一、子宫内膜体外三维重建的形态学研究（论文文献综述）
董重阳[1]（2019）在《蒙药蓝刺头调控FoxO/Wnt/β-catenin通路防治绝经后骨质疏松症的实验研究》文中进行了进一步梳理目的:证实蒙药蓝刺头抗氧化应激防治绝经后骨质疏松症的作用;阐明其调控FoxO/Wnt/β-catenin信号通路介导成骨细胞分化与骨形成的机理;明确蒙药蓝刺头抗氧化应激相关调控机制及效应靶点。为蒙医药基于“补暖补精-清镇赫依-固骨质壮骨”的经典理论、通过抗氧化应激防治绝经后骨质疏松提供实验依据,丰富蒙医药基础理论现代化的内涵。方法:分组:6月龄SD系SPF级健康雌性未孕大鼠84只（体重250±20g）,随机数字表法分为7组:假手术组（Sham）、去卵巢骨质疏松模型组（OVX）、蒙药蓝刺头高剂量组（Echinops-H）、中剂量组（Echinops-M）、低剂量组（Echinops-L）,中药对照组淫羊藿组（HEP）、西药对照组辅酶Q10组（Co-Q10）。造模:采用双侧卵巢切除法（去势）制备绝经后骨质疏松模型[1],阴道上皮角化实验、骨密度检测、子宫病理学检查验证造模成功。给药:术后90d,除模型组和假手术组给予生理盐水灌胃外,其余各组按照方案给予相应药物干预。标本采集:末次灌胃后,腹主动脉穿刺采血离心血清;处死剔除双侧完整股骨、胫骨,右侧股骨、胫骨4%多聚甲醛溶液固定,左侧股骨、胫骨-196℃液氮贮存罐保存。指标检测:ELISA法测定血清标骨钙素、护骨素等骨代谢相关指标及超氧化物歧化酶、谷胱甘肽过氧化物酶、还原型谷胱甘肽的等氧化应激指标。采用RT-PCR测定调节目标基因表达的核内受体转录因子:过氧化物酶体增殖剂激活受体-γ、成骨细胞分化转录因子蛋白、破骨细胞抑制因子护骨素的基因表达。左侧股骨采用Western blot法检测骨组织中p-p66（S36）、p66、β-catenin、Wnt2、FoxO3a蛋白表达。右侧股骨采用骨密度仪测定离体骨骨密度,Micro-CT进行骨微结构的形态计量学测定。结果:1.大鼠骨密度、骨形态学计量测定结果:与Sham组比较,OVX组大鼠股骨近端BMD和股骨总BMD均明显降低（P<0.05）;骨微结构的形态计量学表达上,OVX组骨微结构骨小梁立体网状结构异常,骨体积分数（BV/TV）、结构模型指数（SMI）、骨小梁体积（TBV,trabecular volume）、骨小梁宽度（Tb.W,trabecular width）、骨小梁数量（Tb.N）、骨小梁厚度（Tb.th）均明显降低（P<0.05）,骨小梁间距（Tb.Sp）增大（P<0.05）。与OVX组比较,蒙药蓝刺头高、中、低剂量组、中药对照组淫羊藿组、西药对照组辅酶Q10组、假手术组的BMD及骨微结构、骨形态计量学明显改善。2.大鼠骨组织学计量测定结果（HE染色）:骨组织学检测结果示:与假手术组比较,模型组大鼠可见脂肪细胞密度与脂肪细胞直径显着增高,具有统计学意义（P<0.05）;与假手术组比较,蒙药蓝刺头高、低剂量组脂肪细胞密度与脂肪细胞直径增高,有统计学差异（P<0.05）;与模型组比较,蒙药蓝刺头中剂量组、淫羊蕾组脂肪细胞密度与脂肪细胞直径有统计学差异（P<0.05）,提示其对抗骨质破坏效果显着。3.血清骨代谢指标变化:与假手术组（Sham）相比较,模型组（OVX）大鼠血清护骨素（OPG）含量明显降低,且骨钙素（BGP）的含量明显升高（P<0.05）,有统计学意义。与OVX组比较,蒙药蓝刺头高（Echinops-H）、中（Echinops-M）、低剂量组（Echinops-H）、中药对照组淫羊藿组（HEP）、西药对照组辅酶Q10组（Co-Q10）、Sham组的血清护骨素（OPG）含量明显降低,且骨钙素（BGP）的含量明显升高（P<0.05）,有统计学意义。4.血清中氧化应激相关指标变化:与Sham组比较,OVX组大鼠血清抗氧化应激相关指标含量均明显降低（P<0.05）,有统计学意义。与OVX组比较,蒙药蓝刺头各剂量组、中药西药对照组、假手术组抗氧化应激指标均明显增高（P<0.05）,有统计学意义。5.Western blot法检测骨组织中相关蛋白的表达:与Sham组相比较,OVX大鼠β-catenin、Wnt蛋白的表达均明显降低（P<0.05）,FoxO3a表达明显升高（P<0.05）,有统计学意义。与OVX组比较,Echinops-H、Echinops-M、Echinops-L、HEP、Co-Q10 组、Sham 组β-catenin、Wnt2 蛋白的含量均明显增高（P<0.05）,FoxO3a蛋白的含量明显减低（P<0.05）,有统计学意义。6.RT-PCR测定调节目标基因表达的相关因子表达:与Sham组相比较,OVX组大鼠Runx2、OPG的表达均明显降低（P<0.05）,有统计学意义;OVX 组 PPAR-γ明显升高（P<0.05）。与 OVX 组比较,Echinops-H、Echinops-M、Echinops-L、HEP、Co-Q10 组、Sham 组βRunx2、OPG 的表达均明显增高,PPAR-γ明显降低（P<0.05）,有统计学意义。结论:实验结果显示:蒙药蓝刺头对绝经后骨质疏松症模型大鼠具有显着的抗骨质疏松症作用;蒙药蓝刺头能够显着改善绝经后骨质疏松症模型大鼠的氧化应激状态;蒙药蓝刺头可以交叉调控FoxO/Wnt/β-catenin通路,抑制氧化应激中FoxO的转录,上调Wnt的表达,促进模型大鼠骨组织成骨分化、骨形成;蒙药蓝刺头可以降低骨质疏松症模型大鼠骨代谢高转换相关指标,抑制骨吸收。本研究表明:蒙医药防治绝经后骨质疏松“补暖补精-固骨质壮骨”的生物效应可能通过促进骨组织成骨分化、骨形成的机制实现;蒙医药“清镇赫依-固骨质壮骨”的生物效应可能通过抗氧化应激机制实现。本研究丰富了蒙医“补暖补精-清镇赫依-固骨质壮骨”理论的科学内涵,从现代生物学角度揭示了此理论与治法的效应途径。
易颂平[2]（2014）在《基于CTA三维重建子宫内膜癌患者血管指数与MVD关系的研究》文中进行了进一步梳理研究背景子宫内膜癌（Endometrial Carcinoma）是女性生殖系统常见恶性肿瘤之一,占女性生殖系统肿瘤的30～40%；它又是妇女常见的癌瘤,发病率排在乳腺癌、肺癌、结肠癌之后,位列第四。在过去20-30年里,子宫内膜癌的发病率呈明显上升趋势。尽管国内外妇科肿瘤学者做了大量的研究工作,但并未改善子宫内膜癌患者的总体生存率。对子宫内膜癌的病变范围及预后影响因素作出评估,结合患者全身状况,选取合适的治疗方案,对患者施行个体化治疗,已成为当前趋势。因此,在术前预判分期,对子宫内膜癌治疗方案的预定有着重要意义。传统的术前预判子宫内膜癌分期的方法有分段诊刮、MRI检查及宫腔镜检查。分段诊刮受操作者的临床经验影响,准确率不高；MRI检查费用较高,判断淋巴结转移的敏感性较低,其主要价值是对肌层浸润的判断。宫腔镜检查在一定程度上可以减少小的局限性病灶的漏诊以及提高宫颈侵犯的诊断率,但无法判断宫壁的浸润深度以及盆腔内的转移情况,故三种检查方法都有一定的缺陷和不足。血管生成（Angiogenesis），是指在业已存在的血管网的基础上形成新的毛细血管。它是生长中的肿瘤形成新生血管,从而获得营养及氧气的必要条件,是肿瘤生长和转移的必要环节。研究证实,血管生成与子宫内膜癌的FIGO分期及预后相关。通过免疫组织化学方法,计数肿瘤微血管密度（Micomvessel density，MVD）,是目前评价肿瘤血管生成的常用方法,被广泛认为是评价肿瘤血管生成情况的金标准。但这种方法基于手术切除的失活组织标本,受医师取材及阅片经验影响,对术前评估肿瘤进展程度与预后的意义不大。有学者应用三维能量多普勒超声观测子宫内膜癌病灶的血管分布,计算血管指数（Vascularity Index,VI）发现,内膜区血管指数与MVD呈良好的线性相关,且与子宫内膜癌的肌层浸润深度及分期相关。既往学者所用的计算VI的方法,须患者密切配合,受操作者影响较大,可重复性低。且三维成像图像质量差,容易引起错误判读。国内多个单位利用三维多普勒超声测量子宫内膜癌患者病灶VI值,所得数据相差甚远。说明三维超声观察子宫内膜癌血管生成的方法主观掺杂成分较多,难以做到标准化,不利于指导临床实践。CT血管造影（Computed Tomography Angiography,CTA）是一种无创的血管造影检查方法,可以更好地显示精细的盆腔动脉血管网,且较数字减影血管造影（DSA）更为便捷。多排CTA及其三维重建后处理技术可提供立体化的三维血管模型,从而使客观准确地观察肿瘤血管形态、计算VI成为可能。为此,我们基于64排螺旋CT薄层扫描数据,利用腹部CT图像后处理软件,对一组子宫内膜癌患者的盆腔CTA数据集进行处理,着重重建内膜区及其周边的子宫细小血管,观察肿瘤血管形态,计算内膜区VI,并探讨VI与微观血管生成指标及FIGO分期之间的关系,把CTA三维重建技术应用于在体水平肿瘤血管生成情况的评估,为术前预判子宫内膜癌分期,制定合理的治疗方案提供一种新的参数。目的：基于多排CTA数据,构建在体子宫内膜癌患者盆腔数字化模型,进行肿瘤血管形态学分级、计算内膜区血管指数（VI）并与术后病理切片肿瘤微血管密度（MVD）进行对比分析,从而了解肿瘤血管分级、VI与血管生成之间的关系,为在体评价肿瘤血管生成情况提供一种新的影像学方法。Ⅵ与术后FIGO分期进行对比分析,了解VI与FIGO分期间的关系,为术前预判子宫内膜癌患者分期、制定合适的治疗方案提供一个新的参考指标。研究对象：收集我院自2011年6月至2014年2月经分段诊断性刮宫及病理检查证实的53例子宫内膜癌患者的64排螺旋CT血管成像（CTA）数据。行CTA检查前均取得患者知情同意,签署知情同意书。患者年龄39-84岁,中位年龄55岁；其中绝经者40例,未绝经者13例；均无三苯氧胺及近期雌孕激素服用史,否认既往盆腔手术史及放疗史。53例患者CTA检查后接受子宫内膜癌分期手术,其中3例患者分别因高龄（84、83岁）、2型糖尿病、高血压病极高危等未行淋巴结清扫或活检,根据术后病理结果,FIGO分期仍均在Ⅲ期以上,统计时予以保留。余下各患者均接受满意的子宫内膜癌分期手术。术后对切除组织行病理切片检查及CD34免疫组化染色,根据术后病理结果,按国际妇产科联盟（FIGO）2009年的标准分期。其中,Ⅰ期40例,其中ⅠA期26例,ⅠB期14例；Ⅱ期5例；Ⅲ期或以上8例,其中ⅢA期2例,ⅢB期1例,ⅢC1期3例,NB期2例。研究方法：一、CTA检查及三维重建：1.常规平扫时患者取仰卧位,头足方向,扫描范围：由双肾动脉水平至股骨大转子下3cm。扫描条件：120KV、250mAs,采用0.625×64排探测器组合,层厚5mm、间隔5mm,螺距0.984,球管旋转一周时间为0.5s。患者检查前禁食至少6-8h,扫描前半小时口服1000ml清水以充盈膀胱。先行平扫后再进行增强扫描。增强扫描采用自动高压注射器,按1.5ml/kg计算剂量,以4.5ml/s的速率,经肘正中静脉注射非离子碘造影剂优维显（ultravist）.对比剂注射完毕后再以相同速率加注生理盐水20ml。腹主动脉血管造影剂浓度梯度达到200HU,再延迟5-7s为采集起点,静脉期起点延时85-90s。扫描结束后将图像数据传至Mxview工作站。数据格式为DICOM（Digital Imaging and Communications in Medicine）3.0。2.将DICOM格式数据拷盘,导入腹部CT图像后处理软件中,以自适应的区域生长法对盆腔各系统进行序列分割,使用该软件自带的“包围盒”工具分割子宫,并利用“血管增强”工具包,着重重建子宫血管。重建静脉期数据中增强较弱的子宫内膜范围,并将其定义为内膜区；如有宫腔积液,则另单独重建水样密度的宫腔积液范围。得到STL（STereo Lithography）格式数据。重建后的STL模型导入Free Form Modeling System进行平滑和修饰,得到光滑逼真的盆腔三维图像,立体观察解剖结构。3.将宫腔积液从内膜区三维模型中去除,利用Free Form Modeling System中的体积测量工具,测量子宫内膜区的体积。并参考Cheng等人推荐的标准,将肿瘤血管分为4级：Ⅰ级：内膜区内部及周边未见血管。Ⅱ级：内膜区周边可见弧形或短条状血管,内部无血管分布。Ⅲ级：除周边血管外,内膜区内部可见稀疏血管,分支简单,走行较平直。Ⅳ级：内膜区内部可见丰富的血管树或血管网,分支复杂,血管走行迂曲不规则,内膜周边可见血管包绕。4.按以下标准,计算内膜区血管条数：（1）如果一条血管行走无分支,则计为一支血管。（2）如果一支血管内有分支,则以末梢血管分支数为计数标准。内膜区血管条数除以内膜区体积,所得值为内膜区VI。二、免疫组化染色：采用链霉菌抗生物素蛋白—过氧化物酶连接法（S-P法）,取已知阳性片作阳性对照,PBS代替第一抗体作阴性对照。参照Weidner等人提出的标准,凡呈现棕色单个内皮细胞或内皮细胞群形成的管状、裂隙状、囊状和空泡状染为黄褐色的结构即判定为可计数的血管,但肌层较厚及管腔直径大于8个红细胞直径的血管不计数。在低倍（100×）视野下检查微血管染色情况,取3个癌巢间质血管最多的视野,高倍镜下（400×）计数每个区域的MVD,其平均值即作为该例患者的肿瘤MVD。结果：1.我们成功构建了子宫内膜癌盆腔数字化模型,该模型重建后显示双侧髂内、髂外动脉及其分支、子宫动脉及其上行分支、子宫、子宫内膜及子宫肌层等结构。真实反映了子宫内膜癌患者在体状态下的双侧子宫动脉上行支、子宫肌层弓状血管及其进入肌层的放射状分支的走行情况、子宫内膜区的范围,同时也真实生动地再现了子宫内膜区及其周边的细小血管形态。血管重建效果逼真,管壁光滑,界限清晰。大多数子宫内膜癌患者内膜区周边或内部可见新生血管。2.肿瘤血管形态学分级为Ⅰ级的有2例,由于其例数过少,内膜区内部及周边均无血管显影,无法计算VI,统计时将其剔除。余下51例子宫内膜癌患者,子宫内膜组织MVD均值为11.83±3.03。VI均值为0.586±0.098,两变量相关分析显示VI与MDV呈正相关（r=0.695,p<0.001）。3.Ⅱ级血管20例,MVD均值为10.52±2.17；Ⅲ级血管19例,MVD均值为12.26±2.84；Ⅳ级血管12例,MVD均值为13.33±3.80。各级肿瘤血管子宫内膜癌患者的MVD不同,差别有统计学意义（F=3.976,p=0.025）。MVD与肿瘤血管分级正相关（r=0.373,p=0.007）。4.根据术后FIGO分期：ⅠA期组子宫内膜癌患者VI均值为0.513±0.064；ⅠB期VI均值为0.580±0.070；Ⅱ期组VI均值为0.684±0.051；≥Ⅲ期组VI均值为0.726±0.048。经统计分析,各FIGO分期子宫内膜癌患者VI不同,差别有统计学意义（p<0.001）。Spearman秩相关示VI值与FIGO分期呈正相关（r=0.714,p<0.001）,FIGO分期越高,VⅣ越高。结论：1.本研究按照前期研究得出的扫描条件及参数,基于薄层盆腔CTA数据,利用腹部CT图像后处理系统,构建出在体子宫内膜癌患者的数字化盆腔解剖模型,立体观察子宫内膜区及其周围细小血管的走行、分支及分布情况。2.通过立体观察所建立的模型,可以更可靠准确地进行肿瘤血管分级、计算血管指数。3.对子宫内膜癌患者的血管分级与MVD进行统计,肿瘤血管分级不同,MVD也不同,两者之间呈正相关。对这些患者的VI与MVD进行统计,VI越高,MVD也越高,两者亦呈正相关。4.基于CTA三维重建技术,进行肿瘤血管分级、计算VI,是在体情况下、原位评价肿瘤血管生成情况的有效方法。5.经统计,不同期别的子宫内膜癌患者用基于CTA三维重建的VI计数也不同,FIGO分期与VI呈正相关。6.通过CTA三维重建计算VI,对术前预判子宫内膜癌FIGO的分期有一定帮助。
单铁英[3]（2014）在《人子宫内膜的体外构建及Ang-（1-7）和AngⅡ对子宫内膜细胞和子宫内膜组织的影响》文中认为目的：宫腔粘连或纤维化是指因不规范宫腔操作、人工流产术、继发感染等原因所造成的子宫腔部分或全部粘连而引起的一组症候群。其发生率为20-30%。临床上常出现月经减少、闭经和不育。这一不良结局主要体现在不孕不育的人群逐渐增加。即使采取手术治疗，粘连再形成率高达50%。随着辅助生殖技术的发展，许多相关问题得到解决，但在辅助助孕妊娠失败病例中有相当一部分由宫腔粘连或纤维化导致。目前对于子宫粘连或纤维化的机制还不清楚，国内外尚缺少有效的诊断与防治手段。因此，急需相关基础与临床研究，阐明子宫内膜粘连或纤维化的机制，从而研发新的诊治技术，预防并进行有效治疗。本研究探讨以人子宫内膜上皮细胞和基质细胞作为种子细胞，以Ⅰ型液态鼠尾胶原和Matrigel胶为生物支架能否在体外按自然状态的子宫内膜结构构建出具有三维立体结构的组织工程化子宫内膜，并且对其进行形态学与免疫组织化学分析；从而将为子宫内膜的研究提供有益的实验模型,并为最终构建具有完整结构的组织工程化子宫提供实验依据。在细胞、基因和蛋白水平，探讨血管紧张素-（1-7）[Ang-（l-7）]和血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对人子宫内膜上皮细胞和基质细胞数目和活性的影响，并且探讨Ang-（l-7）和AngⅡ对在体外构建的人子宫内膜组织的影响，为子宫内膜粘连或纤维化的防治提供新的思路和理论依据。方法：1人子宫内膜上皮细胞（EECs）和基质细胞（ESCs）的分离、纯化、培养及鉴定采用酶消化和离心法在体外分离、纯化和培养原代人子宫内膜上皮细胞和基质细胞，用4%台盼蓝染色进行活细胞计数和观察细胞活力；采用光学显微镜、倒置显微镜和H&E染色观察子宫内膜上皮细胞和基质细胞的形态和结构；用免疫细胞化学方法鉴定子宫内膜上皮细胞和基质细胞；用MTT法观察雌二醇（E2）和孕酮（P4）对上皮细胞和基质细胞增殖的影响。2体外子宫内膜三维立体结构的构建，培养及鉴定制备Ⅰ型液态鼠尾胶原，以Ⅰ型液态鼠尾胶原和Matrigel为生物支架,将分离出的子宫内膜基质细胞培养传代后作为种子细胞，接种在胶原中形成基质细胞-胶原复合物，等其凝固后,再把Matrigel覆盖在复合物上,把上皮细胞接种在Matrigel上,在体外按自然子宫内膜的结构构建出具有三维立体结构的组织工程化子宫内膜,并且对其进行形态学与免疫组织化学分析。3血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）对人EECs增殖的影响体外培养正常人EECs，采用MTT法观察不同浓度（10-6mol/L、10-7mol/L、10-8mol/L、10-9mol/L） AngⅡ作用EECs24h、48h和72h后对其增殖的影响。4血管紧张素-（1-7）[Ang-（1-7）]对AngⅡ诱导的EECs增殖的影响观察不同浓度（10-5mol/L、10-6mol/L、10-7mol/L、10-8mol/L） Ang-（1-7）和AngⅡ（10-6mol/L）对EECs作用24h、48h和72h后增殖的影响。5Ang-（1-7）和AngⅡ对的子宫内膜上皮细胞活性的影响体外培养正常人EECs，将细胞分为对照组、AngⅡ（10-6mol/L）组，Ang-（1-7）（10-5mol/L）组和AngⅡ+Ang-（1-7）组。继续培养细胞72h后，用免疫细胞化学染色法检测EECs中的α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）和上皮性钙粘附素（E-cadherin）的表达水平;用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测上清液中细胞外基质成分Ⅰ型胶原（ColⅠ）和纤粘连蛋白（FN）的含量;用western blot检测EECs中α-SMA和E-cadherin的表达水平；Real time PCR检测α-SMAmRNA、E-cadherin mRNA、FN mRNA和Col I mRNA的表达水平。6AngⅡ对ESCs增殖的影响体外培养正常人ESCs，采用MTT法观察不同浓度（10-6mol/L、10-7mol/L、10-8mol/L、10-9mol/L） AngⅡ作用子宫内膜基质细胞24h、48h和72h后对其增殖的影响。7Ang-（1-7）对AngⅡ诱导的ESCs增殖的影响观察不同浓度（10-5mol/L、10-6mol/L、10-7mol/L、10-8mol/L） Ang-（1-7）和AngⅡ（10-6mol/L）作用ESCs24h、48h和72h后对其增殖的影响。8Ang-（1-7）和AngⅡ对的ESCs活性的影响体外培养正常人ESCs，将细胞分为对照组、AngⅡ（10-6mol/L）组，Ang-（1-7）（10-5mol/L）组和AngⅡ+Ang-（1-7）组。继续培养细胞72h后，用免疫细胞化学染色法和western blot检测ESCs活化标志物α-平滑肌肌动蛋白（α-SMA）、转化生长因子β1（TGF-β1）和胰岛素样生长因子I（IGF-I）的表达水平；用酶联免疫吸附实验（ELISA）检测上清液中TGF-β1、IGF-I、ColⅠ和FN的含量；Rime Time PCR检测ESCs中ColⅠmRNA、FNmRNA、α-SMA mRNA、TGF-β1mRNA和IGF-I mRNA的表达水平。9Ang-（1-7）和AngⅡ对的子宫内膜组织活性的影响在体外构建子宫内膜的三维立体结构模型，将构建的子宫内膜分为四组：对照组、Ang-（1-7）组、AngⅡ组和Ang-（1-7）+AngⅡ组，用western blot检测子宫内膜的α-SMA、TGF-β1和IGF-I蛋白表达水平；Real Time PCR检测子宫内的α-SMAmRNA、TGF-β1mRNA和IGF-I mRNA的表达水平。结果：1子宫内膜上皮细胞及基质细胞的分离、培养与鉴定用离心法获得的的子宫内膜上皮细胞在倒置显微镜下观察呈团状或葡萄串状，其细胞纯度>90%。4%的台盼蓝溶液检测细胞存活率达92%～96%，24h后已贴壁生长，3天后细胞长成旋涡状排列的致密单层细胞集落，单个细胞形态呈类圆形或椭圆形，细胞核大而圆，一个，多位于细胞的中央，核仁明显。用DMEM/F12和10%的胎牛血清培养子宫内膜上皮细胞不能传代。H&E染色并在光学显微镜下观察：上皮细胞形态呈类圆型或蝌蚪型，细胞核大而圆，一个，多位于细胞的中央，核仁明显，染色质疏松浅染；细胞质相对较多，胞质呈颗粒状，嗜酸性。免疫细胞化学检测结果显示：可见上皮细胞胞质Cytokeratin染色阳性，呈棕黄色，细胞核为阴性，不显色，而vimentin染色阴性。用离心法获得的子宫内膜基质细胞在倒置显微镜下观察呈单个分散的细胞，其细胞纯度>92%。4%的台盼蓝溶液检测细胞存活率达95%～98%，将分离的基质细胞接种在培养瓶中培养，2h已开始贴壁，12h已开始生长，细胞体向两端突起，似出芽。细胞生长约3～4天即聚合成片。用DMEM/F12和10%的胎牛血清培养子宫内膜基质细胞可以传3～4代，培养早期的细胞光镜下可见两种形态，多数为梭形，另一种为多边形或星形，细胞核大呈椭圆形，一个，多位于细胞的中央，核仁明显。H&E染色并在光学显微镜下观察：基质细胞形态呈梭形、多边形或星形，细胞核大呈椭圆形，一个，多位于细胞的中央，核仁明显，染色质疏松浅染；细胞质相对较多，胞质呈嗜酸性，染为粉红色。免疫细胞化学检测：可见基质细胞胞质vimentin染色阳性，呈棕黄色，细胞核为阴性，不显色，而Cytokeratin染色阴性。MTT法观察雌二醇（E2）和孕酮（P4）对上皮细胞和基质细胞增殖的影响：E2和P4单独作用并不能显着增加子宫内膜上皮细胞增殖（P>0.05）,但100nmol/L的E2和10nmol/L的P4对子宫内膜上皮细胞的增殖作用显着（P<0.05），实验的研究发现,当上皮细胞与少量基质细胞混合培养在100nmol/L的E2和10nmol/L的P4的环境下时，上皮细胞能够很好地传至5～6代,而100nmol/L的P4对子宫内膜基质细胞的增殖作用显着（P<0.05）。2体外构建子宫内膜三维立体结构的培养及鉴定构建具有两层结构的组织工程化子宫内膜在DMEM/F12培养液中培养第三天时，片层开始收缩,并随时间的延长，收缩逐渐明显。四根玻璃柱对片层起到静态拉伸作用,同时还能防止过度收缩导致片层变厚。组织工程化子宫内膜经H&E染色后显示：对培养14天的组织工程化子宫内膜取材，组织学研究发现，经过14天的培养，子宫内膜上皮细胞和基质细胞状态良好，上皮层细胞在液态胶原材料表面积聚生长，细胞近圆形，体积比基质细胞略大，细胞与细胞之间紧密相连，有些部位上皮呈扁平状，但也有很多部位的上皮呈现正常子宫内膜所特有的极化柱状形态，这为其发挥相应的功能打下了结构基础。组织工程化子宫内膜免疫组化鉴定结果显示：上皮层呈上皮角蛋白抗体（Cytokeratin）阳性，而基质层中的基质细胞呈Cytokeratin阴性。基质层中的基质细胞呈波形蛋白抗体（vimentin）阳性，而上皮层呈vimentin阴性。3AngⅡ对子宫内膜上皮细胞增殖的影响子宫内膜上皮细胞培养24h，48h和72h后，紫色结晶通过测定550nm每个培养孔的吸光度值（A）观察子宫内膜上皮细胞数目变化情况：AngⅡ可诱导子宫内膜上皮细胞数目明显增加（P <0.05），且AngⅡ有呈剂量和时间依赖性地促进子宫内膜上皮细胞增殖作用；但24h与对照组比较，无统计学意义（P>0.05），48h，72h时，AngⅡ组细胞数目与对照组比较明显增加（P<0.05）。4Ang-（1-7）对AngⅡ诱导的子宫内膜上皮细胞增殖的影响子宫内膜上皮细胞培养24h，48h和72h后，紫色结晶通过测定550nm每个培养孔的吸光度值（A）观察子宫内膜上皮细胞数目变化情况：Ang-（1-7）组与对照组比较无明显差异（P>0.05）；与对照组相比，AngⅡ组可诱导子宫内膜上皮细胞数目明显增加（P <0.05）；而与AngⅡ组相比，AngⅡ+Ang-（1-7）组的子宫内膜上皮细胞数目明显减少（P<0.05）。5Ang-（1-7）和AngⅡ对的子宫内膜上皮细胞活性的影响细胞培养72h后，免疫细胞化学染色法检测结果表明：对照组细胞有少量α-SMA阳性表达，大量的E-cadherin的阳性表达; Ang-（1-7）组与之类似；与对照组相比，AngⅡ组细胞α-SMA表达明显增加而E-cadherin的表达明显降低；与AngⅡ组比较，AngⅡ+Ang-（1-7）组细胞α-SMA表达明显降低而E-cadherin的表达明显增加（P＜0.05）。细胞培养72h后，酶联免疫吸附实验（ELISA）检测结果表明：与对照组比较，Ang-（1-7）组细胞上清液中FN和Col I含量无明显改变，AngⅡ组细胞上清液中FN和Col I的含量明显升高（P＜0.05）；与AngⅡ组比较，AngⅡ+Ang-（1-7）组细胞上清液中FN和Col I含量明显减少（P＜0.05）。细胞培养72h后，western blot检测结果显示：对照组细胞有少量α-SMA阳性表达，大量的E-cadherin阳性表达；Ang-（1-7）组与之类似；与对照组相比，AngⅡ组细胞α-SMA表达明显增加（P＜0.05），E-cadherin的表达明显减少（P＜0.05）；与AngⅡ组比较，AngⅡ+Ang-（1-7）组细胞α-SMA表达明显减少（P＜0.05），E-cadherin的表达明显增加（P＜0.05）。与免疫细胞化学染色法结果一致。细胞培养72h后，Real time PCR检测结果显示：对照组细胞有少量α-SMA mRNA、FN mRNA和Col I mRNA阳性表达，大量的E-cadherinmRNA阳性表达; Ang-（1-7）组与之类似；与对照组相比，AngⅡ组细胞α-SMA mRNA、FN mRNA和Col I mRNA表达明显增加（P＜0.05），E-cadherin mRNA的表达明显减少（P＜0.05）；与AngⅡ组比较，AngⅡ+Ang-（1-7）组细胞α-SMA mRNA、FN mRNA和Col I mRNA表达明显减少（P＜0.05），E-cadherin mRNA的表达明显增加（P＜0.05）。与免疫细胞化学染色法和western blot的检测结果一致。6AngⅡ对子宫内膜基质细胞增殖的影响子宫内膜基质细胞培养24h，48h和72h后，紫色结晶通过测定550nm处每个培养孔的吸光度值（A）观察子宫内膜基质细胞数目变化情况：AngⅡ可诱导子宫内膜基质细胞数目明显增加（P <0.05），且AngⅡ有呈剂量依赖性地促进子宫内膜基质细胞增殖作用；AngⅡ组细胞随着培养时间延长，子宫内膜基质细胞增殖作用越明显，但24h与对照组比较，无统计学意义（P>0.05），48h，72h时，AngⅡ组细胞数目与对照组比较明显增加（P<0.05）。7Ang-（1-7）对AngⅡ诱导的子宫内膜基质细胞增殖的影响子宫内膜基质细胞培养24h，48h和72h后，紫色结晶通过测定550nm每个培养孔的吸光度值（A）观察子宫内膜基质细胞数目变化情况：Ang-（1-7）组与对照组比较无明显差异（P>0.05）；与对照组相比，AngⅡ组可诱导子宫内膜基质细胞数目明显增加（P <0.05）；而与AngⅡ组相比，AngⅡ+Ang-（1-7）（10-5mol/L）组的子宫内膜基质细胞数目明显减少（P<0.05）。8Ang-（1-7）和AngⅡ对的子宫内膜基质细胞活性的影响细胞培养72h后，免疫细胞化学染色法结果显示：对照组细胞有少量α-SMA阳性表达，几乎无TGF-β1和IGF-I阳性表达；Ang-（1-7）组与之类似；与对照组相比，AngⅡ组细胞α-SMA、TGF-β1和IGF-I表达明显增加；与AngⅡ组比较，AngⅡ+Ang-（1-7）组细胞α-SMA、TGF-β1和IGF-I表达明显减少（P＜0.05）。细胞培养72h后，ELISA检测结果显示：与对照组比较，Ang-（1-7）组细胞上清液中TGF-β1、IGF-I、ColⅠ和FN的含量无明显改变，与AngⅡ组比较，AngⅡ+Ang-（1-7）组细胞上清液中TGF-β1、IGF-I、ColⅠ和FN含量明显减少（P＜0.05）。细胞培养72h后，western blot检测结果显示：对照组细胞有少量α-SMA阳性表达，几乎无TGF-β1和IGF-I阳性表达;Ang-（1-7）组与之类似;与对照组相比，AngⅡ组细胞α-SMA、TGF-β1和IGF-I表达明显增加；与AngⅡ组比较，AngⅡ+Ang-（1-7）组细胞α-SMA、TGF-β1和IGF-I表达明显减少（P＜0.05），与免疫细胞化学染色法结果一致。细胞培养72h后，Real time PCR检测结果显示：对照组细胞有少量α-SMAmRNA阳性表达，几乎无ColⅠmRNA、FN mRNA、TGF-β1mRNA和IGF-I mRNA的阳性表达; Ang-（1-7）组与之类似;与对照组相比，AngⅡ组细胞ColⅠmRNA、FN mRNA、α-SMAmRNA、TGF-β1mRNA和IGF-ImRNA表达明显增加;与AngⅡ组相比，AngⅡ+Ang-（1-7）组细胞ColⅠmRNA、FN mRNA、α-SMA mRNA、TGF-β1mRNA和IGF-I mRNA表达明显减少（P＜0.05），与免疫细胞化学染色法和western blot检测结果一致。9Ang-（1-7）和AngⅡ对的子宫内膜活性的影响子宫内膜组织培养72h后，western blot检测结果显示：对照组有少量α-SMA阳性表达，几乎无TGF-β1和IGF-I阳性表达；Ang-（1-7）组与之类似；与对照组相比，AngⅡ组α-SMA、TGF-β1和IGF-I表达明显增加；与AngⅡ组相比，AngⅡ+Ang-（1-7）组α-SMA、TGF-β1和IGF-I表达明显减少（P＜0.05）。子宫内膜组织培养72h后，Real time PCR检测结果显示：对照组组织中有少量α-SMA mRNA阳性表达，几乎无TGF-β1mRNA和IGF-ImRNA阳性表达；Ang-（1-7）组与之类似；与对照组相比，AngⅡ组α-SMAmRNA、TGF-β1mRNA和IGF-I mRNA表达明显增加；与AngⅡ组比较，AngⅡ+Ang-（1-7）组α-SMA mRNA、TGF-β1mRNA和IGF-I mRNA表达明显减少（P＜0.05），与western blot检测结果一致。结论：1成功地分离、培养及鉴定子宫内膜上皮细胞及基质细胞。2成功地在体外构建子宫内膜三维立体结构的培养及鉴定。3在体外AngⅡ呈时间和剂量依赖地促进子宫内膜上皮细胞增殖。4AngⅡ可以促进子宫内膜上皮细胞向肌成纤维细胞的表型转化，表达肌成纤维细胞特异性蛋白α-SMA，而E-cadherin表达水平明显下降；并改变其分泌功能，使ColⅠ和FN合成增加。5Ang-（1-7）能抑制AngⅡ诱导的子宫内膜上皮细胞增殖。Ang-（1-7）能抑制AngⅡ诱导的子宫内膜上皮细胞向肌成纤维细胞的表型转化，抑制肌成纤维细胞特异性蛋白α-SMA的表达，而E-cadherin表达水平明显增加；并改变其分泌功能，使ColⅠ和FN合成减少。6在体外AngⅡ呈时间和剂量依赖地促进子宫内膜基质细胞增殖。7AngⅡ可以促进子宫内膜基质细胞活化，表达肌成纤维细胞特异性蛋白α-SMA，并改变其分泌功能，使ColⅠ、FN、TGF-β1和IGF-I合成增加。8Ang-（1-7）能抑制AngⅡ诱导的子宫内膜基质细胞增殖；Ang-（1-7）能抑制AngⅡ诱导的子宫内膜基质细胞活化，抑制肌成纤维细胞特异性蛋白α-SMA表达，并改变其分泌功能，使ColⅠ、FN、TGF-β1和IGF-I合成减少。9Ang-（1-7）可以抑制AngⅡ诱导的子宫内膜组织中α-SMA、TGF-β1和IGF-I表达明显增加，从而抑制子宫内膜纤维化。
单锦露[4]（2008）在《数字化女性盆腔放射治疗模型研究》文中提出肿瘤放射治疗是目前治疗恶性肿瘤的三大手段之一,其治疗方式是利用电离辐射对生物细胞的杀伤作用进行治疗。所以,作为治疗的各种放射线在杀灭肿瘤细胞的同时,又不可避免损伤部分正常的组织和器官。放射治疗的目标就是在尽可能提高肿瘤的受照射剂量的同时最大限度地保护肿瘤周围的正常组织,从而提高肿瘤的局部控制率,降低正常组织的放疗并发症。人体内器官的空间位置及辐射剂量的分布是无法通过仪表直接测量的,在对医疗仪器科学性、安全性、可操作性的判断过程中,不允许使用活体真人进行试验,因此必须为人类找到一个替身来研究器官在人体中的空间位置以及在医疗照射中器官剂量的分布来避免上述危害。中国数字化人体数据集的建立为放射治疗的剂量学计算提供了中国人人体模型基础,利用中国数字化人体数据集可以建立完整的人体数字化模型库,能更精确地对人体内各个器官的空间位置进行观测和对组织剂量分布进行数字模拟仿真计算,以便获得更合理的放疗方案和更精确的剂量分布,提高肿瘤的疗效,减少放疗并发症,并为制订符合中国人的放射物理模型提供了理论依据和技术平台。本实验以标本号为CVH-2的可视化女性人体数据集的原位女性盆腔连续横断层图像（髂嵴至坐骨结节下缘平面）为研究对象,利用Amira 4.1软件进行计算机图像重采样处理,生成多方位的连续薄层断面图像数据集,实现同一例标本的多方位断面图像的观测,在此基础上对常用照射野内的组织器官进行断层解剖学观测。在计算机上利用可视化软件,采用交互式手动分割和自动阈值分割相结合的数据提取方法,进行盆腔内放射治疗敏感器官的图像分割和三维重建,在盆腔器官三维重建的基础上,模拟盆腔常用的外照射射野,使得照射野所包含的组织在三维空间上可以直观地显示出来,并可在各个方位、角度上进行动态观察,讨论各种照射野所包含的解剖结构的空间位置关系以及常规照射野的一些挡铅方式存在的问题。在构建的女性盆腔内部器官结构三维解剖模型基础上,充分利用数字化人体数据的高清晰度、高分辨率、高识别率的优势,结合同一例数据标本的CT数据,探讨不同数据源与标准DICOM数据转换的方法,并将两种类型的数据进行了图像配准和融合,使低识别率的CT数据具有了高识别率的特性,构建临床上通用的女性盆腔数字化放射治疗模拟计算模型,以期实现在数字模型上对妇科肿瘤盆腔放射治疗中肿瘤靶体积和重要器官剂量的评估和放射治疗计划的优化设计,为建立完整的人体数字化辐射模型库方法进行初步探索。其研究成果对于盆腔恶性肿瘤放射治疗剂量的解析计算、临床治疗方案的选择与优化以及放射治疗计划质量保证（quality assurance,QA）具有重要的理论和临床意义。本研究的主要结果和结论如下:1.在女性数字化可视人体数据集盆腔薄层断面图像数据的基础上,利用Amira 4.1软件的重采样功能生成多方位的连续断面图像数据集,实现同一例标本的多方位断面图像观测,为开展数字解剖学教学与临床影像诊断等提供了全方位的断层解剖学资料。2.获得了女性盆腔放射治疗中多种照射野方位的连续断层图像,结合临床照射野的特点,探讨了相关照射野视窗范围内重要器官的断层解剖学结构特点与走行分布规律,为肿瘤影像诊断的准确性和放射治疗方式的正确选择、靶区的正确勾画提供断层解剖学依据。3.运用计算机三维重建可视化技术,实现了盆腔照射野的三维可视化,精确模拟了常规照射野的观察视窗,从多方位、多角度立体显示照射野范围内各器官之间的空间结构和毗邻关系,特别是靶器官和危险器官的毗邻关系,为女性盆腔外照射射野方式的选择和降低肿瘤放射治疗中放疗并发症发生的深入研究提供了立体形态学依据。4.利用虚拟断层技术和三维照射野视窗的虚拟现实仿真技术,为女性盆腔内器官结构的空间位置理解提供了更直观的显示方式,为照射野解剖学的深入研究提供了相应的技术平台。5.首次实现了数字化可视人体分割数据与标准DICOM3.0数据格式的转换,建立了一套符合临床放射治疗系统数据要求的标准DICOM3.0中国可视化人体数据源女性盆腔数据,为数字化可视人体应用于临床影像设备提供完整的技术方案和程序代码,有助于数字化可视人体数据的临床推广应用,为临床影像数据提供了精确而详细的辅助资料。6.对不同数据源的医学图像融合方法和融合效果评估进行了探讨,使同一例标本的CT数据源和数字化可视人体数据集的匹配度达到95%以上,并成功实现了同一例标本不同数据源的图像融合,使低分辨率的临床CT具有分割标识,为妇科肿瘤放射治疗过程中靶区勾画、治疗方案优化和剂量评估提供了具有重要器官分割特性的数字模拟计算模型。7.成功建立了平均CT值和具有分割特性的CT数据两种女性盆腔放疗模拟计算模型,所建模型符合DICOM3.0数据格式,可作为理想的中国人数字化放疗模拟计算模型,为研究更合理的放疗方案和更精确的剂量分布、寻求更加精确的剂量计算方法提供了理想的活体真人替代品,为建立完整的国人辐射人体数字化模拟计算模型库的方法进行初步探索。8.在临床放射治疗计划系统（TPS）上,利用建立的女性盆腔数字化放射治疗模拟计算模型实现了宫颈癌2D-RT、3D-CRT和IMRT剂量分布的模拟计算。在相应的剂量分布断面及三维重建图像上,对2D-RT、3D-CRT和IMRT在宫颈癌的剂量分布进行比较研究,探讨各种照射方式的优势和价值,为宫颈癌的临床放疗计划的设计提供了剂量学的参考依据。
王海滨[5]（2007）在《以Ⅰ型液态胶原为支架构建组织工程化子宫的实验研究》文中进行了进一步梳理以Ⅰ型液态胶原为支架构建组织工程化子宫的实验研究子宫是女性重要的生殖器官，它是产生月经和孕育胎儿的重要场所。人体子宫不但起着孕育胚胎、繁殖后代的作用，而且具有其他重要的生理功能。鉴于子宫在胚胎发育以及人类生殖研究中具有无法替代的重要作用与功能，越来越多的国内外研究人员意识到体外人造子宫具有重要的科学研究价值和临床应用前景，建造组织工程化人造子宫已成为组织工程研究领域的热点之一。本研究拟在探讨性腺激素对兔在体子宫内膜组织的影响以及性腺激素促子宫内膜细胞体外增殖的基础上，在体外分离、培养及规模化扩增兔子宫内膜上皮细胞与基质细胞；以Ⅰ型液态胶原材料为支架，将体外培育的子宫内膜上皮细胞与基质细胞按顺序接种到胶原凝胶支架材料上，构建由两层细胞组成的组织工程化子宫内膜并进行体外培育；分离培养子宫平滑肌细胞，以Ⅰ型液态胶原材料为支架构建包括含有平滑肌层和子宫内膜层在内的具有完整子宫壁三层结构的组织工程化子宫，其中，在三层子宫组织再造过程中，改变了以往上皮细胞和基质细胞分层种植的方式，而是将两者混合后再与Ⅰ型液态胶原凝胶复合，重点观察了子宫上皮细胞和基质细胞在Ⅰ型液态胶原凝胶中自组装能力。通过上述研究，在体外复制出组织工程化子宫，再造子宫可以作为胚胎早期发育分化、子宫疾病和相关疾病治疗药物筛选研究的体外模型，具有重要的科学研究价值。与此同时，再造子宫作为未来子宫损伤的修复替代手段，对于治疗子宫相关疾病具有潜在的临床应用前景。具体研究内容如下：第一部分：性腺激素对兔在体子宫内膜组织影响的实验研究。第二部分：性腺激素促子宫内膜细胞体外增殖的实验研究。第三部分：组织工程化子宫内膜体外构建的实验研究。第四部分：组织工程化子宫体外构建的实验研究。
陈秀荔[6]（2007）在《兔三维子宫培养系统的优化及胚胎植入的研究》文中研究指明人类对早期胚胎发育,尤其是在体内子宫上的发育过程知之甚少,而其体内的变化受激素、神经、体液以及内分泌的影响,鉴于子宫在胚胎发育以及人类生殖研究中具有无法替代的重要作用与功能,越来越多的国内外研究人员意识到体外人造子宫具有重要的科学研究价值和临床应用前景,建造组织工程化人造子宫已成为组织工程研究领域的热点之一。本研究通过对兔子宫内膜细胞和平滑肌细胞的分离和培养方法的探讨,结果在体外成功的分离和纯化了三种细胞;以这三种细胞为种子细胞将其接种在鼠尾胶原和Matrigel的混合胶内,在体外构建具有三层细胞结构（从下到上依次为平滑肌层,基质层和上皮层）的三维子宫片层;体外优化三维培养系统,改变培养条件,如改变雌激素和孕激素的浓度或者在培养液中添加一些生长因子,体外诱导腺管结构和血管结构,使其更类似于在体结构;以三维子宫组织为模型,在雌激素和孕激素的作用下,诱导基质层细胞发生蜕膜化,模拟在体的接受态子宫。发育到囊胚期的小鼠胚胎与三维子宫组织共培养,观察胚胎在子宫片层上的发育情况,以期对胚胎早期发育事件有更深入的了解,尤其是希望能够部分模拟胚胎在体内子宫早期发育阶段的生理过程,主要结果如下:1.本研究采用筛网法和差速离心法分离子宫内膜细胞,比较2种分离方法,结果差速离心法比较简单快捷,而且污染少,获得的细胞量大。再通过差速贴壁法纯化2种细胞,结果能够获得较纯的子宫内膜基质细胞和上皮细胞。2.通过免疫组织化学染色法鉴定细胞的类型,结果发现小鼠抗人的CK18染色,上皮细胞的胞质呈棕色阳性;小鼠抗人的Vimentin染色,基质细胞胞质呈棕色阳性;小鼠抗人的α-actin免疫组织化学染色,平滑肌细胞的胞质呈棕色阳性。免疫荧光染色鉴定细胞的纯度,结果发现上皮细胞的纯度为97%,基质细胞的纯度为98%,平滑肌细胞的纯度为98%。3.以体外培养3代以内的兔子宫内膜细胞和平滑肌细胞为种子细胞,以液态I型鼠尾胶原和Matrigel为支架材料,在静态拉力存在的条件下,体外构建三维子宫组织。培养14d左右的子宫组织取出后固定,H.E染色和免疫组织化学染色观察结构。结果构建的子宫组织具有明显的三层细胞结构,细胞在静态拉力的作用下具有一定的方向性,上皮细胞表现为一定的极性,呈柱状分布。通过扫描电镜和透射电镜观察子宫组织的结构,结果细胞结构完整,细胞表面出现微绒毛,细胞间存在紧密连接。4.以原代分离的兔子宫内膜细胞和平滑肌细胞为种子细胞,将上皮细胞和基质细胞混合接种在鼠尾胶原和Matrigel内。在此基础上优化培养条件,促进子宫内膜细胞中混有的血管内皮细胞和腺上皮细胞形成一定的形态结构。首次构建出类似于在体子宫的形态和功能的子宫组织,体外构建的子宫组织出现类似于在体的腺管结构和血管结构,而且还观察到组织表面出现大的弯曲结构,弯曲处聚集大量的细。CK7和Ⅷ因子分别进行免疫组织化学染色,结果发现构成腺管和血管的细胞分别呈阳性,说明原代分离的子宫内膜细胞中混有血管内皮细胞,而且细胞具有一定的移动性和方向性。这些结构的形成为人造子宫的实现带来了希望。5.通过改变雌激素和孕激素的比例,诱导三维子宫处于容受状态,即“植入窗口期”,H.E染色观察,结果基质细胞发生蜕膜化,基质层细胞变大,变为多核细胞。囊胚与三维子宫组织共培养,结果发现,20h胚胎黏附到三维子宫组织上,32h后胚胎侵入到三维子宫组织中,胚胎周围出现凹陷,可能胚胎在体外构建的三维子宫组织上成功的植入。
王和平,王常勇,江红[7]（2007）在《子宫内膜体外构建及其应用研究进展》文中提出体外构建子宫内膜是利用组织工程学原理,在体外构建结构、形态与功能上与体内子宫内膜相似的三维模拟体。种子细胞分离培养、生物支架材料的合理选择及体外构建方法的优化是体外构建子宫内膜的重要因素。构建的子宫内膜在病理研究、三维培养体系、胚胎发育学及移植等方面具有重要的研究意义。只有更进一步模拟自然子宫的结构,优化构建技术路线和培养条件,才可以再造出真正意义上的组织工程化子宫。
宋宇轩[8]（2007）在《兔子宫三维组织片层的构建及其对小鼠胚胎体外发育影响的研究》文中研究指明子宫是雌性动物的重要生殖器官,有关子宫生理及病理机理的研究可促进发育生物学及生殖医学的发展。但子宫随雌性动物的发情周期在形态及生理方面呈动态变化,因而在体内研究具有一定的局限性。本研究利用细胞三维培养技术,将假孕母兔的子宫内膜上皮细胞、基质细胞以及子宫平滑肌细胞在体外分离培养后,以Ⅰ型液态鼠尾胶原为支架,按自然子宫的结构在体外重建含子宫平滑肌层、基质层和上皮层的三维组织片层结构模型,同时将构建组织与小鼠两细胞期胚胎及囊胚共培养后观察其对早期胚胎发育以及胚胎植入的影响,以期为发育生物学、生殖生理学及病理学研究提供一个体外模型。本研究结果如下:1、研究子宫内膜上皮细胞和基质细胞体外分离方法和增殖规律的结果表明,家兔在经过促情激素（PMSG）和促排卵激素（hCG）处理后分离其子宫内膜上皮细胞和基质细胞,可在体外增殖生长。利用0.1%胶原酶对兔子宫内膜进行消化并用离心法分离可获得较好的分离培养效果。培养液中添加雌二醇（E2,100 nmol/L）和少量孕酮（P4,10 nmol/L）对上皮细胞增殖有促进作用,添加孕酮（P4,100 nmol/L）对基质细胞的体外增殖有促进作用。免疫组织化学染色表明,培养的上皮细胞对上皮角蛋白抗体呈阳性,基质细胞对波形蛋白抗体呈阳性,说明性腺激素不会促使子宫内膜细胞在体外分化为其他类型细胞。上皮细胞与少量基质细胞（15%）共培养并辅以100 nmol/L雌二醇和10 nmol/L孕酮可促使上皮细胞在体外传4-5代。子宫内膜细胞在体外的大量增殖可为子宫组织的体外三维构建提供足量的种子细胞。2、研究子宫平滑肌细胞体外增殖规律的结果表明,应用组织机械剪碎胰酶消化方法可成功地进行子宫平滑肌细胞的体外培养和传代。子宫平滑肌细胞在体外的增殖受卵巢性腺激素的影响,100 nmol/L的E2对子宫平滑肌细胞有显着的促增殖作用,而100 nmol/L的P4则对其增殖有显着的抑制作用。体外培养的子宫平滑肌细胞在激素作用下仍可维持其特性,对α-平滑肌肌动蛋白抗体呈阳性反应。利用本实验方法分离培养的子宫平滑肌细胞可用于有关子宫平滑肌生理的研究,也可为构建子宫三维结构提供充足的种子细胞。3、以体外培养扩增的子宫内膜上皮细胞、基质细胞和子宫平滑肌细胞作为种子细胞,以浓度为1.8 g/mLⅠ型液态鼠尾胶原作为支架材料,Matrigel作为促细胞生长物质,构建了包括子宫上皮层、基质层和平滑肌层在内的子宫三维片层的体外模型。H.E染色结果表明构建组织具有类似于自然子宫的三维三层结构。免疫组织化学染色表明构建组织的三层结构分别对上皮角蛋白抗体、波形蛋白抗体和α-平滑肌肌动蛋白抗体呈阳性反应,说明三层组织分别来源于子宫内膜上皮细胞、基质细胞和子宫平滑肌细胞。透射电镜检测证明在构建组织中,上皮细胞极化为柱状排列,细胞之间建立了紧密连接和桥粒结构,细胞中线粒体数量丰富、形态正常。扫描电镜对激素处理的三维片层的检测结果表明,构建组织的上皮细胞表面有微绒毛和纤毛存在,一些微绒毛特化为Pinopode结构。与胚胎植入有关的一些标记性基因β3-整合素、HOXA-10以及肝素结合表皮生长因子（HB-EGF）的RT-PCR结果表明,三个基因在性腺激素处理后的子宫三维片层中均有显着表达,而未用激素处理组则不表达或表达很微弱,说明构建组织具有自然子宫的一些生理功能。应用本实验方法构建的子宫三维片层结构具有与自然子宫类似的结构和功能,可为与子宫有关的病理及生理机理的研究提供了一个较为理想的体外模型。4、将体外构建的子宫三维组织片层结构与小鼠两细胞胚胎共培养以建立三维共培养体系,观察其对胚胎早期发育的影响。结果表明,相对于培养液单独培养、输卵管上皮细胞和子宫内膜细胞共培养体系,子宫三维组织共培养体系可极显着或显着提高小鼠两细胞胚胎的囊胚发育率、囊胚贴附率以及囊胚细胞数,囊胚发育率分别提高82.3%,34.6%和24.5%,囊胚贴附率分别提高273%,65.8%和63.2%,囊胚细胞数分别提高47.8%,19.3%和23.6%。说明子宫三维组织共培养体系可以在体外为胚胎发育提供一种更类似于体内的环境,有利于胚胎的体外囊胚发育率和发育质量的提高。5、将构建的子宫三维组织片层与小鼠囊胚共培养以观察其能否作为胚胎植入现象的体外研究模型。结果表明,将该片层用性腺激素处理后与小鼠囊胚共培养,大多数囊胚可顺利脱带,黏附在子宫三维组织片层表面,最后穿过上皮层植入到基质层。植入的胚胎可在构建组织中进一步发育,并观察到微管样结构形成,表明胚胎在子宫三维片层上的发育可能启动了囊胚内细胞团的第一次分化。因此,利用本方法在体外构建的三维子宫组织片层可作为探索体外胚胎植入以及囊胚内细胞团如何启动分化的一个较为理想的研究模型。
冷怀明[9]（2002）在《《第三军医大学学报》2002年第24卷主题词索引》文中指出
王丽[10]（2003）在《胚泡着床三维模型的建立及子宫内膜容受性影响因素的研究》文中研究说明胚胎着床是成功妊娠的第一步，受到激素、细胞因子、蛋白、酶等多种信息物质的调节，详细机理尚不清楚。由于着床的机理不清，阻碍了对不孕这种与着床密切相关疾病的深入了解，阻碍了助孕技术水平的提高，同时也阻碍了抗着床干扰生育方法的进一步开发。着床涉及胚胎和母体子宫双方的同步发展和变化，是一个复杂而精细的过程，直接在体研究极其困难，因此，体外模型的建立成为研究此过程的重要工具。目前国内外应用子宫组织、子宫内膜细胞及细胞外基质等已建立了许多着床模型，其中应用最多的是胚泡与单层子宫内膜上皮细胞的共培养。但这些模型绝大多数只能实现胚泡的粘附和扩展生长，而无胚泡植入子宫内膜的行为。即都不能完全模拟体内着床时胚泡与子宫内膜的关系。研究表明子宫内膜上皮细胞的极性、细胞间连接以及与基质细胞、细胞间基质的关系对于维持子宫内膜的功能非常重要，因此植入过程的研究中，除包含基底膜上有良好细胞间连接的极性上皮细胞外，同时包含细胞间基质和基质细胞也很重要。鉴于这些特点，建立含有子宫内膜上皮和基质细胞的体外培养三维模型，系统观察子宫内膜细胞的形态学、细胞骨架的改变，并进一步利用此体外模型观察雌激素、胚胎以及细胞因子等对子宫内膜容受性的调节作用，对阐明子宫内膜容受性建立的分子机制，并通过干扰容受性来干扰着床从而实现人类生育调节具有重要意义。体外模型的建立能够为研究胚胎着床提供更合理、更科学和更便捷的途经。第一部分 子宫内膜体外三维模型的建立一、 子宫内膜上皮细胞和基质细胞共培养三维模型目的用双室培养系统、Matrigel的特性，建立子宫内膜上皮/基质细胞的共培养三维模型，并进一步观察其形态学特征并与在体子宫内膜相比较，探索建立理想的体外三维模型。材料和方法取孕4天小鼠子宫内膜，用trypsin/pancreatin消化法制备子宫内膜上皮细胞<WP=6>和基质细胞，利用双室培养系统建立含有上皮细胞和基质细胞的三维模型。用光镜、电镜观察其形态学特征，并与正常子宫内膜比较；用细胞免疫组化方法鉴定细胞的来源和纯度。结果用酶消化法分离的上皮细胞和基质细胞，其纯度占90％以上。扫描电镜（SEM）观察显示，对照组孕第4天的小鼠子宫蜕膜上皮细胞有突起，表面具有微绒毛及发育中的胞饮突。体外培养的子宫内膜上皮细胞生长融合成片，同样可见容受性标志－发育中胞饮突的形成，上覆微绒毛，只是体外培养的上皮细胞胞饮突变异较大。透射电镜（TEM）结果显示，培养的上皮细胞具有极性，表面覆有微绒毛，较在位子宫内膜细胞表面的微绒毛少。同时培养的子宫内膜上皮也具有细胞间紧密连接和糖原沉积，与在体的子宫内膜相似。小结建立的三维模型既含有上皮细胞，又包含基质细胞及细胞外基质。其生物学特征与在体的子宫内膜基本相似，是一种较理想的体外模型。二、 子宫内膜体外重建目的用组织工程方法，利用新型的多孔聚合物支架材料胶原—聚乳酸羟基乙酸共聚物杂交聚合网（Collagen-PLGA polymer mesh）作为三维支架，将子宫内膜上皮细胞和基质细胞作为种子细胞，探索建立人工子宫内膜的可行性。材料和方法将分离纯化的上皮细胞和基质细胞依次种植于生物可降解胶原—聚乳酸羟基乙酸共聚物杂交聚合网上下两面，光镜及扫描电镜观察细胞的生长状况。结果子宫内膜细胞可进入聚合网内部并粘附生长，24h后细胞粘附。扫描电镜显示在细胞培养第5天，细胞大量铺展生长，有些区域，可见融合生长。培养第14天后，扫描电镜见细胞融合成片，原胶原大部分已被子宫内膜细胞分泌的细胞外基质代替，形成三维结构。<WP=7>小结本实验首次应用生物可降解的杂交聚合网作为支架在体外重建了子宫内膜，提示用组织工程方法建立人工子宫内膜的可行性。第二部分 子宫内膜容受性影响因素的研究一、 胚胎与三维模型共培养及对子宫内膜容受性的调节目的研究表明胚胎因素在诱导子宫容受性中具有重要作用，其具体机制还不清楚。本研究目的是将胚泡与建立的体外三维模型共培养，研究胚胎加入后，子宫内膜细胞的形态学变化、胚胎与子宫内膜相互作用的关系及对容受性标志分子整合素β3的影响，探索胚胎因素对子宫容受性形成的调节作用。 材料和方法给小鼠超排卵刺激后交配，将妊娠第4天的小鼠囊胚培养在已建立的体外子宫内膜三维模型上，电镜观察胚胎植入时囊胚与子宫内膜上皮细胞的超微结构。并用RT－PCR法测定子宫内膜整合素β3基因水平的表达，Immunoblot法做整合素β3蛋白半定量测定。结果在三维模型中小鼠囊胚能正常脱透明带、粘附和扩展，小鼠囊胚24h、48h的脱带率（31.3％、72.5％）、粘附率（16.7％、58.3％）与对照组单层子宫内膜上皮（脱带率：27.7％、70.8％，粘附率：15.3％、52.8％）相比差异无统计学意义（P>0.05）；体外模型中胚胎的48h扩展率16.7％与对照组40.3％相比差异具显着统计学意义（P<0.05）。扫描电镜显示体外培养的子宫内膜可形成胞饮突，胚胎粘附于胞饮突上，胚胎表面覆有微绒毛。透射电镜显示培养的子宫内膜上皮细胞具?
二、子宫内膜体外三维重建的形态学研究（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、子宫内膜体外三维重建的形态学研究（论文提纲范文）
（1）蒙药蓝刺头调控FoxO/Wnt/β-catenin通路防治绝经后骨质疏松症的实验研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一章 绪论 |
| 第一节 研究背景及意义 |
| 1. 研究背景 |
| 2. 研究意义 |
| 第二节 中蒙医药抗氧化应激防治绝经后骨质疏松概述 |
| 1. 氧化应激与雌激素缺乏 |
| 2. PMOP与Fox O/Wnt-β-catenin通路 |
| 3. 中医药与PMOP |
| 4. 蒙医药与PMOP |
| 5. 蒙药蓝刺头与PMOP |
| 第三节 课题研究设想 |
| 参考文献 |
| 第二章 实验研究 |
| 第一节 蒙药蓝刺头对经后骨质疏松症模型大鼠骨微结构的影响 |
| 1. 实验材料及设备 |
| 1.1 实验动物 |
| 1.2 实验药物 |
| 1.3 实验设备 |
| 1.4 主要实验试剂 |
| 2. 实验方法 |
| 2.1 实验分组 |
| 2.2 去卵巢大鼠骨质疏松症模型的建立 |
| 2.3 造模是否成功的判定 |
| 2.4 给药方法 |
| 2.5 标本采集 |
| 2.6 指标检测 |
| 3. 实验结果 |
| 3.1 实验过程中大鼠生命概况 |
| 3.2 假手术组与模型组大鼠去卵巢术前术后体质量变化 |
| 3.3 骨密度(BMD)测定结果 |
| 3.4 骨形态学计量(Micro-CT)骨微结构测定结果 |
| 3.5 各组大鼠骨组织形态学观察(HE染色) |
| 3.6 各组大鼠骨组织学定量检测结果 |
| 3.7 血清骨代谢指标测定结果 |
| 4. 讨论 |
| 4.1 实验相关检测指标分析 |
| 5. 小结 |
| 参考文献 |
| 第二节 蒙药蓝刺头调控Fox O/Wnt/β-catenin通路抗氧化应激防治绝经后骨质疏松的实验研究 |
| 1. 实验材料、实验设备 |
| 1.1 造模动物 |
| 1.2 实验药物 |
| 1.3 实验设备与器材 |
| 1.4 主要实验试剂 |
| 2. 实验方法 |
| 2.1 实验分组 |
| 2.2 绝经后骨质疏松模型建立 |
| 2.3 造模是否成功 |
| 2.4 给药方法 |
| 2.5 标本采集 |
| 2.6 指标检测 |
| 2.7 数据的统计学处理 |
| 3. 实验结果 |
| 3.1 阴道上皮角化实验结果 |
| 3.2 造模术后4周BMD检测结果 |
| 3.3 造模术后8周子宫病理形态学检测结果 |
| 3.4 血清中氧化应激相关指标测定结果 |
| 3.5 Western blot检测骨组织抗氧化应激相关蛋白的表达 |
| 3.6 RT-PCR测定调节目标基因表达的相关因子表达 |
| 4. 讨论 |
| 4.1 蒙医学对骨骼的认识 |
| 4.2 蒙医学对骨质疏松的认识 |
| 4.3 传统蒙医学“骨枯症”与现代医学“骨质疏松”理论契合点分析 |
| 4.4 蒙医药传统疗法防治“骨枯症”的理论探讨 |
| 4.5 蒙药蓝刺头的选药依据 |
| 4.6 去卵巢骨质疏松模鼠模型选择依据 |
| 4.7 实验中药对照和阳性对照药选择依据 |
| 4.8 实验相关检测指标分析 |
| 5. 结论 |
| 6. 小结 |
| 参考文献 |
| 第三节 全文总结及研究结论 |
| 1. 全文总结 |
| 2. 本研究结果表明 |
| 3. 结论 |
| 4. 研究不足之处 |
| 5. 展望 |
| 参考文献 |
| 第三章 文献研究 |
| 第一节 抗氧化应激调控Fox O/Wnt/β-catenin通路防治骨质疏松研究进展 |
| 1. 氧化应激反应与骨质疏松症的相关性 |
| 1.1 氧化应激概述 |
| 1.2 氧化应激与骨质疏松发病的相关性 |
| 1.3 抗氧化剂对骨质疏松的治疗作用 |
| 2. FoxO/Wnt/β-catenin通路与骨质疏松 |
| 2.1 叉头框蛋白Fox O与骨质疏松 |
| 2.2 Wnt/β-catenin通路与骨质疏松 |
| 3. 总结 |
| 参考文献 |
| 第二节 探讨蒙医药学对骨质疏松症发病机制影响的研究进展 |
| 1. 骨质疏松症和绝经后骨质疏松症概述 |
| 2. 蒙医学对骨骼的认识 |
| 3. 蒙医学对骨质疏松的认识 |
| 4. 骨枯症发病机制与骨质疏松现代研究中寻找共同点是制定蒙医治疗骨质疏松症的理论依据 |
| 4.1 从蒙医对骨枯症发病机制方面判定 |
| 5. 蒙医治疗骨质疏松的原则 |
| 6. 蒙医传统疗法对“骨枯”病的预防与治疗的基本原则和方法的理论探讨 |
| 7. 结语与展望 |
| 参考文献 |
| 第三节 蒙药蓝刺头抗骨质疏松研究进展 |
| 1. 蒙药蓝刺头概况 |
| 2. 蒙药蓝刺头化学成分研究现状 |
| 3. 蒙药蓝刺头药理作用实验研究 |
| 3.1 毒性试验 |
| 3.2 镇痛作用 |
| 3.3 保肝作用 |
| 3.4 抗炎作用 |
| 3.5 抗氧化作用 |
| 3.6 骨科疾病的预防和治疗 |
| 4. 蒙药蓝刺头防治绝经后骨质疏松研究进展 |
| 4.1 蒙药蓝刺头防治绝经后骨质疏松的研究内容 |
| 4.2 蒙药蓝刺头预防和治疗绝经后骨质疏松临床研究进展 |
| 4.3 蒙药蓝刺头防治绝经后骨质疏松的实验研究 |
| 5. 结语与展望 |
| 参考文献 |
| 附录 中英文缩略语对照表 |
| 攻读博士期间取得的学术成就 |
| 致谢 |
| 个人简介 |
（2）基于CTA三维重建子宫内膜癌患者血管指数与MVD关系的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 1 目的 |
| 2 资料与方法 |
| 2.1 研究对象 |
| 2.2 设备及材料 |
| 2.3 CT扫描参数设定、数据存储及三维重建 |
| 2.4 三维模型的立体观察 |
| 2.5 肿瘤血管形态学分级 |
| 2.6 计算内膜区血管条数及血管指数(VI) |
| 2.7 病理免疫组化染色 |
| 2.8 肿瘤内微血管密度(MVD)计数 |
| 2.9 统计学处理 |
| 3 结果 |
| 3.1 构建子宫内膜癌患者盆腔数字化模型 |
| 3.2 CTA三维重建肿瘤血管分级与MVD的关系 |
| 3.3 CTA三维重建VI与MVD的关系 |
| 3.4 CTA三维重建VI与FIGO分期的关系 |
| 4 讨论 |
| 4.1 CTA三维重建评价子宫内膜癌血管生成的基础 |
| 4.2 基于CTA三维重建肿瘤血管分级与血管生成的关系 |
| 4.3 基于CTA三维重建VI与血管生成的关系 |
| 4.4 基于CTA三维重建VI计数与FIGO分期的关系 |
| 全文小结 |
| 一、结论 |
| 二、创新点与展望 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间成果 |
| 附录 |
| 致谢 |
（3）人子宫内膜的体外构建及Ang-（1-7）和AngⅡ对子宫内膜细胞和子宫内膜组织的影响（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 英文缩写 |
| 引言 |
| 第一部分 人子宫内膜的体外构建与鉴定 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 附表 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第二部分 Ang-(1-7)和AngⅡ对人子宫内膜上皮细胞的影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 附表 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第三部分 Ang-(1-7)和AngⅡ对人子宫内膜基质细胞的影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 附表 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 第四部分 Ang-(1-7)和 AngⅡ对人子宫内膜组织的影响 |
| 前言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 附图 |
| 附表 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 参考文献 |
| 结论 |
| 综述 子宫内膜三维结构模型的体外构建及其应用的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 个人简历 |
（4）数字化女性盆腔放射治疗模型研究（论文提纲范文）
| 英文缩写索引 |
| 英文摘要 |
| 中文摘要 |
| 论文正文 数字化女性盆腔放射治疗模型研究 |
| 前言 |
| 参考文献 |
| 第一部分 女性盆腔照射野断层解剖学基础 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第一部分图片 |
| 第二部分 女性盆腔照射野三维可视化研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第二部分图片 |
| 第三部分 数字化女性盆腔放射治疗模型的构建 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第三部分图片 |
| 第四部分 基于数字化放射模型的宫颈癌临床剂量学研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 参考文献 |
| 第四部分图片 |
| 全文结论 |
| 致谢 |
| 文献综述一数字辐射模型在肿瘤放射治疗中的研究进展 |
| 参考文献 |
| 文献综述二 宫颈癌外照放射治疗进展 |
| 参考文献 |
| 研究生期间发表文章 |
| 英文文章Chinese Visible Human-based 3D reconstruction of the female pelvi |
（5）以Ⅰ型液态胶原为支架构建组织工程化子宫的实验研究（论文提纲范文）
| 主要英文缩写一览表 |
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 第一部分:性腺激素对兔在体子宫内膜组织影响的实验研究 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第二部分:性腺激素促子宫内膜细胞体外增殖的实验研究 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第三部分:组织工程化子宫内膜体外构建的实验研究 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 第四部分:组织工程化子宫体外构建的实验研究 |
| 引言 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 综述:子宫内膜细胞与子宫组织工程研究进展 |
| 参考文献 |
| 小结 |
| 致谢 |
| 附录:攻读硕士学位期间发表的学术论文 |
| 附发表文章 |
（6）兔三维子宫培养系统的优化及胚胎植入的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 前言 |
| 第一章 三维子宫的构建与胚胎植入前子宫组织变化的研究进展 |
| 1.1 组织工程的研究进展 |
| 1.1.1 组织工程的研究内容 |
| 1.1.2 三维支架材料的研究进展 |
| 1.1.3 种子细胞分离培养方法的研究进展 |
| 1.1.4 子宫模型的建立及其应用 |
| 1.2 植入前期子宫的形态学和功能学的变化 |
| 1.2.1 植入窗口前期子宫内膜的特征 |
| 1.2.2 体外诱导子宫内膜蜕膜化的研究进展 |
| 1.2.3 子宫内膜血管生成的影响因素与重要意义 |
| 1.2.4 基质金属蛋白酶及其抑制剂的作用 |
| 1.3 本研究的意义 |
| 1.4 本研究的目的 |
| 第二章 种子细胞的研究 |
| 2.1 材料和方法 |
| 2.1.1 实验试剂 |
| 2.1.2 溶液配制 |
| 2.1.3 仪器设备 |
| 2.1.4 实验动物 |
| 2.1.5 实验方法 |
| 2.2 结果与分析 |
| 2.2.1 光学显微镜下观察子宫内膜细胞 |
| 2.2.2 光学显微镜下观察子宫平滑肌细胞 |
| 2.2.3 差速贴壁法获得的上皮细胞和基质细胞的纯度比较 |
| 2.2.4 DAPI 标记的上皮细胞 |
| 2.2.5 PKH26 标记的基质细胞 |
| 2.2.6 免疫组织化学染色和免疫荧光染色 |
| 2.3 讨论 |
| 2.3.1 子宫内膜细胞的分离和纯化方法 |
| 2.3.2 子宫内膜上皮细胞及蜕膜化的基质细胞的培养与鉴定 |
| 2.3.3 子宫平滑肌细胞的分离培养与鉴定 |
| 2.3.4 DAPI 和PKH26 对细胞的影响 |
| 第三章 体外三维子宫培养系统的研究 |
| 3.1 材料与方法 |
| 3.1.1 实验试剂 |
| 3.1.2 溶液配制 |
| 3.1.3 仪器及装置 |
| 3.1.4 实验动物 |
| 3.1.5 实验方法 |
| 3.2 结果与分析 |
| 3.2.1 三维培养的直观模型 |
| 3.2.2 三维子宫组织构建的最佳条件的探讨 |
| 3.2.3 三维子宫组织的形态学观察 |
| 3.2.4 三维子宫组织的免疫组织化学检测 |
| 3.2.5 荧光染料标记的三维子宫组织的形态学观察 |
| 3.2.6 三维子宫组织的免疫荧光染色 |
| 3.2.7 扫描电镜和透射电镜观察 |
| 3.3 讨论 |
| 3.3.1 三维培养体系支架材料的选择 |
| 3.3.2 三维子宫组织结构与功能的鉴定 |
| 第四章 三维子宫培养系统的优化 |
| 4.1 材料与方法 |
| 4.1.1 实验动物 |
| 4.1.2 实验试剂 |
| 4.1.3 实验方法 |
| 4.2 结果与分析 |
| 4.2.1 体外诱导具有腺管结构的子宫组织 |
| 4.2.2 血管化子宫的构建 |
| 4.2.3 培养条件的探讨 |
| 4.2.4 腺管化子宫组织的免疫组化染色 |
| 4.3 讨论 |
| 4.3.1 单层培养与三维培养和器官培养的比较 |
| 4.3.2 体外诱导腺管化的子宫组织 |
| 4.3.3 细胞的趋向性 |
| 4.3.4 体外诱导血管化的子宫组织 |
| 4.3.5 培养条件的变化对体外构建子宫组织的影响 |
| 第五章 三维子宫组织作为胚胎体外发育模型的研究 |
| 5.1 材料与方法 |
| 5.1.1 实验动物 |
| 5.1.2 实验材料 |
| 5.1.3 实验方法 |
| 5.2 结果与分析 |
| 5.2.1 HE 染色观察体外诱导的接受态的三维子宫组织 |
| 5.2.2 免疫组织化学染色观察子宫组织 |
| 5.2.3 胚胎在三维子宫培养模型上的发育 |
| 5.3 讨论 |
| 5.3.1 体外诱导接受态的子宫组织 |
| 5.3.2 胚胎与构建的子宫组织共培养 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 缩略词 |
| 致谢 |
| 作者简介 |
（7）子宫内膜体外构建及其应用研究进展（论文提纲范文）
| 一、种子细胞的分离培养与鉴定 |
| 二、子宫内膜构建应用的支架材料 |
| 三、 子宫内膜的体外构建方法 |
| 四、体外构建子宫内膜及子宫的应用 |
| 五、研究存在的问题及解决思路 |
（8）兔子宫三维组织片层的构建及其对小鼠胚胎体外发育影响的研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 第一篇 文献综述 |
| 第一章 本研究目的和意义 |
| 第二章 三维细胞培养技术研究进展 |
| 第三章 子宫结构及生理 |
| 3.1 子宫的组织结构 |
| 3.1.1 外膜 |
| 3.1.2 肌层 |
| 3.1.3 内膜 |
| 3.2 子宫内膜周期性变化 |
| 3.2.1 月经期 |
| 3.2.2 增生期 |
| 3.2.3 分泌期 |
| 3.3 卵巢和子宫内膜周期性变化的神经内分泌调节 |
| 3.4 子宫内膜细胞的分泌功能 |
| 第四章 子宫三维模型体外构建研究进展 |
| 4.1 子宫内膜细胞及平滑肌细胞的体外培养研究进展 |
| 4.1.1 子宫内膜细胞体外培养 |
| 4.1.2 子宫平滑肌细胞体外培养 |
| 4.2 子宫三维模型体外构建研究意义 |
| 4.2.1 进行子宫生理研究 |
| 4.2.2 用于建立体外病理研究模型 |
| 4.2.3 作为饲养层建立体外三维培养体系 |
| 4.2.4 作为早期胚胎体外发育的研究模型 |
| 4.2.5 作为医疗移植替代物进行病损组织的替代治疗 |
| 第五章 胚胎体外培养技术研究进展 |
| 5.1 培养液单独培养 |
| 5.2 单层细胞共培养体系的建立 |
| 5.3 三维共培养体系的建立 |
| 第六章 胚胎植入研究进展 |
| 6.1 子宫内膜细胞容受期形态学变化 |
| 6.2 子宫内膜容受期分子生物学特征 |
| 6.3 胚胎体外植入模型的研究进展 |
| 第二篇 试验研究 |
| 第七章 子宫内膜上皮细胞和基质细胞的体外培养和扩增 |
| 7.1 材料与方法 |
| 7.1.1 主要试剂 |
| 7.1.2 主要仪器 |
| 7.1.3 试验动物 |
| 7.1.4 取样 |
| 7.1.5 观测指标 |
| 7.2 结果与分析 |
| 7.2.1 不同处理对子宫内膜细胞分离培养效果的影响 |
| 7.2.2 原代培养的两种细胞形态观察 |
| 7.2.3 两种细胞的传代 |
| 7.2.4 不同性腺激素对子宫内膜细胞体外增殖的影响 |
| 7.2.5 子宫内膜细胞生长曲线 |
| 7.2.6 子宫内膜细胞免疫组化结果 |
| 7.2.7 台盼蓝排斥实验检测活细胞比例 |
| 7.3 讨论 |
| 7.3.1 假孕处理对家兔子宫内膜细胞体外分离培养效果的影响 |
| 7.3.2 消化和分离方法对子宫内膜细胞培养效果的影响 |
| 7.3.3 性腺激素对子宫内膜细胞体外增殖的影响 |
| 7.3.4 子宫内膜细胞体外增殖规律的研究 |
| 7.4 小结 |
| 第八章 子宫平滑肌细胞体外分离培养的实验研究 |
| 8.1 材料与方法 |
| 8.1.1 试验所需试剂 |
| 8.1.2 主要仪器 |
| 8.1.3 试验动物 |
| 8.1.4 取样 |
| 8.1.5 观测指标 |
| 8.2 结果与分析 |
| 8.2.1 兔子宫平滑肌细胞原代与传代时形态观察 |
| 8.2.2 E_2和 P_4对子宫平滑肌细胞体外增殖的影响 |
| 8.2.3 子宫平滑肌细胞生长曲线 |
| 8.2.4 子宫平滑肌细胞免疫组化结果 |
| 8.2.5 台盼蓝排斥实验检测活细胞比例 |
| 8.3 讨论 |
| 8.4 小结 |
| 第九章 兔子宫三维组织片层结构的体外构建研究 |
| 9.1 材料与方法 |
| 9.1.1 试验所需主要试剂 |
| 9.1.2 试验所需仪器 |
| 9.1.3 试验所需材料 |
| 9.1.4 子宫三维模型的体外重建 |
| 9.1.5 观察指标 |
| 9.2 结果与分析 |
| 9.2.1 胶原浓度及静态拉伸对子宫三维组织片层的影响 |
| 9.2.2 子宫三维片层的大体观察 |
| 9.2.3 子宫三维片层的光镜观察 |
| 9.2.4 子宫三维片层H.E.染色 |
| 9.2.5 子宫三维片层免疫组织化学检测结果 |
| 9.2.6 子宫三维片层透射电镜结果 |
| 9.2.7 子宫三维片层扫描电镜结果 |
| 9.2.8 子宫三维片层组织中与胚胎植入有关的基因RT-PCR检测结果 |
| 9.2.9 子宫三维片层AO-PI染色结果 |
| 9.3 讨论 |
| 9.3.1 细胞的体外三维培养及子宫组织的体外三维构建 |
| 9.3.2 液态胶原浓度对子宫三维组织构建的影响 |
| 9.3.3 体外构建的子宫三维组织结构特点 |
| 9.3.4 体外构建的子宫三维组织超微结构特点 |
| 9.3.5 性腺激素对构建的子宫三维组织形态和功能的影响 |
| 9.3.6 构建组织中的细胞活力检测 |
| 9.4 小结 |
| 第十章 子宫三维组织片层对胚胎体外发育影响的研究 |
| 10.1 材料与方法 |
| 10.1.1 试剂及仪器 |
| 10.1.2 试验动物 |
| 10.1.3 试验设计 |
| 10.1.4 子宫及输卵管的采集 |
| 10.1.5 输卵管上皮细胞分离培养 |
| 10.1.6 子宫内膜细胞分离培养 |
| 10.1.7 子宫三维片层的构建 |
| 10.1.8 小鼠2细胞期胚胎的获得 |
| 10.1.9 观测指标及数据处理 |
| 10.1.10 囊胚细胞记数 |
| 10.2 结果与分析 |
| 10.2.1 家兔输卵管上皮细胞体外培养传代 |
| 10.2.2 家兔子宫内膜细胞体外培养及传代 |
| 10.2.3 不同培养体系对小鼠早期胚胎体外发育率及发育质量的影响 |
| 10.3 讨论 |
| 10.3.1 子宫三维组织片层对体外早期胚胎发育率的影响 |
| 10.3.2 子宫三维组织片层对体外早期胚胎发育质量的影响 |
| 10.4 小结 |
| 第十一章 子宫三维组织片层作为胚胎体外植入模型的研究 |
| 11.1 材料与方法 |
| 11.1.1 试剂及器材 |
| 11.1.2 实验动物 |
| 11.1.3 子宫三维片层构建及处理 |
| 11.1.4 小鼠囊胚的获得 |
| 11.2 结果与分析 |
| 11.3 讨论 |
| 主要结论 |
| 本研究的创新点 |
| 进一步研究的问题 |
| 参考文献 |
| 附件 |
| 致 谢 |
| 作者简介 |
（10）胚泡着床三维模型的建立及子宫内膜容受性影响因素的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| 英文摘要 |
| 前言 |
| 试剂和仪器 |
| 第一部分 子宫内膜体外三维模型的建立 |
| 一 子宫内膜上皮细胞和基质细胞共培养三维模型 |
| 二 子宫内膜体外重建 |
| 第二部分 子宫内膜容受性影响因素的研究 |
| 一 胚胎与三维模型共培养及对子宫内膜容受性的调节 |
| 二 不同浓度雌激素对胚胎着床的影响 |
| 三 LIF及其抗体对小鼠胚胎着床影响的体外研究 |
| 全文小结 |
| 本课题创新点 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 博士生期间发表论文和综述 |
| 综述 |
| 附录：已发表的论文 |
四、子宫内膜体外三维重建的形态学研究（论文参考文献）
- [1]蒙药蓝刺头调控FoxO/Wnt/β-catenin通路防治绝经后骨质疏松症的实验研究[D]. 董重阳. 南京中医药大学, 2019(06)
- [2]基于CTA三维重建子宫内膜癌患者血管指数与MVD关系的研究[D]. 易颂平. 南方医科大学, 2014(12)
- [3]人子宫内膜的体外构建及Ang-（1-7）和AngⅡ对子宫内膜细胞和子宫内膜组织的影响[D]. 单铁英. 河北医科大学, 2014(09)
- [4]数字化女性盆腔放射治疗模型研究[D]. 单锦露. 第三军医大学, 2008(03)
- [5]以Ⅰ型液态胶原为支架构建组织工程化子宫的实验研究[D]. 王海滨. 中国人民解放军军事医学科学院, 2007(06)
- [6]兔三维子宫培养系统的优化及胚胎植入的研究[D]. 陈秀荔. 西北农林科技大学, 2007(06)
- [7]子宫内膜体外构建及其应用研究进展[J]. 王和平,王常勇,江红. 生殖医学杂志, 2007(01)
- [8]兔子宫三维组织片层的构建及其对小鼠胚胎体外发育影响的研究[D]. 宋宇轩. 西北农林科技大学, 2007(06)
- [9]《第三军医大学学报》2002年第24卷主题词索引[J]. 冷怀明. 第三军医大学学报, 2002(12)
- [10]胚泡着床三维模型的建立及子宫内膜容受性影响因素的研究[D]. 王丽. 复旦大学, 2003(03)