的水平。小结:miR-214通过调控PTEN/Akt/mTOR信号通路抑制心肌细胞自噬。
王垣钰[8]（2021）在《仙桂胶囊协同LCZ696治疗心力衰竭的作用与机制》文中研究指明心力衰竭（Heart failure,HF）是一种是心脏病理性的生理状态。其发病率、死亡率高,由此导致频繁的住院治疗会大幅降低患者的生活质量。沙库巴曲/缬沙坦（LCZ696）是一种新型抗心力衰竭药物,该药物可显着改善患者生存状态。仙桂胶囊（Xian Gui capsule,XG）是一种传统中药,有研究发现仙桂胶囊对心血管具有很好的保护作用。本课题中,我们通过小鼠心力衰竭模型来探究仙桂胶囊、LCZ696及二者组合对心力衰竭的治疗作用及机制。在实验中,将40只6-8周龄雄性C57BL/6J小鼠随机平均分配至对照组、阿霉素组、LCZ696组、仙桂胶囊组及二者组合药物组。对照组小鼠在喂食正常食物的同时每周腹腔注射1次PBS;其他4组利用阿霉素进行造模,5 mg/kg阿霉素溶液注射于小鼠腹腔,每周1次,共计4次;LCZ696组,喂食正常食物并每天灌胃LCZ696;仙桂胶囊组,每天喂食含有仙桂的食物;组合药物组每天灌胃LCZ696并喂食含有仙桂的食物。实验结束后提取小鼠血清和心脏组织研究仙桂胶囊、LCZ696及其组合药物对心力衰竭的作用及机制。研究结果表明,LCZ696及仙桂胶囊单独处理能够显着改善小鼠心功能,调节血压,降低心脏损伤相关生物标志物水平,抑制由阿霉素诱导的小鼠心肌纤维化、心肌细胞氧化应激、炎症及凋亡。LCZ696与仙桂胶囊共处理后,其改善心力衰竭作用进一步增强。从机制上看,LCZ696、仙桂胶囊及二者组合通过抑制α-平滑肌肌动蛋白（α-Smooth muscle actin,α-SMA）,I型胶原蛋白（Collagen type I A1,COL1（32）1）,转化生长因子β1（Transforming growth factor β1,TGF-β1）的表达水平来缓解心肌纤维化。同时,仙桂胶囊、LCZ696和组合药物可促进过氧化氢酶（catalase,CAT）、叉头族转录因子的O亚型（Forkhead box O3a,FOXO3a）及超氧化物歧化酶1/2（Superoxide dismutase 1 or 2,SOD1/2）等抗氧化因子的表达来抑制由阿霉素诱导的小鼠心肌细胞氧化应激。此外,LCZ696、仙桂胶囊及二者组合可显着降低心脏组织中白细胞介素-1β/6/10（Interleukin-1β or 6 or 10,IL-1 β/6/10）、核因子κB（Nuclear factor κB,NF-κB）、Toll样受体4（Toll-like 4,TLR4）和肿瘤坏死因子α（Tumor necrosis factor-α,TNF-α）等因子的含量并调节凋亡相关因子B细胞淋巴瘤-2（B-cell lymphoma-2,BCL-2）和BCL-2相关X蛋白（Bcl2-associated X protein,BAX）的表达。我们的研究还发现,LCZ696处理会导致心力衰竭小鼠血压过低,仙桂胶囊则可以有效拮抗这种副作用。综上所述,仙桂胶囊和LCZ696作为组合药物可显着改善小鼠心功能、缓解心肌损伤并抑制心肌纤维化,具有更强的心脏保护作用。在机制上,仙桂胶囊和LCZ696组合药物通过降低炎症信号通路、提高抗氧化应激因子的表达及调节凋亡相关因子的水平从而拮抗心力衰竭。更重要的是,仙桂胶囊可以改善LCZ696导致的低血压副作用,预示着LCZ696与仙桂胶囊组合药物在临床上可能具有很好的应用潜力。
肖滢[9]（2021）在《可溶性鸟苷酸环化酶激动剂Vericiguat靶向调控AMPK/mTOR及自噬通路抑制病理性心肌肥厚的机制研究》文中研究说明目的:心肌肥厚是导致心力衰竭的重要危险因素。心衰及心肌肥厚过程中NO-sGC-cGMP信号通路功能明显受损,使得机体cGMP含量显着降低。干预NO-sGC-cGMP通路有望成为未来治疗心肌肥厚的潜在治疗靶点。近年来,一种新型的口服长效可溶性鸟苷酸环化酶sGC刺激剂Vericiguat已在心血管疾病治疗领域崭露头角。本研究旨在明确新型sGC激动剂Vericiguat在心肌肥厚中的保护作用,为心力衰竭、肥厚型心肌病及病理性心肌重塑的防治提供一定的理论基础。方法:本研究分为体外部分和体内部分,（一）体外部分:通过AngⅡ刺激建立H9c2心肌细胞肥厚模型,通过CCK-8法确定Vericiguat合适的作用浓度;然后使用流式细胞仪、激光共聚焦显微镜、RT-PCR、western blot检测Vericiguat干预对心肌细胞肥厚、凋亡、活性氧产生以及自噬等信号通路蛋白的作用,进一步通过计算机模拟反向分子对接筛选并验证Vericiguat的潜在靶标。（二）体内部分:使用1.44mg/kg/d剂量浓度的AngⅡ微量缓释泵皮下给药28天,建立小鼠心肌肥厚模型。选取8-10周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为4组:生理盐水缓释泵灌注组（Saline组）,Vericiguat 灌胃组（Ver 组,30mg/kg/d）,AngⅡ缓释泵灌注组（AngⅡ组,1.44mg/kg/d）,AngⅡ缓释泵灌注和Vericiguat灌胃组（AngⅡ+Ver组）。通过酶联免疫吸附实验（ELISA）、免疫荧光染色、激光共聚焦显微镜、组织病理学染色、心脏超声、RT-PCR和Western blot检测小鼠血流动力学、心肌肥厚及间质纤维化水平,氧化应激程度和自噬等信号通路蛋白的改变水平,从而系统评估心肌肥厚时心脏病理性重塑情况。同时通过生物信息学方法分析小鼠心室组织RNA-Seq数据,评估Vericiguat干预心脏肥厚时相关通路调控状态的改变。结果:（一）Vericiguat（10μM）干预处理可显着抑制AngⅡ刺激诱导的H9c2心肌细胞肥大,降低细胞ROS产生,减少心肌细胞凋亡;并通过增加细胞内抗氧化物酶HO-1和SOD蛋白的表达,促进心肌细胞自噬过程,保护心肌细胞。基于放射免疫分析的临近闪烁分析法结果显示,Vericiguat对PDE4D（IC50,6.184μM）和PDE5A（IC50,2.584 μM）均有抑制作用。（二）在Ang Ⅱ诱导的小鼠心肌肥厚损伤模型中,Vericiguat可以显着降低小鼠收缩压、舒张压,改善心肌肥厚与心脏纤维化;抑制VASP、AMPK和mTOR的磷酸化,促进自噬相关蛋白Atg3,Atg5,Beclin-1,LC3Ⅱ/Ⅰ的表达和抗氧化应激系统HO-1/SOD蛋白的表达。使用Vericiguat干预后,可以有效减轻心肌组织氧化应激水平、减少心肌间质纤维化和血管周围纤维化。此外,Vericiguat可分别通过AMPK/mTOR依赖的信号通路及自噬通路保护心脏功能。使用心肌转录组测序技术联合基因集富集分析（GSEA）Vericiguat可以通过调节氧化应激、细胞外基质降解重排、氧化磷酸化、细胞增殖、细胞周期和AMPK/mTOR等关键信号通路,抑制小鼠心肌病理性重构,改善心脏功能。结论:利用体内实验、体外实验发现Vericiguat可以靶向调控AMPK/mTOR和细胞自噬通路,改善心肌肥厚及心脏病理性重塑过程,为研究NO-cGMP-sGC信号通路在心肌重构中的作用提供了新的线索。Vericiguat在改善心室重构的同时,还可减少氧化应激和活性氧的产生,为心肌重构的防控提供新思路。
李阔[10]（2021）在《miR-let-7f在阿尔茨海默病患者的血清含量以及对SHSY-5Y细胞氧化损伤作用机制研究》文中指出阿尔茨海默病（AD）为临床常见的慢性神经系统退行性疾病,包含了精神行为、社会功能和认知功能等多方面的障碍或者异常,同时患者病程表征为进行性发展,具有不可逆性。关于全球范围内AD的2015年报道显示,全世界范围内每3秒就可能出现1例临床新发的患者,而到2050年全世界AD患者可能会升高至1.315亿人左右,同时这其中约70%患者来自发展中国家。临床AD患者人数的不断的增加和发病率的日益升高对世界各国的经济与社会带来了巨大的负担和沉重的压力,在2015年全世界关于AD患者的护理与照料等成本在8200亿美元左右,而发展到2030年该成本可增大到约2万亿美元。同时上述报道还指出全世界范围内AD患者最多的区域为东亚,我国是东亚中人口最多、地理面积最大的国家,特别是近年来,伴随国内老龄化人口的持续增加,AD对我国社会经济、地区与患者家庭均带来了巨大的挑战与负担。近年的研究显示,AD发病机制和微小RNA（miRNA）联系紧密,在机体内正常神经系统中miRNA参加调控了诱导神经干细胞分化、神经系统发育、神经保护、神经元增殖与凋亡、产生树突棘、突触可塑性等不同的信号传导通路、不同生理过程。因此本研究通过分析miR-let-7f在AD患者中的表达以及对SHSY-5Y细胞氧化损伤作用机制,以期为临床患者的诊疗提供更多的实验室依据和理论支撑。本研究将从3个方面开展研究,第一部分研究AD患者血清氧化应激指标表达及与认知功能障碍的相关性,明确AD患者血清氧化应激相关指标（如Mn SOD、GSH-Px、CAT、SOD等）的异常表达。第二部分为分析miR-let-7f在AD患者中的表达及临床意义,以明确miR-let-7f在AD患者中的可能作用。第三部分通过阐明miR-let-7f在SHSY-5Y细胞氧化损伤中的潜在作用,有望进一步明确miR-let-7f在AD发病机理中的分子机制。第一部分阿尔茨海默病患者血清氧化应激指标表达及与认知功能障碍相关性目的:分析AD患者血清氧化应激指标表达及与认知功能障碍相关性情况。方法:回顾性分析于沧州市中心医院治疗AD患者30例作为AD组,选取同期在本院体检的健康者30例作为对照组。记录患者临床资料情况,包含姓名、婚姻史、性别、家族史、年龄、联系电话、体重、身高和生命体征等。记录患者血清氧化指标（Mn SOD、GSH-Px、CAT、SOD、MDA、Hcy）水平和CDR、MMSE评分情况。对AD患者血清氧化指标和CDR、MMSE评分行相关分析。结果:1.AD组患者年龄在58至69岁之间,平均（63.18±10.17）岁,男性16例、女性14例,BMI指数在21.9至26.8 kg/m2之间,平均（25.58±3.20）kg/m2,受教育时间4至16年,平均（11.01±6.14）年,12例有吸烟史,12例有饮酒史,合并症方面:8例有心脏疾病、15例有高脂血症、10例有糖尿病。对照组患者年龄在55至70岁间,平均（66.94±10.84）岁,男性15例、女性15例,BMI指数在21.4至26.9 kg/m2间,平均（24.64±4.10）kg/m2,受教育时间4至15年,平均（9.27±5.10）,13例有吸烟史,14例有饮酒史,合并症方面:9例有心脏疾病、14例有高脂血症、9例有糖尿病,两组患者年龄、性别、合并症、吸烟与饮酒史、受教育时间和BMI指数等对差异无统计学意义（P>0.05）。2.AD组患者血清Mn SOD、GSH-Px、CAT、SOD含量分别为（7.65±1.36）ng/ml、（152.66±40.13）μmol/L、（18.32±2.17）U/ml、（62.01±4.99）U/ml,低于对照组的（12.49±2.18）ng/ml、（199.74±41.82）μmol/L、（18.32±2.17）U/ml、（69.17±4.31）U/ml,AD组患者血清MDA、Hcy含量分别为（6.41±1.60）μmol/L、（29.10±6.47）μmol/L,高于对照组的（4.69±1.74）μmol/L、（23.70±7.52）μmol/L;AD组患者CDR评分为（2.61±0.35）分,高于对照组的0分,MMSE评分为（22.57±3.18）分,低于对照组（27.79±3.15）分,差异均有统计学意义（P<0.05）。3.AD患者血清Hcy、MDA含量和CDR评分为正相关（P<0.05）,AD患者血清Mn SOD、GSH-Px、CAT及SOD含量和CDR评分为负相关（P<0.05）。AD患者血清Hcy、MDA含量和MMSE评分为负相关（P<0.05）,AD患者血清Mn SOD、GSH-Px、CAT及SOD含量和MMSE评分为正相关（P<0.05）。小结:1.相比健康者AD患者血清氧化应激指标出现显着异常;2.AD患者认知功能障碍和血清氧化应激指标存在明显的相关性;3.AD患者机体内氧化平衡损伤可能为导致认知降低的因素。第二部分miR-let-7f在阿尔茨海默病患者的血清表达及临床意义目的:通过分析miR-let-7f在AD患者中的表达及临床意义,以明确miR-let-7f在AD患者中的可能作用。方法:回顾性分析于本院治疗AD患者30例作为AD组,选取同期在本院体检的健康者30例作为对照组。采集患者空腹静脉血5ml放置在无抗凝干燥试管中,离心机4000rmp离心10min,上清液分装在EP管内,保存于﹣80℃冰箱内保存。检测生化指标:血清脂联素（ANP）、总胆固醇（TG）、同型半胱氨酸（Hcy）、甘油三酯（TC）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）采用全自动生化分析仪检测,各项指标的检测都依据仪器和试剂盒的说明书来进行,为了对检测质量进行控制,本研究的全部样品都由检验科的人员在同一台仪器上进行检测,每个样本都重复检测3次。miRNA微阵列分析AD患者中各种miRNA表达水平情况;记录AD组和对照组血清miR-let-7f表达情况;记录AD组和对照组血清ANP、Hcy、TC、TG、HDL-C、LDL-C含量和MMSE评分情况;记录AD患者血清miR-let-7f表达与血清ANP、Hcy、TC、TG、HDL-C、LDL-C含量及MMSE评分相关性情况;对影响AD发病因素的二分类Logistic回归分析。结果:1.和对照组相比,AD患者内出现差异表达的miRNA共11种,其中有6个miRNA,即miR-242、miR-301、miR-134、miR-let-7i、miR-let-7f和miR-34a表达显着升高,而有5个miRNA,即miR-18a、miR-188、miR-214、miR-328和miR-3135a表达显着降低。2.AD组患者血清miR-let-7f表达为（1.84±0.32）,高于对照组的（1.02±0.14）,差异有统计学意义（P<0.05）。3.AD组患者TC、TG和HDL-C含量分别为（1.71±0.84）mmol/L、（21.63±1.77）mmol/L、（1.31±0.40）mmol/L,和对照组的（1.79±0.95）mmol/L、（22.04±1.81）mmol/L、（1.34±0.39）mmol/L对比差异无统计学意义（P>0.05）。AD组患者血清ANP含量、MMSE评分分别为（6.80±2.81）μg/ml、（22.57±3.18）分,低于对照组的（11.91±3.06）μg/ml、（27.79±3.15）分,AD组患者血清Hcy、LDL-C含量分别为（29.10±6.47）μmol/L、（2.85±0.68）mmol/L,高于对照组的（23.70±7.52）μmol/L、（2.37±0.54）mmol/L,差异有统计学意义（P<0.05）。4.AD患者血清miR-let-7f表达和HDL-C、TG与TC含量无相关性（P>0.05）。AD患者血清miR-let-7f表达和MMSE评分、ANP含量为负相关（P<0.05）,和Hcy含量、LDL-C含量为正相关（P<0.05）。小结:miR-let-7f在AD患者血清内高表达,可能参与了患者的发病与病情进展。第三部分miR-let-7f对SHSY-5Y细胞氧化损伤的作用机制研究目的:阐明miR-let-7f在SHSY-5Y细胞氧化损伤中的潜在作用,有望进一步明确miR-let-7f在AD发病机理中的分子机制。方法:培养SHSY-5Y细胞,制备H2O2损伤诱导氧化应激损伤模型,MTT检测细胞活力,流式细胞分析仪检测细胞凋亡情况,miR-let-7f模拟物、miR-let-7f-1抑制剂转染SHSY-5Y细胞,使用q RT-PCR和Western blot进行测量miR-let-7f、AKT-2和凋亡相关蛋白,萤光素酶报告基因检测miR-let-7f和AKT-2的靶向关系。结果:采用0、50、100、200、500μmol/L的H2O2引起SHSY-5Y氧化损伤,结果显示和未处理细胞相比,各剂量组的细胞活力均显着降低（P<0.05）,另外选取200μmol/L的H2O2用于后续实验。流式细胞仪对细胞凋亡检测显示,和对照组相比,应用200μmol/L的H2O2处理的SHSY-5Y细胞凋亡率显着升高（P<0.05）。和对照组相比,H2O2处理组Bcl-2蛋白表达降低,Bax、Caspase-3、Caspase-9蛋白表达升高（P<0.05）。采用miR-let-7f mimic、miR-let-7f inhibitor以及mimic NC、inhibitor NC分别转染SHSY-5Y细胞,q RT-PCR检测显示,相比mimic NC,miR-let-7f mimic组miR-let-7f表达显着升高;相比inhibitor NC,miR-let-7f inhibitor组miR-let-7f表达显着降低（P<0.05）。相比对照组,H2O2处理组细胞活力显着降低,而细胞凋亡率显着升高（P<0.05）;相比mimic NC,miR-let-7f mimic组细胞活力显着升高,而细胞凋亡率显着下降（P<0.05）;相比inhibitor NC,miR-let-7f inhibitor组细胞活力显着降低,而细胞凋亡率显着升高（P<0.05）。在明确miRNA-let-7f为潜在分子改善H2O2导致氧化损伤后,进行广泛生物学信息分析,以确定miRNA-let-7f的靶向基因。通过搜索各种数据库（micro RNA.org和Target Scan）显示,ALT-23’-UTR具有对应的配对和miR-let-7f结合应用,见图9。萤光素酶报告基因测定来检测miR-let-7f和AKT-2的关系,共转染的SHSY-5Y细胞的相对荧光素酶活性明显降低应用miR-let-7f和AKT-2的3’-UTR（P<0.05）。小结:miR-let-7f的上调减轻了H2O2诱发的通过靶向AKT-2对SHSY-5Y细胞的氧化损伤。这些发现为miR-let-7f在AD患者氧化损伤的发病机理中的作用提供了新的视角。
二、一氧化氮在阿霉素心肌病中的病理和生理作用的探讨（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、一氧化氮在阿霉素心肌病中的病理和生理作用的探讨（论文提纲范文）
（1）丹皮酚对阿霉素心肌病的作用及机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略语对照表 |
| 第一章 前言 |
| 1.1 阿霉素心肌病的研究现状 |
| 1.1.1 阿霉素心脏毒性 |
| 1.1.2 阿霉素心肌病的发生机制 |
| 1.1.2.1 活性氧自由基 |
| 1.1.2.2 一氧化氮合酶来源的ROS |
| 1.1.2.3 铁代谢 |
| 1.1.2.4 Ca~(2+)代谢异常 |
| 1.1.2.5 凋亡 |
| 1.1.2.6 其它机制 |
| 1.1.3 中医中药对阿霉素心肌病防治的研究进展 |
| 1.2 丹皮酚研究现状 |
| 1.2.1 抗炎和抗纤维化作用 |
| 1.2.2 心血管保护效应 |
| 1.2.2.1 降脂与抗动脉粥样硬化 |
| 1.2.2.2 减轻心肌缺血损伤 |
| 1.2.2.3 抗心律失常 |
| 1.2.2.4 扩张血管 |
| 1.2.3 其他作用 |
| 第二章 丹皮酚减轻阿霉素心肌病大鼠心肌损伤 |
| 2.1 材料 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 实验试剂 |
| 2.1.3 实验仪器 |
| 2.2 方法 |
| 2.2.1 H9c2/B16 的复苏,培养与冻存 |
| 2.2.2 细胞分组及给药 |
| 2.2.3 CCK-8 法检测细胞活力 |
| 2.2.4 模型构建 |
| 2.2.5 心脏功能检测 |
| 2.2.6 血流动力学 |
| 2.2.7 取材 |
| 2.2.8 WGA染色 |
| 2.2.9 Masson染色 |
| 2.2.10 TUNEL染色 |
| 2.2.11 DHE染色 |
| 2.2.12 电镜观察 |
| 2.2.13 血清检测 |
| 2.2.14 MDA检测 |
| 2.2.15 GPx活性检测 |
| 2.2.16 蛋白提取及定量 |
| 2.2.17 蛋白电泳 |
| 2.2.18 统计学分析 |
| 2.3 结果 |
| 2.3.1 防治阿霉素诱导心肌损伤的潜在中药单体的筛选 |
| 2.3.2 丹皮酚改善阿霉素心肌病大鼠心脏功能障碍 |
| 2.3.3 丹皮酚抑制阿霉素心肌病大鼠心肌肥厚和心肌纤维化 |
| 2.3.4 大鼠血清中心肌损伤标志物的变化情况 |
| 2.3.5 丹皮酚抑制阿霉素心肌病大鼠心肌细胞凋亡 |
| 2.3.6 丹皮酚降低阿霉素心肌病大鼠氧化应激水平 |
| 2.3.7 丹皮酚抑制阿霉素心肌病大鼠心肌线粒体分裂 |
| 2.3.8 大鼠线粒体生物合成和呼吸链复合体相关蛋白变化情况 |
| 2.3.9 丹皮酚上调阿霉素大鼠心肌细胞Mfn2 表达水平 |
| 2.3.10 丹皮酚不影响阿霉素的抗肿瘤活性 |
| 2.4 小结和讨论 |
| 第三章 丹皮酚减轻阿霉素诱导的心肌细胞损伤 |
| 3.1 材料 |
| 3.1.1 实验动物 |
| 3.1.2 实验试剂 |
| 3.1.3 实验仪器 |
| 3.2 方法 |
| 3.2.1 原代心肌细胞的提取 |
| 3.2.2 分组及给药方式 |
| 3.2.3 CCK-8 法检测细胞活力 |
| 3.2.4 LDH试剂盒检测细胞LDH |
| 3.2.5 Mito-Tracker Red检测线粒体形态 |
| 3.2.6 Mito-SOX检测线粒体氧化应激 |
| 3.2.7 TUNEL检测细胞凋亡 |
| 3.2.8 蛋白提取及定量 |
| 3.2.9 蛋白电泳 |
| 3.2.10 统计学分析 |
| 3.3 结果 |
| 3.3.1 丹皮酚减轻阿霉素诱导的心肌细胞活力下降和损伤 |
| 3.3.2 丹皮酚抑制阿霉素诱导的心肌细胞凋亡 |
| 3.3.3 丹皮酚减轻阿霉素诱导的线粒体氧化应激水平 |
| 3.3.4 丹皮酚抑制阿霉素诱导的心肌细胞线粒体分裂 |
| 3.3.5 丹皮酚上调阿霉素处理心肌细胞Mfn2 的表达水平 |
| 3.4 小结和讨论 |
| 第四章 Mfn2 在丹皮酚减轻阿霉素诱导的心肌细胞损伤中的作用 |
| 4.1 材料 |
| 4.1.1 实验动物 |
| 4.1.2 实验试剂 |
| 4.1.3 实验仪器 |
| 4.2 方法 |
| 4.2.1 原代心肌细胞的提取 |
| 4.2.2 腺病毒转染原代心肌细胞 |
| 4.2.3 分组及给药方式 |
| 4.2.4 CCK-8 法检测细胞活力 |
| 4.2.5 LDH试剂盒检测细胞LDH |
| 4.2.6 Mito-Tracker Red检测线粒体形态 |
| 4.2.7 Mito-SOX检测线粒体氧化应激 |
| 4.2.8 TUNEL检测细胞凋亡 |
| 4.2.9 蛋白提取及定量 |
| 4.2.10 蛋白电泳 |
| 4.2.11 统计学分析 |
| 4.3 结果 |
| 4.3.1 敲低Mfn2 阻断丹皮酚减轻阿霉素心肌损伤的作用 |
| 4.3.1.1 敲低Mfn2 阻断丹皮酚抑制线粒体分裂的作用 |
| 4.3.1.2 敲低Mfn2 阻断丹皮酚抑制心肌细胞损伤的作用 |
| 4.3.1.3 敲低Mfn2 阻断丹皮酚减轻心肌细胞氧化应激的作用 |
| 4.3.2 过表达Mfn2 改善阿霉素诱导的心肌细胞损伤 |
| 4.3.2.1 过表达Mfn2 抑制阿霉素诱导的线粒体分裂 |
| 4.3.2.2 过表达Mfn2 减轻阿霉素诱导的心肌细胞损伤 |
| 4.3.2.3 过表达Mfn2 抑制阿霉素诱导的线粒体氧化应激 |
| 4.4 小结和讨论 |
| 结论与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读硕士学位期间取得的科研成果 |
（2）组蛋白H3K9乙酰化修饰通过调控Pik3ca转录参与阿霉素诱导的H9c2细胞凋亡（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 1 前言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 主要试剂和仪器 |
| 2.1.1 主要试剂 |
| 2.1.2 主要仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 细胞培养与实验分组 |
| 2.2.2 染色质免疫共沉淀(ChIP-Seq) |
| 2.2.3 实时定量聚合酶链式反应(rt-PCR) |
| 2.2.4 细胞转染 |
| 2.2.5 细胞免疫荧光(IF) |
| 2.2.6 蛋白质免疫印迹实验(Western blot) |
| 2.2.7 流式细胞术(Annexin V-FITC/PI) |
| 2.2.8 细胞活性实验(CCK8) |
| 2.3 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 阿霉素增加了Pik3ca启动子区组蛋白H3K9 乙酰化水平 |
| 3.2 Pik3ca在阿霉素诱导的H9c2 细胞中表达上调 |
| 3.3 Pik3ca参与了阿霉素诱导的H9c2 细胞凋亡 |
| 3.4 阿霉素激活H9c2 细胞中的PI3K/AKT信号通路 |
| 3.5 沉默Pik3ca可抑制阿霉素诱导的H9c2 细胞中PI3K/AKT信号通路的激活 |
| 3.6 在阿霉素诱导的H9c2 细胞中,激活PI3K/AKT信号通路可以部分逆转沉默Pik3ca的作用 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 综述 阿霉素诱导心肌细胞损伤机制的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（3）基于转录组学与代谢组学体外水平分析探讨阿霉素的心脏毒性作用及其机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略语 |
| 第一部分:硫胺素转运通过H3K9ac相关的反馈环路参与拮抗阿霉素诱导的H9c2细胞凋亡 |
| 1 前言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 H9c2心肌细胞培养 |
| 2.2 新生SD大鼠原代心肌细胞分离与培养 |
| 2.3 免疫荧光 |
| 2.4 RNA-seq |
| 2.5 微阵列数据分析 |
| 2.6 GO和KEGG分析 |
| 2.7 PPI分析 |
| 2.8 代谢组学分析 |
| 2.9 CCK-8法检测细胞存活率 |
| 2.10 Annexin V/PI双染法检测细胞凋亡 |
| 2.11 RNA抽提和定量PCR |
| 2.12 Western-blot |
| 2.13 ChIP-seq和ChIP-qPCR |
| 2.14 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 RNA-seq与GSE42177整合分析鉴定差异基因 |
| 3.2 差异基因的GO与KEGG分析 |
| 3.3 Slc19a2在阿霉素诱导的H9c2细胞和原代心肌细胞中表达上调,并参与拮抗阿霉素诱导细胞凋亡 |
| 3.4 代谢组学分析提示阿霉素干预H9c2细胞后硫胺素消耗增加 |
| 3.5 补充硫胺素减弱阿霉素诱导的H9c2细胞凋亡 |
| 3.6 阿霉素干预H9c2细胞后,上调的Slc19a2可通过调控H3K9ac修饰影响其自身的转录 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 第二部分:阿霉素诱导的H9c2心肌细胞条件培养液通过HNMT/NMH轴促进心肌成纤维细胞的增殖和活化 |
| 1 前言 |
| 2 材料和方法 |
| 2.1 H9c2心肌细胞培养 |
| 2.2 新生SD大鼠原代心肌成纤维细胞分离与培养 |
| 2.3 H9c2心肌细胞与新生大鼠心肌成纤维细胞条件培养模型的设计 |
| 2.4 代谢组学分析 |
| 2.5 NMH定量 |
| 2.6 转染 |
| 2.7 CCK-8法检测细胞存活率 |
| 2.8 EdU法检测细胞增殖 |
| 2.9 免疫荧光 |
| 2.10 RNA抽提和定量PCR |
| 2.11 Western-blot |
| 2.12 统计学分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 在条件培养模型中,阿霉素促进心肌成纤维细胞的增殖和活化 |
| 3.2 NMH在阿霉素诱导的H9c2心肌细胞上清液中显着上调 |
| 3.3 NMH参与了心脏成纤维细胞的增殖和活化 |
| 3.4 Hnmt的敲低减弱了阿霉素诱导的H9c2心肌细胞NMH的释放 |
| 3.5 NMH在条件培养基模型中回复了Hnmt诱导的抗纤维化作用的下调 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 附录 |
| 参考文献 |
| 综述 阿霉素诱导心肌细胞损伤机制的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间科研成果 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（4）紫薯块根花色苷对阿霉素诱导的心脏毒性的改善作用（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略语表 |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 紫薯概述 |
| 1.2 花色苷的研究进展 |
| 1.2.1 花色苷的概述 |
| 1.2.2 花色苷的提取 |
| 1.2.3 花色苷的分离纯化 |
| 1.2.4 花色苷的生物活性 |
| 1.3 阿霉素相关心脏毒性的研究进展 |
| 1.3.1 阿霉素的概述 |
| 1.3.2 阿霉素致心脏毒性的发生主要机制 |
| 1.4 本文的立题依据、研究目的和意义 |
| 第二章 紫薯块根花色苷的分离鉴定及其对DOX诱导的H9C2心肌细胞损伤的保护作用 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 材料与方法 |
| 2.2.1 实验材料的预处理 |
| 2.2.2 主要试剂与仪器设备 |
| 2.2.3 紫薯块根花色苷的制备和纯化 |
| 2.2.4 花色苷最大吸收波长的确定 |
| 2.2.5 总花色苷含量的测定 |
| 2.2.6 紫薯块根花色苷的成分鉴定 |
| 2.2.7 心肌细胞的培养 |
| 2.2.8 细胞的毒性实验 |
| 2.2.9 细胞实验设计 |
| 2.2.10 细胞促炎因子分泌量的测定 |
| 2.2.11 心肌细胞损伤标志物的测定 |
| 2.2.12 统计分析 |
| 2.3 结果与分析 |
| 2.3.1 紫薯块根花色苷的吸收波长分析 |
| 2.3.2 紫薯块根花色苷的大孔树脂AB-8分离 |
| 2.3.3 紫薯块根花色苷的SEPHADEX LH-20分离纯化 |
| 2.3.4 紫薯块根花色苷的成分鉴定 |
| 2.3.5 紫薯块根花色苷对H9C2心肌细胞活力的影响 |
| 2.3.6 紫薯块根花色苷对DOX诱导心肌细胞NO分泌量的影响 |
| 2.3.7 紫薯块根花色苷对DOX诱导心肌细胞TNF-A分泌量的影响 |
| 2.3.8 紫薯块根花色苷对DOX诱导心肌细胞TMAO分泌量的影响 |
| 2.3.9 紫薯块根花色苷对DOX诱导心肌细胞LDH活性的影响 |
| 2.3.10 紫薯块根花色苷对DOX诱导心肌细胞CK活性的影响 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 本章小结 |
| 第三章 紫薯块根花色苷对DOX诱导的小鼠心脏毒性的影响 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料与处理 |
| 3.2.1 材料与处理 |
| 3.2.2 主要试剂与仪器设备 |
| 3.2.3 紫薯块根花色苷的制备和纯化 |
| 3.2.4 动物实验设计 |
| 3.2.5 免疫器官指数的测定 |
| 3.2.6 心脏中炎症和脂质过氧化的测定 |
| 3.2.7 心脏中心脏损伤标志物的测定 |
| 3.2.8 心脏组织的病理学切片 |
| 3.2.9 血清中心脏损伤标志物的测定 |
| 3.2.10 统计分析 |
| 3.3 结果与分析 |
| 3.3.1 紫甘薯块根花色苷对小鼠体重和器官指数的影响 |
| 3.3.2 紫薯块根花色苷对小鼠心脏组织中NO分泌量的影响 |
| 3.3.3 紫薯块根花色苷对小鼠心脏组织中MDA分泌量的影响 |
| 3.3.4 紫薯块根花色苷对小鼠心脏组织和血清LDH活性的影响 |
| 3.3.5 紫薯块根花色苷对小鼠心脏组织和血清CK活性的影响 |
| 3.3.6 紫薯块根花色苷对小鼠心脏组织和血清TNF-α分泌量的影响 |
| 3.3.7 紫薯块根花色苷对小鼠心脏组织和血清TMAO分泌量的影响 |
| 3.3.8 紫薯块根花色苷对小鼠心脏组织形态的影响 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 本章小结 |
| 结论与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
（5）稳心颗粒调控氧化应激和钙循环防治依鲁替尼诱发房颤的效应机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述 |
| 综述一 化疗诱发心脏毒性易感基因的研究进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 稳心颗粒及其主要成分对心肌的保护作用 |
| 参考文献 |
| 前言 |
| 一、依鲁替尼增强小鼠房颤易感性的机制研究 |
| (一) 依鲁替尼通过肌浆网上异常的钙释放和心肌纤维化增强小鼠房颤易感性 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 小结 |
| (二) 依鲁替尼诱发房颤小鼠心房组织的蛋白质组学分析 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 小结 |
| (三) 依鲁替尼诱发房颤小鼠心房组织的蛋白表达验证 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4. 小结 |
| 二、稳心颗粒对依鲁替尼诱发房颤小鼠的分子机制研究 |
| (一) 稳心颗粒治疗房颤的分子靶点预测 |
| 1 方法 |
| 2 结果 |
| 3 小结 |
| (二) 稳心颗粒对依鲁替尼诱发房颤小鼠心房组织的蛋白质组学分析 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 小结 |
| (三) 稳心颗粒对依鲁替尼诱发房颤小鼠钙循环和氧化应激的分子机制研究 |
| 1 实验材料 |
| 2 实验方法 |
| 3 实验结果 |
| 4 小结 |
| 讨论 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（6）右丙亚胺缓解阿霉素导致心房重构的机制研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 前言 |
| 一 实验材料 |
| 二 实验方法 |
| 1 小鼠阿霉素心肌毒性模型的建立与分组 |
| 2 测量小鼠收缩压 |
| 3 心脏超声检查 |
| 4 房颤的诱导 |
| 5 心脏组织取材与测量 |
| 6 离体心脏灌流及心房电学标测 |
| 7 制作石蜡组织切片及病理染色 |
| 7.1 制作石蜡组织切片 |
| 7.2 试剂配方 |
| 7.3 H&E染色 |
| 7.4 Masson染色 |
| 8 制作冰冻组织切片及病理染色 |
| 8.1 制作冰冻组织切片 |
| 8.2 免疫荧光染色 |
| 9 乳大鼠心肌细胞提取与培养 |
| 10 Hela细胞转染与培养 |
| 11 细胞爬片模型制作及病理染色 |
| 12 mRNA表达测定—实时定量PCR法 |
| 12.1 提取组织RNA |
| 12.2 反转cDNA |
| 12.3 Real Time PCR |
| 13 Western blot-蛋白表达 |
| 13.1 试剂及配方 |
| 13.2 组织蛋白提取 |
| 13.3 组织蛋白浓度测定—BCA法 |
| 13.4 Western blot |
| 14 统计学方法 |
| 结果 |
| 1 阿霉素使小鼠左心房扩张并增加房颤易感性 |
| 2 右丙亚胺可缓解阿霉素引起的小鼠各项生理指标异常 |
| 3 右丙亚胺可缓解阿霉素引起的心房扩大和房颤易感性增加 |
| 4 右丙亚胺缓解阿霉素诱导的小鼠心房结构重构 |
| 5 阿霉素抑制小鼠心房缝隙连接蛋白43的表达并使缝隙连接蛋白43的定位重新分布 |
| 6 阿霉素在细胞水平上改变Cx43 的含量、定位和功能 |
| 7 阿霉素诱发房颤早于心室功能下降 |
| 讨论 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间发表论文情况 |
| 致谢 |
（7）miR-214对脓毒症心肌自噬的调控研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 英文缩写 |
| 引言 |
| 第一部分 脓毒症患者的心功能及血浆中miR-214 的表达变化 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 脓毒症小鼠心肌自噬活性和miR-214 表达变化 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 miR-214 对脓毒症小鼠心肌自噬以及心功能的影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第四部分 miR-214 通过调控PTEN/Akt/m TOR信号通路抑制心肌细胞自噬 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 综述 脓毒症心肌病的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（8）仙桂胶囊协同LCZ696治疗心力衰竭的作用与机制（论文提纲范文）
| 致谢 |
| 摘要 |
| ABTRACT |
| 第一章 绪论 |
| 1.1 心力衰竭 |
| 1.1.1 心力衰竭现状分析 |
| 1.1.2 心力衰竭的风险因素 |
| 1.1.3 心力衰竭的发病机制 |
| 1.1.4 心力衰竭的治疗 |
| 1.1.5 心力衰竭的预防 |
| 1.2 阿霉素诱导的心力衰竭 |
| 1.3 仙桂胶囊 |
| 1.4 沙库巴曲/缬沙坦(LCZ696) |
| 1.5 选题依据 |
| 第二章 实验材料与方法 |
| 2.1 实验材料试剂及仪器 |
| 2.1.1 实验动物 |
| 2.1.2 实验耗材 |
| 2.1.3 抗体 |
| 2.1.4 实验试剂 |
| 2.1.5 实验仪器 |
| 2.2 动物模型构建及检测 |
| 2.2.1 分组及造模 |
| 2.2.2 血压记录 |
| 2.2.3 超声波心动图记录 |
| 2.2.4 血清检测 |
| 2.3 心脏病理形态学检测 |
| 2.3.1 组织脱水、包埋与切片 |
| 2.3.2 H&E染色 |
| 2.3.3 天狼猩红染色 |
| 2.3.4 免疫组化染色 |
| 2.4 蛋白质免疫印迹 |
| 2.4.1 原理及流程 |
| 2.4.2 提取总蛋白质 |
| 2.4.3 BCA法测定蛋白质浓度 |
| 2.4.4 配制凝胶 |
| 2.4.5 混合待测蛋白质样品 |
| 2.4.6 电泳 |
| 2.4.7 转膜 |
| 2.4.8 抗原-抗体结合 |
| 2.4.9 ECL显色拍照 |
| 2.5 实时荧光定量PCR |
| 2.5.1 原理及流程 |
| 2.5.2 提取总RNA |
| 2.5.3 反转录PCR |
| 2.5.4 Real-time PCR |
| 2.6 统计学方法 |
| 第三章 实验结果与分析 |
| 3.1 仙桂胶囊和LCZ696组合药物改善小鼠心功能 |
| 3.1.1 仙桂胶囊和LCZ696组合药物治疗心力衰竭实验方案 |
| 3.1.2 仙桂胶囊协同LCZ696改善小鼠心体比 |
| 3.1.3 仙桂胶囊协同LCZ696改善小鼠心功能 |
| 3.1.5 仙桂胶囊协同LCZ696降低心脏损伤相关标志物水平 |
| 3.2 仙桂胶囊和LCZ696组合药物减轻小鼠心肌损伤及纤维化 |
| 3.2.1 仙桂胶囊协同LCZ696减轻小鼠心肌损伤 |
| 3.2.2 仙桂胶囊协同LCZ696缓解心肌纤维化程度 |
| 3.2.3 仙桂胶囊协同LCZ696降低纤维化相关基因水平 |
| 3.3 仙桂胶囊和LCZ696组合药物抑制心脏氧化应激 |
| 3.3.1 仙桂胶囊协同LCZ696在蛋白水平增加抗氧化因子表达 |
| 3.3.2 仙桂胶囊协同LCZ696转录水平促进抗氧化因子表达 |
| 3.4 仙桂胶囊和LCZ696组合药物缓解心肌细胞炎症 |
| 3.4.1 仙桂胶囊协同LCZ696在蛋白水平降低炎症因子表达 |
| 3.4.2 仙桂胶囊协同LCZ696在转录水平减少炎症因子表达 |
| 3.5 仙桂胶囊和LCZ696组合药物抑制心肌细胞凋亡 |
| 3.6 仙桂胶囊调节LCZ696诱导的低血压副作用 |
| 第四章 讨论 |
| 4.1 课题讨论 |
| 4.2 课题结论 |
| 4.3 意义及展望 |
| 参考文献 |
| 攻读硕士学位期间的学术活动及成果清单 |
（9）可溶性鸟苷酸环化酶激动剂Vericiguat靶向调控AMPK/mTOR及自噬通路抑制病理性心肌肥厚的机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略表 |
| 前言 |
| 一、研究背景 |
| 二、研究总体思路 |
| 第一部分 Vericiguat对AngⅡ诱导的H9c2心肌细胞肥大的作用及机制研究 |
| 一、实验材料 |
| 1.1主要实验仪器和设备 |
| 1.2 主要试剂及耗材 |
| 1.3 主要试剂配置 |
| 二、实验方法 |
| 2.1 细胞株及细胞培养 |
| 2.2 细胞总RNA的提取 |
| 2.3 蛋白质免疫印迹(Western blot) |
| 2.4 免疫组织化学(imniunohistoclieinistry,IHC) |
| 2.5 共聚焦激光扫描显微镜(Confocal Laser Scanning Microscopy,CLSM) |
| 2.6 流式细财检测细胞调亡及活性氧产生（Flow Cytometry, FCM〉 |
| 2.7 反向分子对接筛选Vericiguat抗心肌重构的潜在耙标（reverse docking) |
| 2.8 Vericiguat对磷酸二酯酶PDE4D/PDE5A抑制活性检测CSPA) |
| 2.8.1 Vericiguat对PDE4D的活性测试 |
| 2.8.2 Vericiguat对PDE5A的活性测试 |
| 三、统计学分析 |
| 四、实验结果 |
| 4.1 不同浓度Vericiguat对H9c2心肌细胞活力的影响 |
| 4.2 Vericiguat可有效缓解AngⅡ诱导的H9c2心肌细胞肥大 |
| 4.2.1 Vericiguat显着抑制AngⅡ刺激诱导的H9c2心肌细胞肥大 |
| 4.2.2 Vericiguat有效降低AngⅡ诱导的H9c2心肌细胞肥大基因的表达 |
| 4.3 Vericiguat明显减轻AngⅡ刺激诱导的H9c2心肌细胞凋亡 |
| 4.4 Vericiguat明显减少肥大心肌中活性氧(ROS)的产生 |
| 4.5 Vericiguat对AngⅡ诱导的H9c2心肌细胞肥大模型中TGF-β1/Smad2信号通路的影响 |
| 4.6 Vericiguat对AngⅡ诱导的H9c2心肌细胞自噬调节的分子机制 |
| 4.7 Vericiguat对AngⅡ诱导的H9c2心肌细胞肥大模型中HO-1/SOD3蛋白的影响 |
| 4.8 Vericiguat靶向心肌肥厚的机制预测 |
| 4.9 Vericiguat对PDE4D/PDE5A抑制活性检测 |
| 五、讨论与总结 |
| 第二部分 Vericiguat对AngⅡ诱导的小鼠心肌肥厚的作用及机制研究 |
| 一、实验材料 |
| 二、实验方法 |
| 2.1 血管紧张素Ⅱ诱导的心肌肥厚动物模型的建立 |
| 2.1.1 Alzet微量缓释泵预处理 |
| 2.1.2 微量缓释泵手术植入 |
| 2.2 小鼠心脏超声检测 |
| 2.3 蛋白质免疫印迹法检测蛋白表达变化(Western blot) |
| 2.4 HE染色 |
| 2.5 酶联免疫吸附测定小鼠血清BNP含量(ELISA) |
| 2.6 CODATM无创小鼠血压测量 |
| 2.7 小鼠左室心肌组织转录组生物信息学分析(RNA-seq) |
| 2.7.1 转录组样本的制备和后续检测 |
| 2.7.2 转录组数据分析 |
| 2.8 苦味酸-天狼猩红染色(Picric acid-Sirius red,PSR) |
| 2.9 马松三色染色(Masson's trichrome staining) |
| 2.10 苏木素-伊红染色(H&E staining) |
| 三、统计学分析 |
| 四、实验结果 |
| 4.1 AngⅡ诱导的小鼠心肌肥厚模型的建立及动物实验技术路线 |
| 4.2 心脏超声评估Vericiguat对小鼠心功能的影响 |
| 4.3 Vericiguat可减轻心肌肥厚小鼠心重/体重比 |
| 4.4 Vericiguat可以显着抑制AngⅡ刺激诱导的小鼠血压升高 |
| 4.5 Vericiguat可改善AngⅡ诱导的小鼠心肌肥厚 |
| 4.6 Vericiguat逆转AngⅡ诱导的小鼠心肌肥厚及病理性心脏重塑 |
| 4.6.1 Vericiguat有效改善小鼠心肌间质纤维化及心脏血管周围纤维化 |
| 4.6.2 Vericiguat显着降低小鼠心脏纤维化相关基因(Col1a1,Col3a1,α-SMA)的mRNA表达水平 |
| 4.6.3 Vericiguat明显降低小鼠心脏结构重构相关蛋白(MMP9,CaMKⅡ,α-SMA)的表达水平 |
| 4.7 转录组差异表达基因(RNA-seq) |
| 4.7.1 差异表达基因GO富集分析 |
| 4.7.2 差异表达基因KEGG富集分析 |
| 4.7.3 差异表达基因Reactome富集分析 |
| 4.7.4 差异基因集富集分析(GSEA) |
| 4.7.5 肥厚小鼠心肌组织差异基因集富集分析(GSEA) |
| 4.7.6 Vericiguat治疗后小鼠心肌组织差异基因集富集分析(GSEA) |
| 4.8 Vericiguat对AngⅡ诱导的小鼠心肌自噬相关蛋白的影响 |
| 4.9 Vericiguat对AngⅡ诱导的小鼠肥厚心肌中AMPK/mTOR信号通路的影响 |
| 4.10 Vericiguat显着降低AngⅡ诱导的小鼠肥厚心肌中VASP蛋白磷酸化 |
| 4.11 Vericiguat明显增强AngⅡ诱导的小鼠肥厚心肌中抗氧化蛋白酶的表达(HO-1,SOD2,SOD3) |
| 4.12 Vericiguat可以在动物水平下调ACE1的蛋白表达 |
| 4.13 Vericiguat可显着降低AngⅡ诱导的小鼠血清BNP水平 |
| 五、讨论与总结 |
| 参考文献 |
| 综述: NO-sGC-cGMP信号通路在心衰及心肌肥厚中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读博士期间科研工作 |
| 致谢 |
（10）miR-let-7f在阿尔茨海默病患者的血清含量以及对SHSY-5Y细胞氧化损伤作用机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩写 |
| 引言 |
| 第一部分 阿尔茨海默病患者血清氧化应激指标表达及与认知功能障碍相关性 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 miR-let-7f在阿尔茨海默病患者的血清表达及临床意义 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 miR-let-7f对SHSY-5Y细胞氧化损伤的作用机制研究 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 综述 阿尔茨海默病病理生理机制中氧化应激的作用与干预策略研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
四、一氧化氮在阿霉素心肌病中的病理和生理作用的探讨（论文参考文献）
- [1]丹皮酚对阿霉素心肌病的作用及机制[D]. 史睿. 西北大学, 2021(12)
- [2]组蛋白H3K9乙酰化修饰通过调控Pik3ca转录参与阿霉素诱导的H9c2细胞凋亡[D]. 杨柳. 中国医科大学, 2021(02)
- [3]基于转录组学与代谢组学体外水平分析探讨阿霉素的心脏毒性作用及其机制研究[D]. 于洋. 中国医科大学, 2021(02)
- [4]紫薯块根花色苷对阿霉素诱导的心脏毒性的改善作用[D]. 唐思学. 扬州大学, 2021(09)
- [5]稳心颗粒调控氧化应激和钙循环防治依鲁替尼诱发房颤的效应机制[D]. 杨欣宇. 北京中医药大学, 2021(01)
- [6]右丙亚胺缓解阿霉素导致心房重构的机制研究[D]. 谭若朋. 大连医科大学, 2021(01)
- [7]miR-214对脓毒症心肌自噬的调控研究[D]. 桑珍珍. 河北医科大学, 2021(02)
- [8]仙桂胶囊协同LCZ696治疗心力衰竭的作用与机制[D]. 王垣钰. 合肥工业大学, 2021(02)
- [9]可溶性鸟苷酸环化酶激动剂Vericiguat靶向调控AMPK/mTOR及自噬通路抑制病理性心肌肥厚的机制研究[D]. 肖滢. 北京协和医学院, 2021(02)
- [10]miR-let-7f在阿尔茨海默病患者的血清含量以及对SHSY-5Y细胞氧化损伤作用机制研究[D]. 李阔. 河北医科大学, 2021(02)