一、慢性乙型肝炎分子证候辨证的研究思路与方法简析（论文文献综述）
林芳芳[1]（2021）在《慢性乙型肝炎中医证型与抗-HBc定量水平的相关性研究》文中进行了进一步梳理目的:研究不同证型慢性乙型肝炎（chronic hepatitis B,CHB）患者血清乙型肝炎病毒核心抗体（hepatitis B core antibody,抗-HBc）水平的分布特点及CHB中医证型与抗-HBc定量水平的关系,以期为CHB的中西医结合诊治提供一个参考依据。方法:纳入220例CHB患者作为研究对象,对研究对象进行中医辨证分型,收集其一般资料、实验室指标,运用新型双抗原夹心化学发光法定量检测血清抗-HBc水平,通过统计学分析不同中医证型的抗-HBc定量水平分布情况,并探讨其与中医证型的关系。结果:1.220例CHB患者中医证型分布情况:肝胆湿热证81例、肝郁脾虚证88例、肝肾阴虚证17例、脾肾阳虚证16例、瘀血阻络证18例。肝郁脾虚证>肝胆湿热证>瘀血阻络证>肝肾阴虚证>脾肾阳虚证,其中肝郁脾虚证、肝胆湿热证为主要的中医证型,分别占40.00%、36.82%。2.不同中医证型的CHB患者血清ALT、AST、HBs Ag、HBV DNA水平的分布差异均有统计学意义（P<0.05）。不同中医证型的CHB患者性别、年龄分布差异无统计学意义（P>0.05）。3.不同中医证型的CHB患者肝组织炎症坏死分级的分布差异有统计学意义（?2=93.598,P<0.001）,其中除了肝肾阴虚证与脾肾阳虚证比较差异无统计学意义外（P=0.392）,其他两两证型比较分布差异均有统计学意义（P<0.05）。不同中医证型的肝组织纤维化分期分布差异有统计学意义（?2=26.464,P<0.001）,两两证型比较分布差异均有统计学意义（P<0.05）。4.不同中医证型的CHB患者血清抗-HBc定量水平分布差异有统计学意义（P<0.05）。不同证型的抗-HBc定量水平依次是:瘀血阻络证>肝胆湿热证>脾肾阳虚证>肝肾阴虚证>肝郁脾虚证。其中肝郁脾虚证与肝胆湿热证（P=0.009）、瘀血阻络证（P<0.001）差异有统计学意义。5.CHB患者血清抗-HBc定量水平与临床指标的相关性分析:血清抗-HBc定量水平与血清ALT水平（r=0.388,P<0.001）、AST水平（r=0.410,P<0.001）呈正相关关系;与血清HBs Ag水平（P=0.453>0.05）、HBV DNA水平（P=0.289>0.05）的相关性分析无统计学意义。6.不同肝组织炎症坏死分级的血清抗-HBc定量水平分布差异有统计学意义（Z=17.125,P=0.001）,且肝组织炎症坏死分级与抗-HBc定量水平成正相关（r=0.290,P<0.001）。不同肝组织纤维化分期的抗-HBc定量水平分布差异无统计学意义（P=0.576>0.05）。结论:1.血清抗-HBc定量水平与ALT、AST、肝组织炎症坏死分级正相关,揭示抗-HBc定量水平可能是反映肝脏炎症程度的指标。2.不同中医证型的CHB患者的抗-HBc定量、ALT、AST、HBs Ag、HBV DNA水平及肝组织炎症坏死分级、纤维化分期分布均存在差异,提示结合中医证型与临床指标进行综合评估,可能更有利于CHB病情及预后的准确评估,更有助于CHB的精准治疗。
施梅姐[2]（2020）在《疏肝健脾活血法治疗乙肝肝纤维化的临床回顾性研究及其作用机制的网络药理学探索》文中进行了进一步梳理目前,慢性乙型肝炎仍然是一个全球性的公共卫生问题,严重危害人民健康。肝纤维化是慢性乙型肝炎发展到肝硬化的必经中间环节,若不及时阻断,可进一步进展至肝硬化、门静脉高压及肝癌,甚至进展至终末期肝病危及生命。因此,阻断逆转肝纤维化、防止疾病进一步进展是慢性乙型肝炎的重要防治目标之一。但肝纤维化的治疗当前仍然是慢性乙型肝炎防治的难点问题。目前,现代医学研究的各类特异性的抗纤维化药物制剂绝大多数尚处于实验研究阶段。现代医学治疗慢性乙型肝炎肝纤维化主要是针对病因的治疗,即抗病毒治疗。恩替卡韦是国内外指南推荐的一线抗病毒治疗药物,具有强力抗病毒作用和低耐药的特点,但其存在HBe Ag转换率低的缺点,并且即使抗病毒治疗后仍有相当部分的病人存在肝纤维化进展。因此,如何阻止肝纤维化进展、提高HBe Ag转换率是当前乙肝肝纤维化治疗的难点问题。而大量的研究证实,中医药治疗肝纤维化具有良好的疗效而且无副作用,其疗效及优势已得到国内外学者的广泛认可。在过去的几十年中,诸多研究者针对中医药抗乙肝肝纤维化展开了大量的临床及实验研究。尽管临床上乙肝肝纤维化的辨证分型不统一,但是纵观近十年中医药防治肝纤维化的文献资料,疏肝健脾活血法越来越得到众医家、学者的认可。本人所在科室在既往的临床实践中亦发现疏肝健脾活血法联合抗病毒药治疗可明显改善乙肝肝纤维化患者的抗肝纤维化疗效、提高HBe Ag转换率,但缺乏客观的临床疗效评价及作用机制探讨。目的:本课题第一部分采用文献研究的方法,基于频数分析、复杂网络分析法及关联规则等数据挖掘的方法分析总结疏肝健脾活血法治疗乙肝肝纤维化的用药配伍规律,以期为临床运用疏肝健脾活血法治疗乙肝肝纤维化提供用药参考。第二部分采用回顾性研究的方法观察疏肝健脾活血法对慢性乙型肝炎肝纤维化患者的病理肝纤维化分期、血清肝纤维化指标及肝脏硬度值等指标变化的影响,客观评价其临床疗效,为临床运用用提供客观依据。第三部分运用网络药理学的方法对前面研究总结的疏肝健脾活血法的五味核心药物进行研究,探讨疏肝健脾活血法治疗乙肝肝纤维化的作用靶点、信号通路,以期为后续研究疏肝健脾活血法治疗乙肝肝纤维化的实验研究提供客观的参考依据。方法:第一部分:基于数据挖掘的方法总结疏肝健脾活血法治疗乙肝肝纤维化的用药规律以“中国知网”、“中国生物医学期刊引文数据库”、“重庆维普中文期刊数据库”、“万方医学网”为检索库,检索自建库至2020年9月的疏肝健脾活血法治疗乙肝肝纤维化的现代文献,建立疏肝健脾活血法治疗乙肝肝纤维化的现代文献研究数据库,进一步采用频数分析、复杂网络分析技术、关联规则分析等数据挖掘的方法分析总结疏肝健脾活血法治疗乙肝肝纤维化的用药规律。第二部分:疏肝健脾活血法治疗乙肝肝纤维化的临床研究采用回顾性研究的方法,纳入2010年1月至2020年9月在广东省中医院肝病科门诊及住院就诊的符合纳入排除标准的乙肝肝纤维化病例,分为治疗组与对照组进行回顾性观察,其中对照组服用恩替卡韦治疗,治疗组采用疏肝健脾活血法联合恩替卡韦治疗,收集疗程至少144周的患者的临床资料,比较疏肝健脾活血法联合恩替卡韦治疗与单用恩替卡韦治疗对乙肝肝纤维化患者的病理肝纤维化分期、肝脏硬度值、血清肝纤维化指标及HBe Ag转换率等指标的不同影响,客观评价疏肝健脾活血法联合恩替卡韦治疗乙肝肝纤维化的抗纤维化疗效与抗病毒疗效。第三部分:基于网络药理学探讨疏肝健脾活血法治疗乙肝肝纤维化的作用机制通过中药系统药理学数据库与分析平台（TCMSP）收集筛选疏肝健脾活血法核心药物的主要有效成分及靶点,通过检索Gene Cards、OMIM、Pharm Gkb三个数据库,收集整理乙肝肝纤维化相关的疾病靶点基因,然后运用Venn2.1在线工具绘制药物-疾病靶点的Venn图,获得中药-疾病交互靶点。然后利用STRING数据库及Cytoscape3.8.1软件绘制中药-疾病交互靶点的蛋白质相互作用（PPI）图以及筛选核心基因。最后利用DAVID数据库进行GO与KEGG通路富集分析,进一步分析探讨疏肝健脾活血法治疗乙肝肝纤维化的作用关键靶点与信号通路。结果:第一部分:文献数据挖掘研究初步检索到疏肝健脾活血法治疗乙肝肝纤维化的相关文献257篇,根据标题初筛合格的文献97篇,再根据纳入及排除标准对每一篇文献的内容进行人工筛选,剔除不合格文献后得到最终纳入合格文献48篇,涉及在乙肝肝纤维化治疗涉及处方48首、中药96味,总用药频次为537次,涉及中药种类17种。居前四位的药物种类分别是:补虚药>活血化瘀药>理气药>利水渗湿药,累计频率达88.3%。疏肝健脾活血法中使用频率最高的是补虚药,其次是活血化瘀药与理气药。其中补虚药有黄芪、白术、白芍、鳖甲、当归、党参等;活血化瘀药有丹参、赤芍、郁金、川芎、桃仁等;理气药有柴胡、枳壳、陈皮、香附等。进一步通过复杂网络分析后得到疏肝健脾活血法治疗乙肝肝纤维化的核心药物包括柴胡、丹参、白芍、白术、黄芪、鳖甲、茯苓、赤芍、当归、枳壳、郁金等,居前五位的核心中药分别是:柴胡、丹参、白芍、白术、黄芪。其中理气药与补虚药、活血化瘀药最常见的配伍组合包括柴胡与白芍、丹参相伍,柴胡与白术、白芍相伍,柴胡与黄芪、丹参相伍等,柴胡与白芍是疏肝健脾活血法治疗乙肝肝纤维化最常见的药对。第二部分:临床研究初筛接受恩替卡韦抗病毒初始治疗的乙肝肝纤维化患者898例,二次筛选后共纳入385例接受恩替卡韦治疗144周的乙肝肝纤维化患者。其中完成治疗前后二次肝脏病理学评价患者共81例,完成治疗前后Fibro Scan检测的共83例,完成治疗前后血清肝纤维化指标检测的共114例。运用倾向性评分匹配两组患者的基线资料使两组具有可比性,结果纳入病理疗效分析44例,纳入血清肝纤维指标疗效分析102例,纳入肝脏硬度值疗效分析66例。在病理肝纤维化分期疗效评估方面,疏肝健脾活血法联合恩替卡韦治疗组的肝纤维化逆转率明显高于单用恩替卡韦组（95.5%vs 18.2%,P<0.001）。在肝纤维化进展方面,治疗组无一例发生肝纤维化进展,而对照组仍有50%的患者发生肝纤维化进展。在血清肝纤维化指标疗效评估方面,对照组的透明质酸（HA）水平较治疗前后无明显变化（40.9 vs 46.6,P=0.744）,而治疗组较治疗前下降（55.2 vs 41.4,P=0.003）,且治疗组治疗前后的差值明显高于对照组（P=0.02）。在Fibro Scan肝脏硬度值疗效评估方面,两组患者的肝脏硬度值均较治疗前下降（P均<0.05）,但与对照组相比,治疗组LSM值较治疗前下降的差值更大,但两组患者治疗前后的变化差值无统计学差异（P=0.142）。为进一步观察疏肝健脾活血法对乙肝肝纤维化患者抗病毒疗效的影响,选取70例ALT<2ULN的HBe Ag阳性乙肝肝纤维化患者为研究对象,结果发现两组患者的HBe Ag血清学转换率均逐年上升,但治疗组的HBe Ag转换率增加趋势高于对照组,治疗组48周、96周、144周的HBe Ag转换率分别为17.1%、26.5%、28.6%,高于对照组的2.9%、12.9%、10.3%;其中两组在48周时的HBe Ag转换率存在统计学差异（P=0.046）。第三部分:网络药理学研究基于以上文献与临床研究共同发现的疏肝健脾活血法的五味核心药物为柴胡、丹参、白芍、白术、黄芪,收集这五味核心药物的有效化学成分及靶点,并进一步获取乙肝肝纤维化的疾病靶点。结果共发现疏肝健脾活血法核心药物与乙肝肝纤维化疾病的交互靶点基因共有205个。PPI蛋白质互作网络分析发现疏肝健脾活血法核心药物治疗乙肝肝纤维化的关键靶点在于AKT1、TP53、CDK1、CCNA2、CCNB1、TOP2A、BIRC5、VEGFA、EGFR、CASP3等核心基因。GO分析发现6个最相关的生物过程,包括DNA转录、促进RNA聚合酶II启动子转录、促进DNA转录、炎症反应、抑制凋亡过程与促进细胞增殖;7个最相关的细胞成分,涉及细胞浆、细胞外间隙、细胞核、细胞膜的组成部分、胞外体、细胞质、细胞核仁等;9个最相关的分子功能,包括同源二聚体蛋白质活化、序列特异性DNA结合之转录因子活化、序列特异性DNA结合、血红素结合、序列特异性DNA结合之RNA聚合酶Ⅱ核心启动子近端区、DNA结合、染色质结合、锌离子结合、ATP结合。KEGG分析发现最相关的前10条通路分别是HIF-1、PI3K-Akt、Toll样受体、NF-kappa B、细胞凋亡、p53、NOD样受体、MAPK、VEGF、Fox O信号通路。结论:文献研究发现疏肝健脾活血法治疗乙肝肝纤维化存在一定的配伍规律,其中使用频率最高的是补虚药,其次是活血化瘀药与理气药。补虚药有黄芪、白术、白芍、鳖甲、当归、党参等;活血化瘀药有丹参、赤芍、郁金、川芎、桃仁等;理气药有柴胡、枳壳、陈皮、香附等。疏肝健脾活血法居前五位的核心中药分别是:柴胡、丹参、白芍、白术、黄芪。临床回顾性研究发现疏肝健脾活血法的中药治疗可协同提高恩替卡韦治疗乙肝肝纤维化的抗纤维化疗效与HBe Ag血清学转换率,但仍需下一步开展前瞻性、多中心、大样本的临床研究进一步。网络药理学研究发现疏肝健脾活血法的核心药物能通过多种细胞分子、多种生物过程、多条信号通路参与抗纤维化的过程,其主要作用于细胞浆、细胞外间隙、细胞核等多组分,通过调控HIF-1、PI3K-Akt、Toll样受体、NF-kappa B、细胞凋亡、p53、NOD样受体、MAPK、VEGF、Fox O等多条信号通路,参与同源二聚体蛋白质活化、序列特异性DNA结合、染色质结合、ATP结合等分子功能,调控DNA转录、促进RNA聚合酶II启动子转录、参与炎症反应、抑制凋亡过程与促进细胞增殖等生物过程发挥抗纤维化的治疗作用。但其具体的作用机制仍需下一步开展深入的实验研究进行验证。
马丽[3]（2020）在《基于DNA甲基化对慢性乙型肝炎脾胃湿热证与肝郁脾虚证的研究》文中研究表明慢性乙型肝炎（Chronic hepatitis B,CHB）是世界范围内的重要公共卫生问题,中医药对CHB的防治已显示其独特优势,进一步提高中医药防治能力,深入阐述CHB的证候生物学基础,似为其主要一环。四川地区CHB常见的中医证候为脾胃湿热证与肝郁脾虚证,课题组前期从mi RNA对上述两证候的生物学基础进行了初步研究。有文献表明DNA甲基化参与CHB的发生发展,且DNA甲基化与中医证候的形成在理论上似有契合之处,此或许能为CHB脾胃湿热证与肝郁脾虚证生物学基础的研究提供新的思路。目的:本研究基于前期相关mi RNA研究,多维度综合观察CHB脾胃湿热证与肝郁脾虚证DNA甲基化水平的差异表达,探讨上述两证候的生物学基础是否是通过DNA甲基化与mi RNA相互调控,影响表观遗传,进而调节基因表达,形成不同的证候,以期初步证实DNA甲基化的差异表达是否为CHB证候差异的主要表观遗传机制之一,为上述两种CHB中医证候的客观化与规范化提供部分实证依据。方法:1.招募CHB脾胃湿热证（Spleen-stomach damp heat syndrome,SSDHS）患者7例SSDHS组),肝郁脾虚证（Liver depression and spleen deficiency syndrome,LDSDS）患者7例（LDSDS组）和健康志愿者6例（健康对照组（Healthy control,HC））。2.采集所有受试者清晨空腹、无菌环境下外周静脉血,检测各组间肝功能相关指标、乙肝两对半定性及HBV-DNA含量。3.用ELISA法检测各组间DNA甲基化相关蛋白DNMT1、Me CP2的表达水平及HBV相关蛋白P53、E-cad、P16的表达水平。4.及时分离外周静脉血血清,提取DNA,用Illumina Bead Array TM Infinium850K甲基化芯片检测各组间DNA甲基化差异表达的情况,对差异甲基化位点相关基因进行GO功能富集和KEGG pathway富集分析。5.利用Target Scan7.2与miRDB数据库对不同中医证候中部分相同mi RNAs靶基因进行预测,采用Cytoscape3.6软件构建DNA甲基化基因与mi RNAs预测靶基因共表达网络图。结果:1.SSDHS、LDSDS组分别与HC组相比,在DNMT1、p16表达水平、性别、年龄、病程、生化指标、乙肝两对半定性及HBV-DNA含量检测结果方面均无显着性差异（P>0.05）;E-cad表达水平均有显着性差异（P<0.05）,Me CP2、P53表达水平在SSDHS组中无显着性差异（P>0.05）,在LDSDS组中有显着性差异（P<0.05）。2.Illumina Bead Array TM Infinium 850K甲基化芯片检测结果显示CHB患者组与HC组有7868个显着差异甲基化位点,其中高甲基化位点2310个,低甲基化位点5558个;经过筛选高甲基化差异程度最高的位点为cg03278611位于基因NLGN4Y,低甲基化差异程度最高的位点为cg03670113位于基因TAZ;差异甲基化位点相关基因GO功能主要富集在蛋白质去泛素化、I-kappa B激酶/NF-kappa B信号、脂肪颗粒、各种酶等;KEGG pathway主要富集在类固醇生物合成通路、PPAR信号通路等。3.SSDHS组特有的高甲基化差异程度最高的位点为cg21898358位于基因LILRA3,低甲基化差异程度最高的位点为cg09323788位于基因CHTF18,差异甲基化位点相关基因GO功能主要富集在T细胞共刺激、Rho蛋白信号转导、Rho GTPases相关的功能等;KEGG pathway主要富集在ABC转运蛋白、AMPK信号通路及肿瘤相关通路;LDSDS组特有的高甲基化差异程度最高的位点为cg09857096位于基因BMPR1B,低甲基化差异程度最高的位点为cg09972436位于基因LCE3C,差异甲基化位点相关基因GO功能主要富集在树突棘、丝氨酸/苏氨酸激酶、Rac GTPase等;KEGG pathway主要富集在苯丙氨酸代谢、氮代谢、丙氨酸、天门冬氨酸和谷氨酸代谢等代谢通路;SSDHS组与LDSDS组间最显着的高甲基化位点为cg10765459位于基因COL6A2,最显着的低甲基化位点为cg07445365位于基因STK32C,差异甲基化位点相关基因GO功能主要富集在肌动蛋白相关细胞及组织,KEGG pathway主要富集在Erb B信号通路及代谢通路等。4.SSDHS、LDSDS组差异甲基化位点相关基因分别与mi R-122-5p、mi R-1228-3p、mi R-191-3p预测靶基因进行对比分析:两证候差异甲基化位点相关基因与mi R-122-5p预测靶基因均有6个基因重合,其中SSDHS组独有基因为RIMS1,LDSDS组独有基因为SLC41A1;SSDHS组差异甲基化位点相关基因与mi R-1228-3p预测靶基因有21个基因重合,该组独有基因为OTUB、AMPH、SEMA3C、ZC3H12B、PCGF3、JAKMIP3,LDSDS组差异甲基化位点相关基因与mi R-1228-3p预测靶基因有17个基因重合,该组独有基因为ARID1B、NUDT7;SSDHS组差异甲基化位点相关基因与mi R-191-3p预测靶基因有2个基因重合,该组独有基因为MPP7、LDSDS组差异甲基化基因与mi R-191-3p预测靶基因有3个基因重合,该组独有基因为SPTB2、CCNY。结论:1.Me CP2、P53可能通过影响DNA甲基化修饰参与CHB肝郁脾虚证的形成;E-cad可能是CHB脾胃湿热证或肝郁脾虚证形成的物质基础之一。2.CHB患者存在DNA甲基化的差异表达,具体机制可能与NLGN4Y、TAZ等基因的甲基化及蛋白质去泛素化、I-kappa B激酶/NF-kappa B信号、类固醇生物合成通路、PPAR信号通路等有关。3.CHB脾胃湿热证与肝郁脾虚证均存在DNA甲基化的差异表达,同时分别具有各自特有的DNA甲基化谱。LILRA3、CHTF18等基因的甲基化及T细胞共刺激诱导肝脏炎症等,可能是CHB脾胃湿热证的分子生物学基础;BMPR1B、LCE3C等基因的甲基化及树突棘的改变和物质代谢异常等,可能是CHB肝郁脾虚证的分子生物学基础,提示DNA甲基化可能为CHB脾胃湿热证与肝郁脾虚证差异的表观遗传机制之一。4.不同证候出现部分相同mi RNA的原因可能与其影响不同靶基因甲基化水平的差异性有关,具体调控机制尚需进一步研究证实。
桑小普[4]（2020）在《慢性胃炎脾虚证相关lncRNA-miRNA-mRNA调控网络研究》文中研究指明脾虚证本质的研究是中医现代化研究的重要内容之一。随着研究的深入,人们发现脾虚证的致病机理涉及消化系统、免疫系统、内分泌系统、神经系统、血液系统、肠道菌群和能量代谢等多个方面。近年来,系统生物学的方法开始应用于脾虚证本质研究,但尚处于初步阶段。目前已有学者分别使用iTRAQ技术、16S rDNA测序技术和基因芯片技术对脾虚证的蛋白组学、微生物组学和转录组学进行了探索,但是,应用RNA-seq或Small RNA-seq技术进行脾虚证研究的相关报道较少。本论文共分为两部分。由于气虚体质是脾虚证的前驱状态,研究健康人气虚体质的生物学机制将有助于理解脾虚证的早期发生状态。论文的第一部分研究了健康人气虚体质相关差异表达lncRNA、miRNA和mRNA并构建了 ceRNA网络调控。论文第二部分研究了慢性胃炎脾虚证相关差异表达lncRNA、miRNA和mRNA并构建了 ceRNA网络调控,从病证结合的角度,研究脾虚证的病理机制。目的:在本次研究中我们以健康人气虚体质、慢性浅表性胃炎（Chronic Superficial Gastritis,CSG）脾虚证和慢性萎缩性胃炎（Chronic Atrophic Gastritis,CAG）脾虚证人群为研究对象,应用最前沿的RNA-seq技术和ceRNA理论,从转录组学水平上进行了脾虚证内在生物学机制的研究。综合两部分的研究结果,我们试图从体质、证候、疾病的自然进展方向,研究健康人气虚体质、CSG脾虚证和CAG脾虚证内在转录调控机制的相互关联,找到“气虚体质—脾虚证”相关的生物标志物或标志网络,以期阐释脾虚证的生物学基础。本研究也有助于预测疾病的发生与发展,从而为明确脾虚证自身特点及与其他因素（如体质、证候、疾病等）的关系提供了可能。方法:2016年6月～2018年12月期间,在北京中医药大学附属东方医院通过广告或电话进行健康受试者招募,包括健康人平和体质、气虚体质和湿热体质。同期进行慢性胃炎患者招募,包括慢性浅表性胃炎（脾虚证、湿热证）,慢性萎缩性胃炎（脾虚证、湿热证）患者。采集临床研究受试者外周血,分离白细胞后提取总RNA,分别进行RNA-seq和Small RNA-seq分析。获得的测序数据用生物信息学方法进行分析,筛选出差异表达的mRNA、lncRNA和miRNA,对差异表达基因进行生物功能与信号通路富集分析。对差异表达的mRNA、lncRNA和miRNA进行ceRNA网络构建,获得脾虚证相关的ceRNA调控网络关系。本研究经北京中医药大学东方医院临床研究伦理委员会审查,伦理审批号:JDF-IRB-2016031002临床研究注册号:NCT02915393。结果:第一部分:1、在本研究中,我们总共纳入病例25例,分别为健康人平和体质13例、气虚体质7例、湿热体质5例。随机选择了健康人平和体质5例、气虚体质5例、湿热体质4例的外周血白细胞样本的总RNA进行了 RNA-seq和Small RNA-seq分析。2、通过对测序数据的生物信息学分析,我们获得了健康人气虚体质相关的差异表达mRNA60个、lncRNA76个、miRNA42个。功能分析发现,细胞质膜组成成分和细胞质膜在差异表达mRNA和miRNA的GO富集中出现。蛋白丝氨酸/苏氨酸激酶活性在差异表达lncRNA和miRNA的GO富集中出现。在对健康人气虚体质相关差异基因的通路分析中发现,赖氨酸降解在差异表达lncRNA和miRNA的KEGG富集中出现。3、通过对健康人气虚体质的差异表达miRNA、mRNA和lncRNA进行ceRNA分析,共获得3182个miRNA-lncRNA对,955个miRNA-mRNA对,最终筛选到9514对ceRNA。这些ceRNA调控网络涉及了 36个GO功能和31个KEGG信号通路。4、从健康人气虚体质差异表达的mRNA中筛选出99个免疫相关的基因,涉及了11个GO功能和8个KEGG信号通路。第二部分:1、在本研究中,我们总共纳入病例70例,分别为CSG脾虚证28例、湿热证21例;CAG脾虚证7例、湿热证14例。随机选择了CSG脾虚证6例、CSG湿热证5例、CAG脾虚证5例,CAG湿热证5例的外周血白细胞样本的总RNA进行了 RNA-seq和Small RNA-seq建库和测序。2、通过对测序数据的生物信息学分析,我们获得了CSG脾虚证患者相关的差异表达mRNA7个、lncRNA 103个、miRNA4个。在对CSG脾虚证相关的差异基因的功能分析中发现,细胞质膜在差异表达mRNA和miRNA的GO分析中均显着富集。在对CSG脾虚证相关的差异基因的功能分析中发现,胰岛素分泌以及胰岛素信号通路分别在差异表达mRNA和miRNA的KEGG分析中显着富集。通过对CSG脾虚证的差异表达 miRNA、mRNA 和 lncRNA 进行 ceRNA 分析,共获得 433 个 miRNA-lncRNA 对,226个miRNA-mRNA对,最终筛选到548对ceRNA。这些ceRNA调控网络涉及了10个GO功能和11个KEGG信号通路。从CSG脾虚证差异表达的mRNA中筛选出89个免疫相关的基因,涉及了 66个GO功能和15个KEGG信号通路。3、我们获得了 CAG脾虚证患者相关的差异表达mRNA 20个、lncRNA 79个、miRNA 29个。在对CAG脾虚证相关的差异基因的功能分析中发现,细胞质膜和细胞质膜的组成成分在差异表达mRNA和miRNA的GO分析中均显着富集。通过对CAG脾虚证的差异表达miRNA、mRNA和lncRNA进行ceRNA分析,共获得1028个miRNA-lncRNA对,1123个miRNA-mRNA对,最终筛选到3625对ceRNA。这些ceRNA调控网络涉及了 59个GO功能和34个KEGG信号通路。从CAG脾虚证差异表达的mRNA中筛选出139个免疫相关的基因,涉及了 20个GO功能和28个KEGG信号通路。4、从上述测序结果中进一步挖掘,获得脾虚证相关的差异表达mRNA 570个、lncRNA2009个、miRNA 303个,这些差异基因涉及了 9个GO功能和4个KEGG信号通路。通过对CAG脾虚证的差异表达miRNA、mRNA和lncRNA进行ceRNA分析,共获得6个miRNA-lncRNA对,9个miRNA-mRNA对,最终筛选到4对ceRNA,其中的关键基因CD300H的mRNA水平在气虚体质和脾虚证中显着降低（P=0.03）。从CAG脾虚证差异表达的mRNA中筛选出84个免疫相关的基因,涉及了 9个GO功能和18个KEGG信号通路。结论:健康人气虚体质与慢性胃炎脾虚证存在特异的转录组表达谱,且气虚体质与脾虚证的差异基因表达谱具有一定的相似性,尤其体现在免疫相关的基因表达方面。功能分析提示“气虚体质—脾虚证”涉及多种免疫相关功能异常,此外在激素分泌、细胞质膜、信号转导、物质代谢等多种生命活动中存在差异。转录组学的联合分析揭示了CD300H基因的ceRNA参与“气虚体质—脾虚证”相关的转录调控网络。本研究的结果为挖掘脾虚证潜在的生物学基础提供了重要参考。
汤琛琛[5]（2019）在《基于转录组的慢乙肝和非酒精性脂肪肝“异病同证”生物物质基础研究》文中研究表明研究目的:（1）基于转录组数据及分子生物学验证,筛选慢乙肝（CHB）及非酒精性脂肪肝（NAFLD）“异病同证”潜在特征m RNA。（2）计算CHB及NAFLD肝胆湿热证中医证候特征与核心基因之间的动态关联,探讨CHB及NAFLD“异病同证”关系机制,为CHB和NAFLD辨证施治提供客观依据。研究方法:（1）针对转录组表达谱数据的特征,设计随机方差模型RVM算法,利用GEO数据库中现有的表达谱数据进行RVM算法训练,获得差异表达基因筛选的最优参数。（2）收集CHB和NAFLD肝胆湿热证患者中医证候信息,采集CHB、NAFLD及健康志愿者血淋巴细胞样本,检测样本转录组（m RNA）表达谱数据,利用RVM算法筛选差异表达基因,对差异表达基因进行基因本体（GO）、KEGG等功能富集分析,获得CHB和NAFLD肝胆湿热证的特征生物物质基础;（3）利用Cytoscape程序构建CHB及NAFLD肝胆湿热证共表达基因调控网络。利用Cluster ONE程序进行网络核心Cluster筛选并重构核心Cluster网络,计算网络拓扑结构参数并筛选Cluster网络的核心节点作为重要的特征生物物质（m RNA）;（4）分别对CHB及NAFLD肝胆湿热证中核心特征生物物质（m RNA）进行q RT-PCR验证,运用多元逐步回归、ROC分析方法确定CHB及NAFLD“异病同证”的核心特征生物物质。设计DFAA关联算法进行CHB及NAFLD肝胆湿热证特征生物物质与中医证候特征的动态关联分析,从物质基础及证候特征层面揭示CHB及NAFLD肝胆湿热证“异病同证”的内涵及关系机制。研究结果:（1）高通量转录组数据的随机方差模型RVM算法实现。以GEO数据库中GSE121248数据进行RVM算法训练,结果表明RVM算法可有效提高差异表达基因筛选效率。（2）CHB及NAFLD肝胆湿热证特征生物物基础。利用RVM算法分别对CHB及NAFLD肝胆湿热证的差异表达基因进行筛选,在p<0.001的条件下,CHB肝胆湿热证中获得有1618个差异表达基因,其中表达上调的基因有622个,表达下调的基因有961个;NAFLD肝胆湿热证中获得有343个差异表达基因,其中表达上调的基因有227个,表达下调的基因有116个。共表达基因分析显示CHB及NAFLD中有305条共表达基因,其中134条基因再两组中的表达趋势一致,171条在两组中表达趋势不一致。基因本体（GO）及KEGG通路分析显示这些共表达基因在CHB及NAFLD“同病异证”关系机制中具有重要作用。（3）利用Cytoscape软件构建CHB及NAFLD肝胆湿热证共表达基因调控网络,运用Cluster ONE方法对网络中的核心Cluster进行筛选并重构Cluster网络,计算Cluster网络的度分布（Degree）、拓扑系数（Topological Coefficient）、聚类系数（Clustering Coefficient）、中介中心性（Betweenness Centrality）、接近中心性（Closeness Centrality）等参数,按照参数平均值以上为标准筛选8个核心节点作为CHB及NAFLD肝胆湿热证共表达核心特征生物物质,分别为AK1、BLVRB、GLUL、NFIX、PTPRC、RIOK3、SHARPIN及SPTB。（4）运用q RT-PCR方法对CHB及NAFLD肝胆湿热证核心特征生物物质进行验证,多元逐步回归及ROC分析结果显示这8个核心节点是CHB及NAFLD“异病同证”关系机制中重要的特征生物物质。利用DFAA算法对CHB（n=385）及NAFLD（n=355）肝胆湿热证109个中医四诊信息与8个共表达基因进行关联分析并提取出25个与CHB及NAFLD“异病同证”关系机制密切相关的中医证候特征。结论:本研究通过随机方差模型RVM算法对CHB及NAFLD肝胆湿热证的差异表达基因进行筛选,并获得了305个共表达基因。利用Cytoscape软件构建CHB及NAFLD肝胆湿热证共表达基因调控网络并获得8个核心基因,分别为AK1、BLVRB、GLUL、NFIX、PTPRC、RIOK3、SHARPIN及SPTB。q RT-PCR验证及数据分析显示这些核心基因可能是CHB及NAFLD“异病同证”关系机制中重要特征生物物质。进一步对CHB（n=385）及NAFLD（n=355）肝胆湿热证109个中医四诊信息与8个共表达基因进行动态关联度分析,提取出25个中医特征信息可作为CHB及NAFLD“异病同证”关系机制的中医证候特征,并与8个核心共表达基因一起参与CHB及NAFLD肝胆湿热证病证关系机制的调控。
席婷[6]（2019）在《慢性乙型肝炎肝胆湿热与无证可辨型差异表达蛋白研究》文中认为目的基于课题组前期应用蛋白芯片技术和iTRAQ结合LC-MS/MS技术研究慢性乙型肝炎不同中医证型的差异表达蛋白质,本研究采用ELISA方法检测慢性乙型肝炎肝胆湿热证相关蛋白1-309、MCP-1、SDF-1、FAP、M-CSF、IGF-1、VCAM-1、ApoM在该证型及无证可辨型的表达水平,以期获得与慢性乙型肝炎肝胆湿热证相关的蛋白质物质基础。方法纳入慢性乙型肝炎肝胆湿热型样本30例、慢性乙型肝炎无证可辨型样本15例,健康对照样本15例。取各组样本外周静脉全血,采用ELISA方法检测目标蛋白质在各组的表达水平。利用STRING数据库对差异蛋白进行GO富集分析和KEGG信号通路富集分析。本研究中所有资料均采用SPSS 22软件进行统计学分析,绘制ROC曲线时采用MedCalc 19.0.3软件。结果1.与健康对照组比较,慢性乙型肝炎肝胆湿热组、无证可辨组I-309、MCP-1、SDF-1、FAP、M-CSF、IGF-1、VCAM-1蛋白表达均上调,差异有统计学意义（P<0.05）;ApoM蛋白表达均下调,差异有统计学意义（P<0.05）。2.与慢性乙型肝炎无证可辨组比较,慢性乙型肝炎肝胆湿热组TBIL水平升高,差异无统计学意义（P>0.05）;ALT、AST、HBV DNA水平下降,差异无统计学意义（P>0.05）;1-309、MCP-1、SDF-1、FAP、M-CSF、IGF-1、VCAM-1蛋白表达下调,差异有统计学意义（P<0.05）;ApoM蛋白表达上调,差异无统计学意义（P>0.05）。3.1-309、MCP-1、SDF-1、FAP、M-CSF、IGF-1、VCAM-1 蛋白的 GO 富集分析以及KEGG信号通路富集分析显示,在生物过程中主要参与免疫系统过程中的正向调节,白细胞趋化、T细胞活化的正向调节,细胞黏附、迁移、增殖的正向调节,对刺激的应答、炎症反应、信号受体活性的调节等;在分子功能中,主要参与信号受体结合,整合素结合,受体配体活性,细胞因子活性,趋化因子活性等;在细胞位置中,主要位于细胞外间隙、细胞外区等;主要富集在细胞因子-细胞因子受体相互作用信号通路、类风湿性关节炎信号通路、TNF信号通路、趋化因子信号通路等。4.R OC 曲线分析显示,I-309、MCP-1、SDF-1、FAP、M-CSF、IGF-1、VCAM-1蛋白组合鉴别诊断慢性乙型肝炎肝胆湿热型与慢性乙型肝炎无证可辨型的灵敏度、特异度、曲线下面积分别为96.67%、93.33%、0.960。结论1.1-309、MCP-1、SDF-1、FAP、M-CSF、IGF-1、VCAM-1、ApoM 蛋白表达水平变化与慢性乙型肝炎有关。2.1-309、MCP-1、SDF-1、FAP、M-CSF、IGF-1、VCAM-1 蛋白表达水平变化与慢性乙型肝炎肝胆湿热证证候特征有关,差异表达蛋白功能主要涉及对T淋巴细胞、单核细胞的调节作用,为开展证候发生的生物学调控机制研究提供了方向。
张惜燕[7]（2019）在《当代中医病机创新理论研究》文中研究表明目的:本研究通过系统梳理60余年来中医病机理论研究的创新成果,分类整理病机创新理论所涉及的具体内容以及中医病机创新理论体系的构建,全面展示现代中医病机理论创新研究的现状,深入探讨现代中医病机理论的演变规律,明确中医病机理论的发展趋势与研究路径,以期能补充丰富传统中医病机理论体系,推动构建当代中医病机学。方法:充分收集中医病机理论创新研究的相关文献,在对“病机创新理论”的范畴进行严格界定的基础上,根据研究对象及目的,首先采用文献研究法进行文献查找、筛选,再依据逻辑分析法、科学哲学研究法对提取归纳的病机创新理论进行概念规范、特性厘清、层级划分、分类鉴别,创新性质及其临床意义的评价,病机创新理论演变规律的分析,最终构建创新性中医病机理论体系。结果:本研究通过系统梳理中医病机理论研究的创新成果:（1）从概念的内涵与外延（要素、分层、分类）对“病机”进行科学定义,从而准确指导病机创新理论的评价研究。病机作为疾病发生、发展、转归机理的本质概括,以因、位、性、势四者为基本要素,可分为单一病机与复合病机两类,层级划分是对病机从宏观到具体的准确把握。现代对“证”的内涵研究认识未达统一,病机与证的关系还需进一步探索。（2）系统梳理病机理论创新的研究成果,依据内容划分为毒邪病机、络病病机、毒损络脉病机、伏邪病机、玄府病机、情志病机、上火病机、复合病机及其他病机九个方面。界定各病机理论的概念或含义,厘清其形成原因、致病特性、致病机理、临床表征、生物学基础、鉴别分类、创新应用等,理清其逻辑层次,展示病机创新理论的研究现状,初步形成了共识性的病机创新理论。（3）从传统中医病机理论体系的初步形成到建立,深入剖析其所存在的内容不确定、层级不清晰、体系不完善等问题,基于此构建创新性的中医病机理论体系。创新性主要体现在,一是以脏腑经络分系统,以外感内伤分类病,明确系统病机与类病病机的概念内涵及要素;二是明确内生五邪病机是内伤病机,应归属于类病病机范畴;三是初步将病机理论创新的研究成果纳入创新性中医病机理论体系。（4）剖析中医病机创新理论形成的规律,建立病机理论创新科学的研究方法。研究了病机创新理论形成的四大影响因素,包括哲学思维、疾病谱变化、现代科技和其他因素;探索了病机创新理论形成的三大模式,包括临床实践的总结概括,经典理论的挖掘诠释,病机假说的检验验证;提出了病机理论的创新路径和整体要求。结论:界定“病机”“伏邪”“玄府”“情志病因”“上火”等概念范畴,为病机创新理论的研究和病机理论体系的建立提供依据;梳理总结毒邪病机、络病病机、毒损络脉病机、伏邪病机、玄府病机、情志病机、上火病机、复合病机及其他病机九个方面的病机创新理论,可促进中医临床疗效的提高;创新构建一个内容明确、结构合理、逻辑清晰的中医病机理论体系,阐明中医病机理论的发展规律和内在逻辑;研究病机理论的创新规律,为病机创新理论的系统评价提供依据,有助于形成科学有效的病机创新理论。诸方面一定程度上补充丰富了传统中医病机理论,促进了现代中医病机学的发展。
秦冰[8]（2018）在《基于“异病同证”理论对慢性乙型肝炎与慢性胃炎脾胃湿热证相关特异性microRNA的验证研究》文中提出目的对前期芯片筛选结果中具有显着差异表达microRNA进一步行临床验证,将目的microRNA的表达变化情况与筛选结果进行比对,以期获得慢性乙型肝炎脾胃湿热证与慢性胃炎脾胃湿热证的特征性microRNA,从microRNA角度进一步明确脾胃湿热证的生物学基础和科学内涵,探讨中医学“异病同证”的潜在生物学标志物,为中医证候诊断提供科学的客观化依据。方法选取课题组前期筛选出的显着差异表达microRNA,慢性乙型肝炎脾胃湿热证与慢性胃炎脾胃湿热证两证共同表达microRNA4条,分别为:hsa-miR-483-3p、hsa-miR-223-3p、hsa-miR-4419b、hsa-miR-1273g-3p。研究对象设为慢性乙型肝炎脾胃湿热证组、慢性胃炎脾胃湿热证组及健康对照组,各13例,取患者和健康志愿者肘静脉全血标本,采用qRT-PCR实时荧光定量法对其血液样本进行microRNA检测获得表达量。本研究中所有资料均采用Spss.20软件进行统计学分析。结果（1）慢性乙型肝炎脾胃湿热证组与健康对照组对比,hsa-miR-483-3p、hsa-miR-1273g-3p在慢性乙型肝炎脾胃湿热证表达上调,差异有统计学意义（P<0.05）,与前期筛选结果一致;hsa-miR-223-3p在慢性乙型肝炎脾胃湿热证表达上调,差异有统计学意义（P<0.05）,与前期筛选结果不一致;phsa-miR-4419b差异无统计学意义（P>0.05）。（2）慢性胃炎脾胃湿热证组与健康对照组对比,hsa-miR-483-3p在慢性胃炎脾胃湿热证表达上调,差异有统计学意义（P<0.05）,与前期筛选结果一致;hsa-miR-223-3p、hsa-miR-1273g-3p、hsa-miR-4419b差异无统计学意义（P>0.05）。（3）慢性乙型肝炎脾胃湿热证组与慢性胃炎脾胃湿热证组对比,hsa-miR-483-3p、hsa-miR-223-3p、hsa-miR-1273g-3p、hsa-miR-4419b差异均无统计学意义（P>0.05）。结论1.hsa-miR-483-3p在慢性乙型肝炎脾胃湿热证组与慢性胃炎脾胃湿热证组中均表达上调且有统计学意义,说明hsa-miR-483-3p与脾胃湿热证具有一定的相关性,可能为脾胃湿热证的潜在生物学标志物。2.hsa-miR-1273g-3p在慢性乙型肝炎脾胃湿热证组中表达上调且具有统计学意义,与慢性乙肝炎脾胃湿热证具有一定相关性,具有潜在生物学标志物意义。3.本研究获得脾胃湿热证的特异性microRNA,证实了“异病同证”之间确实存在相同或相似的微观机制,从microRNA角度进一步探明脾胃湿热证的生物学基础和科学内涵。
王云翠,李圣洁,熊振芳,胡慧,贺惠娟,冯琳,徐倩[9]（2016）在《肝郁脾虚型慢性乙型肝炎患者中医辨证施护的理论研究》文中进行了进一步梳理辨证论治是中医治疗疾病的基础,对于慢性乙型病毒性肝炎的中医辨证论治已有较为详细理论及临床研究,但对慢性乙型病毒性肝炎患者进行辨证施护的研究并不多。通过对有关肝郁脾虚型慢性乙型病毒性肝炎患者中医护理干预文献的梳理、总结以及思考,为慢性乙型病毒性肝炎的辨施护理提供理论依据。
国家中医药管理局国家中医临床研究基地办公室[10]（2013）在《我国16个重点病种的国家中医临床研究基地论文统计表（2008年～2013年）》文中提出
二、慢性乙型肝炎分子证候辨证的研究思路与方法简析（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、慢性乙型肝炎分子证候辨证的研究思路与方法简析（论文提纲范文）
（1）慢性乙型肝炎中医证型与抗-HBc定量水平的相关性研究（论文提纲范文）
| 中英文缩写 |
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 临床资料与方法 |
| 1 研究设计 |
| 2 研究对象 |
| 3 诊断标准 |
| 3.1 西医诊断标准 |
| 3.2 中医辨证分型标准 |
| 4 纳入标准 |
| 5 排除标准 |
| 6 检测指标及检测方法 |
| 6.1 肝功能检测 |
| 6.2 血清HBVM检测 |
| 6.3 血清HBV DNA水平检测 |
| 6.4 肝穿刺活检 |
| 6.5 血清抗-HBc定量水平检测 |
| 7 统计分析方法 |
| 结果 |
| 1 一般资料 |
| 1.1 连续型变量的统计描述 |
| 1.2 不同中医证型分布 |
| 1.3 不同中医证型性别、年龄(区段)分布 |
| 2 中医证型与血清ALT、AST水平的关系 |
| 3 中医证型与血清HBs Ag、HBV DNA水平的关系 |
| 4 中医证型与肝组织病理学的关系 |
| 5 中医证型与血清抗-HBc定量水平的关系 |
| 6 各指标的相关性分析 |
| 6.1 血清抗-HBc定量水平与临床指标的相关性 |
| 6.2 血清抗-HBc定量水平与肝组织炎症坏死分级、纤维化分期的相关性 |
| 讨论 |
| 1 中医对CHB的研究概况 |
| 1.1 CHB中医病名及病因病机、辨证分型的认识 |
| 1.2 CHB中医证型与实验室相关指标的关系 |
| 2 抗-HBc的研究现状 |
| 2.1 抗-HBc定量水平与血清HBs Ag、HBV DNA水平的关系 |
| 2.2 抗-HBc定量水平与血清ALT、AST水平的关系 |
| 2.3 抗-HBc定量水平与肝组织炎症坏死分级、纤维化分期的关系 |
| 2.4 抗-HBc定量水平与CHB临床转归及预后关系研究 |
| 3 中医证型与抗-HBc定量水平的关系 |
| 不足与展望 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 文献综述 慢性乙型肝炎中医证型与现代学指标的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 作者简历 |
（2）疏肝健脾活血法治疗乙肝肝纤维化的临床回顾性研究及其作用机制的网络药理学探索（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 第一章 文献研究 |
| 第一节 慢性乙型肝炎肝纤维化的西医研究进展 |
| 一、现代医学对乙肝肝纤维化发病机制的认识 |
| 二、乙肝肝纤维化相关的信号通路研究现状 |
| 三、乙肝肝纤维化的现代诊断技术 |
| 四、乙肝肝纤维化的西医治疗现状 |
| 五、展望与体会 |
| 第二节 慢性乙型肝炎肝纤维化的中医研究进展 |
| 一、慢性乙型肝炎肝纤维化的病因病机研究 |
| 二、慢性乙型肝炎肝纤维化的中医辨证分型 |
| 三、慢性乙型肝炎肝纤维化的中医药治疗 |
| 四、展望 |
| 第三节 疏肝健脾活血法治疗乙肝肝纤维化的理论依据与临床应用概况 |
| 一、疏肝健脾活血法治疗乙肝肝纤维化的理论依据 |
| 二、疏肝健脾活血法治疗乙肝肝纤维化的临床应用概况 |
| 第四节 数据挖掘技术在中医药研究领域的运用现状 |
| 一、频数分析技术 |
| 二、关联规则挖掘技术 |
| 三、聚类分析技术 |
| 四、复杂网络分析技术 |
| 五、贝叶斯网络 |
| 六、因子分析技术 |
| 第五节 网络药理学在中医药研究领域运用的研究进展 |
| 一、网络药理学的研究方法 |
| 二、网络药理学在中医药领域的运用 |
| 三、不足与展望 |
| 第二章 疏肝健脾活血法治疗乙肝肝纤维化的用药规律探讨 |
| 一、资料与方法 |
| (一)资料来源 |
| (二)文献纳入标准 |
| (三)文献排除标准 |
| (四)文献检索策略 |
| (五)资料提取 |
| (六)数据预处理 |
| (七)统计方法 |
| 二、结果 |
| (一)一般情况 |
| (二)单味中药选用频数及频数分布 |
| (二)药物种类频数及频数分布 |
| (三)基于复杂网络技术分析疏肝健脾活血法治疗乙肝肝纤维化的核心药物 |
| (四)基于关联规则技术分析疏肝健脾活血法治疗乙肝肝纤维化的常用药物配伍规律 |
| 三、讨论 |
| 第三章 疏肝健脾活血法治疗乙肝肝纤维化的临床研究 |
| 一、研究目的 |
| 二、研究内容 |
| 三、研究方法 |
| 四、研究方案 |
| 五、研究结果 |
| (一)一般情况 |
| (二)疏肝健脾活血法治疗乙肝肝纤维化患者的抗纤维化疗效分析 |
| (三)疏肝健脾活血法对乙肝肝纤维化患者抗病毒疗效的影响 |
| (四) 安全性分析 |
| 六、讨论 |
| 第四章 基于网络药理学探讨疏肝健脾活血法治疗乙肝肝纤维化的作用机制 |
| 一、研究概要 |
| 二、材料与方法 |
| 三、结果 |
| (一)疏肝健脾活血法核心药物的潜在有效成分及相关靶点 |
| (二) “中药-疾病”交互靶点的筛选 |
| (三) “中药-疾病”交互靶点PPI网络的构建及核心基因的筛选 |
| (四) “中药-疾病”交互靶点的GO和KEGG富集分析 |
| 四、讨论 |
| 结语 |
| 一、主要结论 |
| 二、创新点 |
| 三、不足之处 |
| 四、展望 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 在校期间发表论文情况 |
| 致谢 |
| 统计学审核证明 |
（3）基于DNA甲基化对慢性乙型肝炎脾胃湿热证与肝郁脾虚证的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 中英文缩略词对照表 |
| 引言 |
| 第一部分 文献研究 |
| 文献研究一 慢性乙型肝炎中医证候客观化规范化研究概述 |
| 1 中医对CHB病名的认识 |
| 1.1 肝着 |
| 1.2 肝毒 |
| 1.3 胁痞 |
| 1.4 异湿 |
| 2 中医对CHB病因病机的认识 |
| 2.1 湿热疫毒是本病的始动因素 |
| 2.2 毒损肝络是本病的病机关键 |
| 2.3 正气之盛虚决定本病的转归及预后 |
| 2.4 发则有证可辨,伏则无机可循为本病的发病特点 |
| 3 CHB中医证候分型指南与标准 |
| 4 影响CHB中医证候分布的相关因素 |
| 4.1 不同地域的CHB证候分布具有差异性 |
| 4.2 体质类型与CHB证候分布具有相关性 |
| 4.3 情志及生存质量的改变是部分CHB证候分布的易感性因素 |
| 5 中医证候的客观化规范化研究 |
| 5.1 肝功能指标 |
| 5.2 肝组织病理分级分期 |
| 5.3 肝脏硬度及肝纤维化值 |
| 5.4 细胞因子及免疫蛋白 |
| 5.5 HBV基因型 |
| 5.6 基因组学 |
| 5.7 转录组学 |
| 5.8 蛋白组学 |
| 5.9 代谢组学 |
| 6 小结 |
| 文献研究二 DNA甲基化在中医证候的应用研究 |
| 1 DNA甲基化概述 |
| 2 DNA甲基化在CHB发病机制中的作用 |
| 2.1 DNA甲基化与HBV |
| 2.2 Cp G岛与HBV基因型 |
| 2.3 DNMTs与 HBV |
| 2.4 甲基化相关蛋白与CHB |
| 3 DNA甲基化在中医证候的应用 |
| 4 小结 |
| 第二部分 实验研究 |
| 实验一 慢性乙型肝炎脾胃湿热证与肝郁脾虚证DNA甲基化及HBV相关蛋白的研究 |
| 1 材料 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.2 实验材料 |
| 2 方法 |
| 2.1 常规检测方法 |
| 2.2 ELISA检测方法 |
| 2.3 数据分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 一般资料收集结果 |
| 3.2 乙肝两对半定性检测结果 |
| 3.3 生化指标检测结果 |
| 3.4 HBV定性定量检测结果 |
| 3.5 DNA甲基化及HBV相关蛋白检测结果 |
| 4 讨论 |
| 4.1 中医证候与DNMT1间关系的探讨 |
| 4.2 中医证候与MeCP2间关系的探讨 |
| 4.3 中医证候与P53间关系的探讨 |
| 4.4 中医证候与E-cad间关系的探讨 |
| 4.5 中医证候与P16间关系的探讨 |
| 5 小结 |
| 实验二 慢性乙型肝炎全基因组DNA甲基化的研究 |
| 1 材料 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.2 样本采集 |
| 2 方法 |
| 2.1 Infinium Human Methylation850K甲基化芯片简介 |
| 2.2 DNA抽提 |
| 2.3 DNA样本质检 |
| 2.4 DNA甲基化芯片实验流程 |
| 2.5 DNA甲基化芯片数据分析流程 |
| 2.6 数据分析 |
| 3 结果 |
| 3.1 DNA样本质检结果 |
| 3.2 实验质控结果 |
| 3.3 样本beta值密度曲线 |
| 3.4 数据归一化 |
| 3.5 差异甲基化位点筛选结果 |
| 3.6 GO功能富集结果 |
| 3.7 KEGG pathway富集结果 |
| 3.8 差异甲基化区域结果 |
| 4 讨论 |
| 4.1 差异甲基化位点结果分析 |
| 4.2 差异甲基化位点相关基因GO功能富集结果分析 |
| 4.3 差异甲基化位点相关基因KEGG pathway富集分析 |
| 5 小结 |
| 实验三 慢性乙型肝炎脾胃湿热证与肝郁脾虚证DNA甲基化研究 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 不同中医证候差异甲基化位点筛选结果 |
| 3.2 不同中医证候GO功能富集结果 |
| 3.3 不同中医证候KEGG pathway富集结果 |
| 3.4 不同证候差异甲基化区域分布结果 |
| 4 讨论 |
| 4.1 脾胃湿热证与肝郁脾虚证是四川地区CHB常见的中医证候 |
| 4.2 中医证候与DNA甲基化在理论上有共通之处 |
| 4.3 不同中医证候差异甲基化表达分析 |
| 5 小结 |
| 实验四 慢性乙型肝炎脾胃湿热证与肝郁脾虚证DNA甲基化与mi RNA联合分析 |
| 1 材料 |
| 2 方法 |
| 3 结果 |
| 3.1 不同中医证候中4条相同miRNA靶基因预测结果 |
| 3.2 不同中医证候差异甲基化位点相关基因筛选结果 |
| 3.3 miRNA预测靶基因与差异甲基化位点相关基因联合分析 |
| 4 讨论 |
| 4.1 mi RNA与 DNA甲基化间存在相互调控关系 |
| 4.2 miR-122-5p与不同中医证侯差异甲基化位点相关基因融合分析 |
| 4.3 miR-1228-3p与不同中医证侯差异甲基化位点相关基因融合分析 |
| 4.4 miR-191-3p与不同中医证侯差异甲基化位点相关基因融合分析 |
| 5 小结 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 中药干预DNA甲基化修饰的研究进展 综述 |
| 参考文献 |
| 附录 |
（4）慢性胃炎脾虚证相关lncRNA-miRNA-mRNA调控网络研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 文献综述 |
| 综述一 脾虚证内涵源流及现代研究进展 |
| 一、前言 |
| 二、脾虚证的中医概念形成源流 |
| 三、脾虚证的现代研究进展 |
| 四、总结与展望 |
| 五、参考文献 |
| 综述二 转录组学在中医证候研究中的应用 |
| 一、前言 |
| 二、转录组学及其检测技术概况 |
| 三、转录组学与中医证候 |
| 四、总结与展望 |
| 五、参考文献 |
| 前言 |
| 第一部分 健康人气虚体质相关差异表达LNCRNA、MIRNA和MRNA研究及CERNA网络调控的构建 |
| 一、背景与目的 |
| 二、资料与方法 |
| 三、结果 |
| 四、讨论 |
| 五、小结 |
| 第二部分 慢性胃炎脾虚证相关差异表达LNCRNA、MIRNA和MRNA研究及CERNA网络调控的构建 |
| 一、背景与目的 |
| 二、资料与方法 |
| 三、结果 |
| 四、讨论 |
| 五、小结 |
| 结语和展望 |
| 一、脾虚证的潜在生物学机制 |
| 二、本研究的局限性 |
| 三、对中医学现代化研究的思考与展望 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 附录 |
| 在学期间主要研究成果 |
（5）基于转录组的慢乙肝和非酒精性脂肪肝“异病同证”生物物质基础研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| ABSTRACT |
| 缩略词表 |
| 引言 |
| 第一部分 高通量表达谱数据的随机方差模型 |
| 1 随机方差模型(RVM)构建 |
| 2 算法实现 |
| 2.1 数据来源 |
| 2.2 实验平台 |
| 2.3 R语言编程 |
| 3 实验结果 |
| 4 讨论 |
| 第二部分 基于转录组的慢乙肝及非酒精性脂肪肝生物物质基础 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 研究对象 |
| 1.2 中西医诊断标准 |
| 1.3 纳入标准 |
| 1.4 病例排除标准 |
| 1.5 全血样本采集 |
| 1.6 实验试剂与仪器 |
| 1.7 总RNA提取 |
| 1.8 芯片检测与数据分析 |
| 2 研究结果 |
| 2.1 CHB肝胆湿热证与健康对照组间的比较 |
| 2.2 NAFLD肝胆湿热证与健康对照组间的比较 |
| 2.3 基因本体(Gene ontology,GO)富集分析 |
| 2.4 KEGG通路富集分析 |
| 2.5 疾病类别富集分析 |
| 2.6 功能类别富集分析 |
| 3 讨论 |
| 4 小结 |
| 第三部分 慢乙肝及非酒精性脂肪肝“异病同证”的特征生物物质 |
| 1 材料与方法 |
| 1.1 Cytoscape软件 |
| 1.2 CHB及NAFLD共表达基因调控网络的构建 |
| 1.3 CHB及NAFLD“异病同证”特征生物物质筛选 |
| 1.4 CHB及NAFLD核心特征物质的分子生物学验证 |
| 1.5 数据分析 |
| 1.6 CHB与NAFLD“异病同证”的证候特征 |
| 2 研究结果 |
| 2.1 CHB和NAFLD共表达基因调控网络的构建 |
| 2.2 CHB和NAFLD“异病同证”特征生物物质的筛选 |
| 2.3 CHB肝胆湿热证中特征生物物质的验证 |
| 2.4 NAFLD肝胆湿热证特征生物物质的验证 |
| 2.5 CHB及NAFLD肝胆湿热证中特征生物物质比较 |
| 2.6 CHB及NAFLD“异病同证”的证候特征 |
| 3 讨论 |
| 3.1 CHB及NAFLD肝胆湿热证核心共表达基因筛选 |
| 3.2 CHB及NAFLD肝胆湿热证核心共表达基因的分子验证 |
| 3.3 CHB及NAFLD肝胆湿热证核心共表达基因的功能 |
| 3.4 CHB及NAFLD“异病同证”关系机制的中医证候特征 |
| 4 小结 |
| 总结 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 文献综述(一)基于网络生物学对慢性乙型肝炎的中医证型的方法探讨 |
| 参考文献 |
| 文献综述(二)中药调控 DNA 甲基化修饰的研究进展 |
| 参考文献 |
（6）慢性乙型肝炎肝胆湿热与无证可辨型差异表达蛋白研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词对照表 |
| 引言 |
| 第一部分 文献研究 |
| 1 慢性乙型肝炎免疫调节治疗研究概况 |
| 2 肝胆湿热证的研究概况 |
| 2.1 肝胆湿热证的历史沿革 |
| 2.2 肝胆湿热证的生物学基础研究概况 |
| 2.2.1 肝胆湿热证与实验室指标相关性研究概况 |
| 2.2.2 肝胆湿热证的组学研究概况 |
| 2.2.3 肝胆湿热证相关信号通路研究概况 |
| 3 慢性乙型肝炎无证可辨型的研究概况 |
| 3.1 慢性乙型肝炎无证可辨型中医研究概况 |
| 3.1.1 慢性乙型肝炎无证可辨型的研究意义 |
| 3.1.2 慢性乙型肝炎无证可辨型的内涵及诊治 |
| 3.1.3 慢性乙型肝炎无证可辨型与伏邪理论 |
| 3.2 慢性乙型肝炎无证可辨型的现代研究概况 |
| 第二部分 慢性乙型肝炎肝胆湿热型与无证可辨型差异表达蛋白研究 |
| 1 研究目的 |
| 2 研究对象 |
| 2.1 研究对象来源 |
| 2.2 诊断标准 |
| 2.2.1 西医诊断标准 |
| 2.2.2 中医诊断标准 |
| 2.3 纳入标准 |
| 2.4 排除标准 |
| 3 研究方法 |
| 4 实验材料 |
| 4.1 实验所用仪器与试剂 |
| 4.1.1 实验主要仪器 |
| 4.1.2 实验主要试剂 |
| 5 实验方法 |
| 5.1 样品的采集及血清的制备 |
| 5.2 样本的运输 |
| 5.3 检测方法 |
| 5.3.1 ELISA检测原理 |
| 5.3.2 ELISA操作步骤 |
| 5.4 统计学分析 |
| 6 实验结果 |
| 6.1 一般资料 |
| 6.1.1 性别构成 |
| 6.1.2 年龄构成 |
| 6.1.3 肝功能和病毒学指标 |
| 6.2 目标蛋白质的分析结果 |
| 6.2.1 ELISA检测目标蛋白质结果分析 |
| 6.2.2 差异蛋白质的功能富集和信号通路富集分析 |
| 6.2.3 ROC曲线分析 |
| 7 讨论 |
| 7.1 慢性乙型肝炎肝胆湿热型、无证可辨型与健康对照差异表达蛋白讨论 |
| 7.2 慢性乙型肝炎肝胆湿热型与无证可辨型差异表达蛋白讨论 |
| 结论 |
| 问题与展望 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 综述 中医证候的蛋白质组学研究进展 |
| 参考文献 |
| 附录1: 在读期间公开发表的学术论文、专着及科研成果 |
（7）当代中医病机创新理论研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 引言 |
| 1 研究背景 |
| 2 研究对象 |
| 3 研究范畴 |
| 4 研究方法 |
| 4.1 文献学方法 |
| 4.2 逻辑学方法 |
| 4.3 科学哲学方法 |
| 5 研究路径 |
| 第一部分 中医病机概念创新研究 |
| 1 病机的内涵 |
| 2 病机的外延 |
| 2.1 依据构成内容分要素 |
| 2.2 依据等级关系分层次 |
| 2.3 依据复杂程度分类 |
| 3 病机与证关系研究 |
| 3.1 证是疾病外候 |
| 3.2 证是证候阶段本质 |
| 3.3 其他认识 |
| 4 小结 |
| 第二部分 中医病机创新理论研究 |
| 1 毒邪病机 |
| 1.1 毒邪的内涵 |
| 1.2 毒邪的外延 |
| 1.3 致病特点 |
| 1.4 创新应用 |
| 2 络病病机 |
| 2.1 络脉的含义 |
| 2.2 络脉的生理 |
| 2.3 病机含义 |
| 2.4 创新应用 |
| 3 毒损络脉病机 |
| 3.1 病机含义 |
| 3.2 创新应用 |
| 4 伏邪病机 |
| 4.1 伏邪概念 |
| 4.2 形成机制 |
| 4.3 致病特性 |
| 4.4 创新应用 |
| 5 玄府病机 |
| 5.1 玄府的含义 |
| 5.2 玄府的生理 |
| 5.3 玄府的病理 |
| 5.4 生物学基础 |
| 5.5 玄府与络脉 |
| 5.6 创新应用 |
| 6 情志病机 |
| 6.1 情志病因的概念 |
| 6.2 情志病因的形成 |
| 6.3 致病特性 |
| 6.4 致病机理 |
| 6.5 创新应用 |
| 7 上火病机 |
| 7.1 上火的含义 |
| 7.2 病机形成 |
| 7.3 致病机理 |
| 7.4 临床表征 |
| 7.5 生物学基础 |
| 7.6 创新应用 |
| 8 复合病机 |
| 8.1 瘀热病机 |
| 8.2 瘀毒病机 |
| 8.3 痰瘀互结 |
| 8.4 毒热病机 |
| 9 其他病机 |
| 9.1 脏腑风湿 |
| 9.2 瘀血生风 |
| 9.3 虚气留滞 |
| 9.4 气虚浊留 |
| 9.5 奇经病机 |
| 9.6 体质与病机 |
| 10 小结 |
| 第三部分 中医病机理论体系创新研究 |
| 1 中医病机理论体系的形成研究 |
| 1.1 教材病机体系 |
| 1.2 专着病机体系 |
| 2 中医病机理论体系的现状研究 |
| 2.1 中医病机理论具体内容的确定 |
| 2.2 中医病机理论体系的逻辑问题 |
| 3 中医病机理论体系的创新构建 |
| 4 小结 |
| 第四部分 中医病机理论创新规律研究 |
| 1 中医病机理论创新的影响因素 |
| 1.1 中医哲学思维方法的影响 |
| 1.2 现代疾病谱变化的要求 |
| 1.3 现代科学技术发展的促进 |
| 1.4 其他因素的综合作用 |
| 2 中医病机理论创新的形成模式 |
| 2.1 临床实践的总结概括模式 |
| 2.2 经典理论的挖掘诠释模式 |
| 2.3 病机假说的检验验证模式 |
| 3 中医病机理论创新的整体要求 |
| 3.1 始终以中医理论为指导 |
| 3.2 始终以多学科、多方法、多层次研究为手段 |
| 3.3 始终以服务临床、提高疗效为目的 |
| 4 小结 |
| 结论 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 文献综述 中医病机理论的创新研究进展 |
| 参考文献 |
| 附录 |
| 公开发表的学术论文 |
（8）基于“异病同证”理论对慢性乙型肝炎与慢性胃炎脾胃湿热证相关特异性microRNA的验证研究（论文提纲范文）
| 摘要 ABSTRACT 英文缩略词对照表 引言 第一部分 文献研究 |
| 1.慢性乙型病毒性肝炎研究概况 |
| 1.1 慢性乙型肝炎的发病机制 |
| 1.2 慢性乙型肝炎的西医治疗进展 |
| 1.3 中医学对慢性乙型肝炎的病名认识 |
| 1.4 慢性乙型肝炎中医病因分析 |
| 1.5 慢性乙型肝炎的中医药治疗研究 |
| 2.慢性胃炎现代研究概况 |
| 2.1 慢性胃炎的病因与发病机制 |
| 2.2 慢性胃炎的西医治疗进展 |
| 2.3 中医对慢性胃炎的病名认识 |
| 2.4 慢性胃炎中医病因分析 |
| 2.5 中医对慢性胃炎治疗的现代研究 |
| 3.慢性乙型肝炎和慢性胃炎脾胃湿热证“异病同证”的共同生物学基础设想及研究现状 |
| 3.1 “异病同证”的共性机制及研究现状 |
| 3.2 脾胃湿热证的共同生物学基础及研究现状 |
| 4.microRNA的现代研究进展 第二部分 实验研究 |
| 1.研究目的 |
| 2.研究对象 |
| 2.1 病例来源 |
| 2.2 诊断标准 |
| 2.3 慢性乙型肝炎脾胃湿热证入组标准 |
| 2.4 慢性胃炎脾胃湿热证入组标准 |
| 3.研究方法 |
| 4.实验材料 |
| 4.1 实验所用仪器设备、耗材 |
| 5.实验步骤 |
| 5.1 样品的采集及血浆的制备和运输 |
| 5.2 血浆miRNA分离提取 |
| 5.3 RNA质量检测 |
| 5.4 microRNA引物的合成 |
| 5.5 microRNA荧光实时定量(qRT-PCR) |
| 6.实验数据统计学处理方法 |
| 7.实验结果 |
| 7.1 一般资料 |
| 7.2 特征性基因的分析结果 第三部分 讨论 |
| 1.慢乙肝、慢性胃炎脾胃湿热证的证候讨论 |
| 2.脾胃湿热证潜在特异性miRNA讨论 |
| 2.1 hsa-miR-483-3p与脾胃湿热证相关性讨论 |
| 2.2 hsa-miR-483-3p相关调控机制讨论 |
| 3.慢性乙型肝炎脾胃湿热证潜在特异性miRNA讨论 结论 问题与展望 致谢 参考文献 综述 浅谈“异病同证” |
| 参考文献 附录 |
| 附录1 在读期间公开发表的学术论文、专着及科研成果 |
（9）肝郁脾虚型慢性乙型肝炎患者中医辨证施护的理论研究（论文提纲范文）
| 1肝郁脾虚型慢乙肝的证候学研究 |
| 1.1肝郁脾虚为慢乙肝的基本证候 |
| 1.2肝郁脾虚型慢乙肝的临床症状 |
| 2肝郁脾虚型慢乙肝中医护理干预的方法 |
| 2.1起居有度,调畅情志 |
| 2.2饮食有节,健脾益气 |
| 2.3疗法有择,疏肝实脾 |
| 2.4服药有方,理气畅中 |
| 3小结 |
四、慢性乙型肝炎分子证候辨证的研究思路与方法简析（论文参考文献）
- [1]慢性乙型肝炎中医证型与抗-HBc定量水平的相关性研究[D]. 林芳芳. 福建中医药大学, 2021(09)
- [2]疏肝健脾活血法治疗乙肝肝纤维化的临床回顾性研究及其作用机制的网络药理学探索[D]. 施梅姐. 广州中医药大学, 2020(09)
- [3]基于DNA甲基化对慢性乙型肝炎脾胃湿热证与肝郁脾虚证的研究[D]. 马丽. 成都中医药大学, 2020(01)
- [4]慢性胃炎脾虚证相关lncRNA-miRNA-mRNA调控网络研究[D]. 桑小普. 北京中医药大学, 2020(04)
- [5]基于转录组的慢乙肝和非酒精性脂肪肝“异病同证”生物物质基础研究[D]. 汤琛琛. 上海中医药大学, 2019(03)
- [6]慢性乙型肝炎肝胆湿热与无证可辨型差异表达蛋白研究[D]. 席婷. 成都中医药大学, 2019(04)
- [7]当代中医病机创新理论研究[D]. 张惜燕. 成都中医药大学, 2019(04)
- [8]基于“异病同证”理论对慢性乙型肝炎与慢性胃炎脾胃湿热证相关特异性microRNA的验证研究[D]. 秦冰. 成都中医药大学, 2018(01)
- [9]肝郁脾虚型慢性乙型肝炎患者中医辨证施护的理论研究[J]. 王云翠,李圣洁,熊振芳,胡慧,贺惠娟,冯琳,徐倩. 时珍国医国药, 2016(05)
- [10]我国16个重点病种的国家中医临床研究基地论文统计表（2008年～2013年）[J]. 国家中医药管理局国家中医临床研究基地办公室. 世界科学技术-中医药现代化, 2013(05)