一、大鼠心脏移植后外周血T淋巴细胞rDNA转录活性变化及其意义（论文文献综述）
李会敏[1]（2021）在《髓系抑制细胞通过增强Th17反应促进原发性膜性肾病的疾病进展》文中研究说明研究背景和目的:原发性膜性肾病（primary membranous nephropathy,PMN）是一种 Th2 免疫反应导致的以肾小球病变为主要病理改变的自身免疫性疾病,是引起成人肾病综合征的常见病因。大多数PMN病例（约85%）是由磷脂酶A2受体（phospholipase A2 receptor,PLA2R）抗体介导的,而其余的与包含7A的血栓蛋白1型结构域（thrombospondin type-1 domain-containing 7A,THSD7A）或不明机制相关。Th17细胞通过介导基本炎症级联作用在肾脏自身免疫中发挥关键作用,能促进自身抗体的形成,这是大多数肾脏自身免疫性疾病的关键,增强组织炎症,并对肾实质细胞有直接影响,然而Th17细胞是否参与PMN的发生发展目前尚不清楚。髓系抑制细胞（myeloid-derived suppressor cells,MDSC）是一群免疫抑制细胞,研究发现狼疮肾炎患者中MDSC可促进Th17分化和疾病进展,但在PMN中MDSC的变化及与Th2和Th17细胞的相互作用至今尚无研究。本研究旨在揭示PMN中MDSC与Th2和Th17免疫反应的关系,为PMN的诊断和治疗提供新的思路。研究方法:（1）PMN患者肾脏组织石蜡和冰冻切片染色,光镜下观察肾组织病理改变;IF检测肾小球基底膜免疫复合物沉积情况;多色免疫组化（multiplex immunohistochemistry,IHC）检测IL-4、CD3和CD11b抗体在肾组织定位和表达强度;应用酶联免疫吸附测定法（enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）检测PMN患者和HC血浆中抗PLA2R抗体的含量及对疾病诊断的灵敏度和特异性。（2）应用FCM和ELISA方法分别检测了 HC和PMN患者中CD4+IL-4+（Th2）和 CD4+IFN-γ+（Th1）细胞比例及相关细胞因子 IL-4、IL-6、IL-10、IL-13和IFN-γ的水平,并分析Th2细胞比例与疾病活动度的相关性及Th1/Th2比例变化;同时检测了 HC和PMN患者中调节性T细胞（regulatory T cells,Treg）的比例变化。（3）采用流式细胞术（flow cytometry,FCM）测定健康对照组（healthy control,HC）和PMN患者外周血中MDSC及其亚群的比例与数目;并分析了 PMN患者的MDSC 比例和数量与疾病活动度和外周血Th2细胞比例的相关性。（4）磁珠分选HC和PMN患者的初始CD4+T细胞,加入CFSE标记;同时流式分选纯化各自相应的MDSC细胞,将MDSC和初始CD4+T应用CD3和CD28抗体共刺激培养3天,流式检测比较HC和PMN患者的MDSC的抑制功能。（5）磁珠分选HC和PMN患者的初始CD4+T细胞,体外建立诱导分化为Th2细胞的极化体系,分别加入MDSC和（或）Arg-1和iNOS抑制剂及IL-6和IL-10因子,通过FCM方法比较CD4+IL-4+（Th2）细胞的变化。（6）免疫荧光染色法（immunofluorescence,IF）检测PMN患者肾组织中IL-17+细胞和CD11b+细胞的共定位;FCM和ELISA分别检测HC和PMN患者中Th17细胞比例及相关细胞因子IL-17A水平,并分别分析了两者与疾病活动度的相关性;（7）磁珠分选HC和PMN患者的初始CD4+T细胞,体外建立诱导分化为Th17细胞的极化体系,加入MDSC和（或）Arg-1抑制剂,通过FCM和ELISA方法比较CD4+IL-17A+（Th17）细胞和培养上清中IL-17A的变化;（8）ELISA检测HC和PMN患者血浆中Arg-1的含量变化,分析PMN患者中Arg-1含量与疾病活动度和MDSC数量的相关性;流式分选PMN患者的MDSC并加入IL-6或IL-10因子共同培养,利用实时荧光定量核酸扩增技术（real-time Quantitative PCR,qRT-PCR）检测 IL-6 和 IL-10 对 MDSC 中 Arg-1 mRNA表达的影响。（9）应用重组人Ⅳ型胶原蛋白α3链的非胶原（NC）结构域（Non-collagenous（NC）domains of the α3 chain of recombinant human type Ⅳ collagen,rh-α3（IV）NC1）蛋白免疫DBA/1小鼠,构建PMN小鼠模型,并给予吉西他滨（gemcitabine,GEM）去除MDSC,检测小鼠外周血、脾脏和淋巴结中MDSC、Th2、Th17、Th1和Treg细胞的变化;ELISA法检测小鼠尿白蛋白、尿肌酐及血清尿素氮的水平;qRT-PCR检测小鼠脾脏、淋巴结和肾脏组织Th2和Th17相应细胞因子IL-13和IL-17A及相关转录因子GATA3、RORγt和RORα的mRNA表达情况;IF染色检测肾组织内IgG沉积;光镜下观察模型小鼠肾脏病理改变;电镜下观察模型小鼠肾脏的超微结构变化。研究结果:（1）PMN患者外周血Th2细胞及相关因子增加并与疾病活动度正相关;（2）PMN患者外周血中MDSC及其亚群数量显着增加,抑制功能增强,但与疾病活动度正相关;（3）体外实验证实MDSC抑制Th2细胞分化,IL-6和IL-10增强MDSC抑制能力。（4）PMN患者外周血Th17细胞及其相关因子增加并与疾病活动度正相关;（5）PMN患者外周血中MDSC、Arg-1、IL-17三者存在相关性;（6）体外实验证实人MDSC通过产生Arg-1促进Th17细胞分化,并且PMN来源的MDSC有更强的促Th17分化作用且可被Arg-1抑制剂（nor-NOHA）终止;（7）PMN患者血浆中Arg-1含量增加,IL-6和IL-10可以促进MDSC分泌 Arg-1。（8）应用rh-α3NC1成功构建小鼠PMN模型;PMN小鼠外周血中MDSC、Th17和Th2细胞比例随着免疫时间延长增加;而Th1和Treg细胞比例随着免疫时间延长呈下降趋势;（9）去除MDSC减轻PMN模型小鼠的肾组织损伤;（10）去除MDSC降低Th17和Th2细胞比例及相关转录因子的表达;但增加Th1和Treg细胞比例。结论:MDSC在PMN中显着增加,MDSC可能主要通过增强Th17反应促进PMN疾病进展。Th17的分化依赖于MDSC分泌的Arg-1。PMN小鼠模型证实去除MDSC可能主要通过减弱Th17免疫反应减轻小鼠肾脏损伤。
丁黎莉[2]（2021）在《白介素-37通过髓源性抑制细胞影响急性胰腺炎炎症反应的机制研究》文中进行了进一步梳理研究背景与目的:急性胰腺炎（acute pancreatitis,AP）是胰酶在体内异常激活所导致的局部或全身性炎症反应。促炎免疫与抗炎免疫系统失衡是促进疾病进展的重要机制。髓源性抑制细胞（myeloid-derived suppressor cell,MDSC）是骨髓来源的调节性免疫细胞,可通过精氨酸酶（Arginase）-1、活性氧（reactive oxygen species,ROS）、免疫抑制性受体（immune receptors,IRs）等机制发挥免疫抑制作用。含免疫球蛋白和ITIM基序的T细胞免疫受体（T cell immunoreceptor with Lg and ITIM domains,TIGIT）作为一种新型的IRs,对T细胞、B细胞、自然杀伤细胞（natural killer cell,NK）的功能产生一定影响。但是TIGIT在AP中T细胞上表达的变化及其作用目前尚无报道。白介素（interleukin,IL）-37是新发现的抗炎因子,可通过诱导调节性免疫细胞表型转化等方式发挥抗炎作用。我们在预实验中发现AP患者血浆中IL-37升高。本研究通过分析AP患者体内MDSC、IL-37的变化,结合体外实验进一步阐释IL-37通过影响MDSC的抑制功能,影响AP的发生发展的作用及其机制,为AP的治疗提供新的思路。研究方法:（1）应用流式细胞分析法（flow cytometry,FCM）测定患者及健康对照组（healthy control,HC）中HLADR-CD11b+MDSC及其亚群CD66b+CD14-粒细胞样及CD66b-CD14+单核细胞样MDSC比例与数目,并分析与APACHE II评分、C-反应蛋白、住院天数（length of stay,LOS）的相关性。应用羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺酯（CFSE）染色测定T细胞增殖法分析HC来源与重症急性胰腺炎（severe acute pancreatitis,SAP）来源的MDSC的抑制功能。应用FCM进一步分析及来源的Arg-1、活性氧（Reactive oxygen species,ROS）及MDSC表面CD155的平均荧光强度（mean fluorescence intensity,MFI）表达有无差异。（2）应用FCM测定HC及AP患者外周血中CD3+T细胞及其亚群CD4+、CD8+T细胞比例、数量。测定HC与来AP来源的CD3+T细胞及其亚群CD4+、CD8+T细胞中的IFN-γ的比例及细胞表面TIGIT的差异。分析CD3+T细胞及其亚群细胞表面TIGIT表达与IFN-γ的表达、细胞增殖能力之间的关系。（3）应用酶联免疫吸附试验（enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）测定HC、AP患者血浆IL-37浓度,并检测其与APACHE II评分、MDSC之间的相关性。体外分析IL-37处理组与未处理组的MDSC的比例、Arg-1、ROS及MDSC表面CD155的表达变化。将IL-37处理的与未处理的MDSC细胞分别与T细胞共培养,检测各孔细胞增殖率。将HC及SAP来源的MDSC与TIGIT+及TIGIT-细胞分别共培养,检测各组细胞的增殖率变化,揭示抑制细胞可能机制。研究结果:（1）AP患者外周血中MDSC细胞及其亚群G-MDSC、M-MDSC在外周血单个核细胞（Peripheral blood mononuclear cell,PBMC）中比例及绝对计数增加,且与APACHE II评分、C-反应蛋白正相关。SAP患者来源的MDSC对CD3+T细胞抑制作用增强。SAP来源的MDSC较HC组的Arg-1、ROS、CD155表达升高。（2）AP患者外周血中CD3+T细胞及其CD4+、CD8+亚群在PBMC中比例及数量减少,且各T细胞亚群IFN-γ分泌减少。AP患者外周血T细胞表面TIGIT表达比例较HC组降低。TIGIT+T细胞较TIGIT-T细胞IFN-γ分泌增多,细胞增殖能力增强。（3）AP患者血浆中IL-37浓度较HC升高,与MDSC呈负性相关。IL-37在体外不能诱导PBMC中细胞向MDSC转化,但是可以增强MDSC对T细胞的抑制作用。IL-37在体外降低MDSC的ROS、CD155的表达,对Arg-1表达强度无影响。阻断ROS降低MDSC表面CD155的表达。MDSC对TIGIT+T细胞具有抑制功能,而对TIGIT-T细胞无抑制功能。研究结论:本研究发现MDSC在AP患者体内增多,且MDSC抑制功能增强,且与疾病严重程度正相关,MDSC对T细胞的抑制作用可能是通过CD155/TIGIT途径实现的。AP患者外周血中IL-37因子升高,IL-37增强MDSC对T细胞的抑制作用,其增强作用机制尚不明确。本研究为探究AP的发病机制提供了新的思路,为阻止AP进展为SAP提供了新的理论依据。
高瑞娟[3]（2021）在《蒙药“巴布-7”对大肠杆菌性腹泻小鼠肠黏膜屏障保护机制的相关研究》文中研究说明大肠杆菌性腹泻是致死率较高的一种传染病,造成严重畜牧业经济损失。蒙药巴布-7（Babu seven compound,BBS）对腹泻有较强的临床疗效。但BBS对大肠杆菌性腹泻肠道屏障功能的研究较少。为研究BBS对大肠杆菌性腹泻肠道屏障功能的影响。本研究开展如下实验:实验1:为建立大肠杆菌性腹泻模型,将90只小鼠分为空白对照组（VG,口腔灌服生理盐水,n=10）,模型Ⅰ组（MGⅠ,腹腔注射1.0×109CFU/m L E.coli O1,n=20）,模型Ⅱ组,（MGⅡ,口腔灌服1.0×109CFU/m L E.coli O1,n=20）,模型Ⅲ组,（MGⅢ,单次口腔灌服2%Na HCO3和1.0×109CFU/m L E.coli O1,n=20）,模型Ⅳ组,（MGⅣ连续1次/3 d口腔灌服2%Na HCO3和1.0×109CFU/m L E.coli O1,n=20）,攻毒后连续观察7 d,观察小鼠腹泻率、死亡率、DAI评分、肠道病变并检测炎性因子。结果表明,MGⅠ小鼠出现腹泻症状,死亡率达75%。MGⅡ小鼠未见异常;MGⅢ小鼠腹泻率达60%,死亡率达15%,腹泻症状于攻毒24 h后自愈。MGⅣ小鼠腹泻率达65%,死亡率达15%,存活小鼠腹泻、精神萎靡、厌食等症状可以持续72 h以上,且肠道病理变化和炎性因子均显着高于正常对照组。结果显示,连续3 d（1次/d）灌服2%碳酸氢钠溶液和1.0×109CFU/m L的致病性E.coli O1可以成功建立小鼠腹泻模型。实验2:为研究蒙药BB对大肠杆菌性腹泻小鼠肠黏膜生物屏障的影响。采用16S rDNA测序技术对小鼠盲肠微生物进行测序。通过α多样性和β多样性来综合分析BBS对大肠杆菌性腹泻小鼠肠黏膜屏障的影响。结果显示,E.coli O1入侵会降低Chao1、Ace、Shannon指数（P<0.05）,升高Simpson指数（P<0.05）,而BBS和EM治疗会升高Chao1、Ace、Shannon指数,降低Simpson指数（P<0.05）。E.coli O1的入侵会降低肠道菌群的多样性和丰富度及拟杆菌门、拟杆菌目、拟杆菌属、疣微菌门、疣微菌目、乳杆菌目、乳杆菌属的相对丰度（P<0.05）;升高拟杆菌门、厚壁菌门、变形菌门、梭菌属、梭菌目、肠杆菌目、肠球菌属的相对丰度（P<0.05）。而BBS-H和Em-H治疗可以可以恢复菌群结构并增加有益菌丰度,降低有害菌丰度。说明,蒙药BBS-H和Em-H可以修复致病性E.coli O1造成的肠生物屏障损伤。实验3:为研究BBS对大肠杆菌性腹泻小鼠肠黏膜机械屏障影响。将125只小鼠分为9组,分别为正常对照组（VG,n=10）、模型组（MG,n=10）、阳性对照组（CG,n=15）、蒙药巴布-7高、中、低剂量组（BBS-H,BBS-M,BBS-L,n=15）、大黄素高、中、低剂量组（Em-H,Em-M,Em-L,n=15）。灌胃治疗7 d,于第8 d杀死小鼠,采集样本。光镜观察小鼠肠道病理损伤并计算绒腺比（Villus height/Crypt depth,V/C）;透射电镜观察小鼠肠道超微结构;RT-PCR、免疫组化、Western blot检测Claudin-1、Occludin、ZO-1、MLCK、JAMA的基因及蛋白表达量;ELISA法检测小鼠血清中DAO、D-LA、ET含量。结果显示:MG各肠段肠绒毛断裂,炎性细胞浸润、V/C比值降低（P<0.05）,紧密连接相关蛋白Claudin-1、Occludin、ZO-1、MLCK、JAMA表达下降（P<0.05）,血清中DAO、D-LA、ET含量显着升高（P<0.05）。而蒙药BBS-H组和Em-H组可以缓解肠道损伤（P<0.05）,提高V/C值及紧密连接相关蛋白表达量（P<0.05）,降低血清中DAO、D-LA、ET含量。表明,蒙药BBS-H和Em-H可以通过提高紧密连接相关蛋白的表达来降低肠黏膜通透性,从而来修复致病性E.coli O1造成的肠道机械屏障损伤（P<0.05）。实验4:为研究BBS对大肠杆菌性腹泻小鼠肠黏膜免疫屏障影响。流式细胞术检测CD3+T、CD4+T、CD8+T、CD19+B细胞和TH1、TH2细胞百分含量并计算CD4+/CD8+比值;ELISA法检测小鼠十二指肠中免疫相关细胞因子IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α、IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ、TGF-β、IL-17、IL-23、SIg A含量,血清中免疫球蛋白Ig M、Ig G、lg A含量。结果显示,MG中CD3+T、CD4+T、CD19+B的百分比及CD4+/CD8+比值显着降低（P<0.05）,IL-1β、IL-6、IL-8、NO、TNF-α、IL-17、IL-23显着升高（P<0.05）,IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ、TGF-β、SIg A、Ig M、Ig G、lg A显着降低（P<0.05）。蒙药BBS-H和Em-H治疗可提高CD3+T、CD4+T、CD19+B的百分比及CD4+/CD8+的比值（P<0.05）,降低IL-1β、IL-6、IL-8、NO、TNF-α、IL-17、IL-23含量（P<0.05）,提高IL-2、IL-4、IL-10、IFN-γ、TGF-β、SIg A、Ig M、Ig G、lg A含量（P<0.05）。表明,蒙药BBS-H和Em-H可以修复大肠杆菌造成的免疫屏障损伤。实验5:为研究BBS对大肠杆菌性腹泻小鼠肠黏膜化学屏障影响。PAS染色观察肠上皮杯状细胞;免疫荧光法检测小鼠十二指肠中MUC-2含量;ELISA法检测小鼠十二指肠中肠三叶因子、溶菌酶、二糖酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶活力。结果显示,致病性E.coli O1降低杯状细胞数量及MUC-2、TFF3含量,减弱溶菌酶、二糖酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶活力（P<0.05）,蒙药BBS-H和Em-H治疗可以显着提高杯状细胞数量及MUC-2、TFF3含量,提高溶菌酶、二糖酶、胃蛋白酶和胰蛋白酶活力（P<0.05）。表明,蒙药BBS-H和Em-H可以修复致病性E.coli O1造成的肠化学屏障损伤。
曾勤[4]（2021）在《基于CD4+T淋巴细胞探究健脾祛湿和络方治疗特发性膜性肾病的作用机制》文中研究表明目的:观察健脾祛湿和络方对特发性膜性肾病（IMN）脾肾气虚兼湿热证患者外周血CD4+T淋巴细胞亚群比例及IgG4、IL-4和IL-17的水平是否有影响,从而探究健脾祛湿和络方治疗IMN的作用机制。方法:采用病例对照研究和自身前后对照研究的方法。在中国中医科学院西苑医院肾病科门诊及住院部纳入符合纳入及排除标准的IMN脾肾气虚兼湿热证患者及具有可比性的健康受试者。IMN患者在常规基础性治疗基础上,给予健脾祛湿和络颗粒治疗24周,比较治疗前和治疗8周、16周、24周后临床指标的差异。采集健康受试者、IMN患者治疗前和治疗24周后的外周静脉血,提取外周血单个核细胞,运用免疫表型方法表征、流式细胞术检测Th1/Th2/Th17/Treg细胞亚群比例,运用酶联免疫吸附法检测外周血IgG4、IL-4和IL-17水平,比较IMN患者治疗前后与健康受试者Th1/Th2/Th17/Treg细胞亚群、IgG4、IL-4和IL-17的差异。结果:（1）共纳入符合标准的IMN患者26例及健康受试者10例;IMN患者治疗前24小时尿蛋白定量为2.50±1.18 g,治疗16周、24周后分别为2.06±1.43g、1.46±1.32 g,治疗后较治疗前显着降低（P<0.05）;随着治疗时间的延长,总缓解率呈持续升高趋势,治疗24周后9例IMN患者部分缓解,6例IMN患者完全缓解,总缓解率为57.7%;随访期间IMN患者肝功能和血常规均在正常水平范围内,肾功能较治疗前无明显变化（P>0.05）,安全性良好。（2）与健康组比较,IMN中高危组Th1、Th17、Th1/Th2和Th1/Treg显着升高,低危组Th1、Th1/Th2、Th1/Treg和Th17/Treg显着升高,两组Th2和Treg均显着降低,两组IgG4、IL-4和IL-17水平也显着升高（P<0.05）;初始中医治疗组与难治性IMN中医治疗组相比,患者外周血CD4+T淋巴细胞亚群及IgG4、IL-4和IL-17无明显差异（P>0.05）。（3）健脾祛湿和络方治疗24周后较治疗前Th1、Th1/Th2和Th1/Treg均显着降低,Th2显着升高,IgG4和IL-17也显着降低（P<0.05）。（4）将IMN患者分为健脾祛湿和络方治疗有效组和无效组,有效组治疗后较有效组治疗前 Th1、Th1/Th2、Th1/Treg 和 Th17/Treg 显着降低,Treg 显着升高,IgG4 和 IL-17也显着降低（P<0.05）;无效组治疗前后外周血CD4+T淋巴细胞亚群和IgG4、IL-4及IL-17无明显差异（P>0.05）;有效组和无效组治疗前的CD4+T淋巴细胞亚群和IgG4、IL-4及IL-17无明显差异（P>0.05）;有效组治疗后Th17、Th1/Treg和Th17/Treg水平显着低于无效组治疗后,Treg水平显着高于无效组治疗后（P<0.05）。结论:（1）IMN患者存在外周血CD4+T淋巴细胞亚群紊乱,炎症水平升高,主要表现为Th1、Th1/Th2和Th1/Treg显着升高,Th2和Treg显着降低,IgG4、IL-4和IL-17也显着升高。但尚未发现IMN患者病情轻重与CD4+T淋巴细胞亚群、IgG4、IL-4和IL-17水平的相关性。（2）健脾祛湿和络方可有效减少IMN患者蛋白尿,提高临床缓解率。其作用机制可能与其降低IMN患者外周血Th1和Th17细胞比例,降低Th1/Th2、Th1/Treg和Th17/Treg的比值,升高Treg细胞比例,降低IL-17水平,从而发挥免疫抑制,降低外周血炎症水平,减少肾脏炎性细胞浸润,减轻肾脏损伤有关。此外,健脾祛湿和络方能降低外周血IgG4水平,但是否能减少免疫复合物的形成和沉积,尚需进一步研究证实。
关智媛[5]（2021）在《多发性骨髓瘤患者外周血ILCs和淋巴细胞亚群变化与疗效关系的研究》文中研究说明目的:通过检测多发性骨髓瘤（multiple myeloma,MM）患者治疗后外周血固有淋巴样细胞（innate lymphoid cells,ILCs）亚群及辅助性T（helper T,Th）1、Th2、Th17、Th22细胞亚群变化,研究ILCs与MM疗效间的关系,同时分析ILCs与Th细胞及其他免疫指标之间的相关性,探讨ILCs在MM中的可能免疫机制,为MM免疫治疗提供思路。方法:收集2019年1月至2021年2月期间就诊于兰州大学第二医院血液科的20例MM患者,应用流式细胞术检测15例治疗后、5例初诊MM及15例健康对照者外周血ILCs亚群ILC1、ILC2、ILC3及Th细胞亚群水平,同时观察白细胞分化抗原（cluster of differentiation,CD）3+T、CD3+CD8+T、CD3+CD4+T、自然杀伤细胞（natural killer cells,NK cells）、干扰素-γ（interferon-gamma,IFN-γ）、白细胞介素-2（interleukin-2,IL-2）、肿瘤坏死因子-α（tumor necrosis factor,TNF-α）、IL-4、IL-5、IL-1β、IL-12、IFN-α等临床免疫指标,分析ILCs与Th细胞亚群及其他免疫指标间的相关性。结果:对ILCs亚群的研究结果显示,初诊MM患者ILC1、ILC3细胞水平与健康对照组相比明显升高（P值分别为:P=0.013,P=0.008）。MM患者无论处于缓解或疾病进展期,ILC1细胞亚群水平均明显高于健康对照（P=0.000,P=0.008）,其中疾病稳定期MM患者ILC1细胞水平低于缓解期患者（P=0.034）。ILC2细胞亚群在缓解和疾病进展期MM也均明显高于健康对照（P=0.000,P=0.008）,各期之间ILC2细胞水平无差异（P>0.05）。ILC3细胞亚群在缓解期MM明显高于健康对照组（P=0.025）,其中疾病稳定期患者ILC3细胞水平低于缓解期MM（P=0.021）。相关性分析表明,在缓解期MM患者中,CD3+T、CD3+CD4+T、CD3+CD8+T细胞与ILC1呈负相关,NK细胞与ILC1呈正相关;IL-2、TNF-α、IL-4、IL-1β、IFN-α与ILC2呈负相关;IL-5与ILC3呈正相关。在疾病稳定期、进展期及初诊MM患者中,ILC1与IFN-γ呈负相关,IL-12与ILC1呈正相关。健康对照组ILC3与Th17细胞呈正相关,而在MM患者中无此相关。在所有MM患者中,ILC2、ILC3分别与ILC1呈正相关。结论:ILCs亚群在MM存在异常变化,在疾病缓解期ILC1、ILC2可能发挥了抑瘤作用,而在疾病进展期ILC1、ILC2可能参与了肿瘤免疫逃逸。ILC3在MM中也存在异常改变,其作用需要进一步研究。相关性分析结果显示,ILCs亚群之间、ILCs与NK细胞等其他免疫指标之间均存在正、负反馈和调节作用,提示ILCs等免疫微环境紊乱可能是MM发生发展的重要机制之一,有必要对其进一步深入研究。
李琰珉[6]（2020）在《褪黑素调控PI3K/AKT/mTOR自噬通路治疗早发性卵巢功能不全的机制研究》文中研究指明第一部分褪黑素在早发性卵巢功能不全治疗中的临床疗效及机制研究目的:探讨褪黑素（melatonin,MT）对早发性卵巢功能不全患者的临床疗效及其作用机制。方法:（1）本研究所有入选患者均为2014年6月至2016年8月于4个三甲医疗机构妇产科诊断为卵巢功能不全者,共322例。依照随机对照原则,入选患者被分为2组,分别为观察组和对照组。其中,观察组患者接受褪黑素片（1mg/天）治疗,对照组患者给予安慰剂进行治疗。（2）分别在治疗前、治疗后的1、3、6月采集患者血清,检测FSH和E2水平疗开始前的FSH和E2采血时间为患者月经2-4天;治疗开始后1月、3月、6月复查FSH和E2时,要求先行B超检查,内膜<5mm,双侧卵巢无≥10mm的卵泡方可采血。若复查时不符合以上条件,视为患者未处于性激素基础状态,无法采集治疗后FSH和E2数据,则剔除该患者的所有FSH和E2数据。治疗前1天、治疗后1月、3月、6月,对两组患者T淋巴细胞、ROS水平、VEGF水平以及血清IL-1、IL-8、INH-B、AMH进行检测;治疗前1天、治疗6个月后收集患者的晨尿,测定尿8-OHdG及8-isoPGF2α水平;在6个月的治疗期内,对两组患者的排卵情况进行监测。除FSH和E2外,其他项目检测不受月经周期的影响。对相应的结果进行统计学分析。结果:观察组和对照组女性的年龄、BMI、月经周期均无显着差异（P>0.05）,表明两组患者具有可比性。经治疗后:（1）观察组患者的FSH水平较对照组明显降低（P<0.05）,雌激素水平逐渐增高（P<0.05）,且呈时间依赖性;（2）治疗前后患者的月经周期未有显着差异（P>0.05）;（3）观察组患者的ROS、VEGF、IL-1、IL-8水平明显低于对照组（P<0.05）,且呈时间依赖性;观察组患者的血清INH-B、AMH水平显着高于对照组（P<0.05）,呈时间依赖性;（4）观察组患者的G1/M期淋巴细胞百分比明显低于对照组,呈时间依赖性（P<0.05）;（5）治疗6个月后,观察组患者尿8-OHdG及8-isoPGF2α水平较对照组显着降低（P<0.05）;（6）治疗期间,观察组出现排卵的患者数量明显多于对照组（P<0.05）;（7）观察组患者血清褪黑素水平与ROS水平呈负相关（rs=-0.427,P<0.05）。结论:褪黑素对于早发性卵巢功能不全具有较好的治疗效果,该作用可能是经由抑制ROS、VEGF的生成,保护卵泡正常发育实现的。第二部分基于PI3K/AKT/mTOR自噬通路探讨褪黑素治疗早发性卵巢功能不全的机制研究目的:以PI3K/Akt/mTOR通路为切入点,通过体外细胞实验,从多层次、多角度揭示褪黑素干预POI的分子机制,为POI的临床防治提供新的依据和新的方向。方法:选取卵巢颗粒细胞COV434为研究对象,采用血清饥饿法体外诱导细胞自噬,并给予不同浓度MT进行干预,随后采用流式细胞术检测细胞凋亡,透射电镜观察细胞自噬体形成,western blot法检测LC3Ⅱ、LC3Ⅰ、Agt5的表达,检测PI3K/Akt/mTOR信号通路活化情况。结果:（1）细胞凋亡检测结果表明,与对照组相比,模型组和各MT浓度组细胞的凋亡率显着增高（P<0.05）;与模型组相比,各MT浓度组细胞的凋亡率均显着降低,差异具有统计学意义（P<0.05）,且随着MT作用浓度的增大,COV434细胞的凋亡率逐渐降低;（2）透射电镜观察结果显示,与对照组相比,模型组和各MT浓度组经血清饥饿处理后细胞的胞浆中出现了典型的自噬体结构,其中部分细胞发生了严重损伤,导致细胞死亡;与模型组相比,各MT浓度组细胞中的自噬体明显减少,且呈剂量依赖性;（3）自噬相关蛋白检测结果表明,与对照组相比,模型组和各MT浓度组COV434细胞中LC3Ⅱ/Ⅰ比显着增高、Agt5蛋白的表达水平明显上调（P<0.05）;与模型组相比,各MT浓度组细胞中LC3II/Ⅰ比、Agt5蛋白的表达水平均显着降低（P<0.05）,且呈剂量依赖性;（4）PI3K/Akt/mTOR相关蛋白检测结果显示,与对照组相比,模型组和各MT浓度组COV434细胞中p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白的表达水平明显下调（P<0.05）;与模型组相比,各MT浓度组细胞中p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白的表达水平均显着升高（P<0.05）,且呈剂量依赖性。结论:MT对POI的保护作用是通过激活PI3K/Akt/mTOR信号通路,抑制自噬相关蛋白的表达,继而抑制卵巢颗粒细胞自噬实现的。第三部分褪黑素对POI大鼠卵巢功能保护作用的实验研究目的:本部分研究拟建立POI大鼠模型,以此作为研究对象探讨MT在体内是否能够通过激活PI3K/Akt/mTOR信号通路发挥保护卵巢的作用。本研究旨在通过动物模型实验进一步验证MT保护POI的作用机制,为寻找POI治疗的新途径奠定理论和实验基础。方法:雌性SD大鼠连续给予雷公藤多甙片,建立大鼠POI模型,随后将大鼠随机分为模型组、3-MA组、RAPA组和MT组,正常雌性SD大鼠作为对照。ELISA法检测各组大鼠外周血AMH、INH-B、FSH、E2、LH、P和T的水平。HE染色观察各组大鼠卵巢组织的病理变化,计数原始卵泡、初级卵泡、窦卵泡、闭锁卵泡数量。Western blot法检测卵巢组织中p-PI3K、p-AKT和p-mTOR蛋白的表达。结果:（1）卵巢湿重和卵巢指数检测结果显示:对照组大鼠左、右卵巢湿重在所有组别中最高（P<0.05）,模型组大鼠左、右卵巢湿重最低（P<0.05）,RAPA组左、右卵巢湿重较模型组增加（P<0.05）,3-MA组、MT组大鼠的卵巢湿重较RAPA组增加（P<0.05）,3-MA组和MT组之间卵巢湿重无显着差异（P>0.05）。对照组大鼠卵巢指数在所有组别中最高（P<0.05）,模型组大鼠卵巢指数最低（P<0.05）,RAPA组大鼠卵巢指数较模型组升高（P<0.05）,3-MA组、MT组大鼠的卵巢指数较RAPA组升高（P<0.05）,3-MA组和MT组之间卵巢指数无显着差异（P>0.05）。（2）血清AMH和INH-B检测结果显示:对照组大鼠的AMH和INH-B水平在所有组别中最高,而模型组最低,RAPA组血清AMH、INH-B水平较模型组升高（P<0.05）,3-MA组、MT组血清AMH、I-NH-B水平较RAPA组升高（P<0.05）,3-MA组和MT组之间无明显差异（P>0.05）。（3）血清FSH、LH、E2、P和T水平检测结果显示:对照组大鼠的FSH和LH水平在所有组别中最低（P<0.05）,而模型组最高（P<0.05）,RAPA组血清FSH、LH水平较模型组降低（P<0.05）,3-MA组、MT组血清FSH、LH水平较RAPA组降低（P<0.05）,3-MA组和MT组之间无明显差异（P>0.05）。对照组大鼠E2水平在所有组别中最高（P<0.05）,模型组最低（P<0.05）,RAPA组大鼠血清E2水平较模型组升高（P<0.05）,MT组和3-MA组的E2水平较RAPA组升高（P<0.05）,3-MA组和MT组之间无明显差异（P>0.05）。各组的T和P水平差异无统计学意义（P>0.05）。（4）对照组大鼠的原始卵泡、初级卵泡和窦卵泡数量最多（P<0.05）,模型组大鼠的原始卵泡、初级卵泡和窦卵泡数量最少（P<0.05）,RAPA组的原始卵泡、初级卵泡和窦卵泡数量较模型组增加（P<0.05）,3-MA组和MT组的原始卵泡、初级卵泡和窦卵泡数量均较RAPA组增加（P<0.05）,3-MA组和MT组之间无显着差异（P>0.05）;模型组大鼠闭锁卵泡数量最多（P<0.05）,对照组大鼠闭锁卵泡数量最少（P<0.05）,RAPA组闭锁卵泡数量较模型组减少（P<0.05）,3-MA组和MT组闭锁卵泡数量较RAPA组减少（P<0.05）,3-MA组和MT组之间无显着差异（P>0.05）。（5）PI3K/AKT/mTOR信号通路相关蛋白检测结果显示:对照组p-PI3K、p-AKT和p-mTOR蛋白表达在所有组别中最高（P<0.05）,模型组最低（P<0.05）,RAPA组大鼠p-PI3K、p-AKT和p-mTOR蛋白表达水平较模型组升高（P<0.05）,3-MA组、MT组的p-PI3K、p-AKT和p-mTOR蛋白表达水平较RAPA组升高（P<0.05）,3-MA组和MT组大鼠蛋白表达水平无统计学差异（P>0.05）。结论:MT对POI大鼠卵巢具有保护作用,且该作用与3-MA的作用效果相似,是通过激活PI3K/AKT/mTOR信号通路、调节性激素、增加原始卵泡、初级卵泡和窦卵泡数量,减少闭锁卵泡数量实现的。
宋亚军[7]（2020）在《MMF通过抑制Th17细胞及IL-17A下调Vγ4细胞表达KGF的机制研究》文中指出背景和目的心脏、肾脏等器官移植术后,患者须长期服用免疫抑制剂类药物预防和治疗排斥反应,以延长移植物存活。吗替麦考酚酯是临床上常用于实体器官移植术后的免疫抑制剂之一,通过肠道吸收后迅速在肝细胞内代谢成其活性成分-霉酚酸。在体内,霉酚酸可以通过非竞争性地、可逆地抑制次黄嘌呤单核苷酸脱氢酶的活性,抑制鸟嘌呤核苷酸的经典合成途径,从而选择性地抑制T淋巴细胞和B淋巴细胞的活化增殖,降低机体的免疫水平,达到减轻对移植物排斥的目的,尽可能保护移植器官功能。但是,吗替麦考酚酯副作用明显,比如白细胞减少、贫血、败血症等,在胃肠道主要为恶心、呕吐、腹痛、腹泻等不良反应,即便使用肠溶剂型也难以改善。临床上多采用减少用药剂量甚至中断服药来减轻副作用。目前,吗替麦考酚酯引发胃肠反应的具体机制尚有待探究。角化细胞生长因子（keratinocyte growth factor,KGF）对多种细胞都具有促进增殖、分化的功能,能够有效改善克罗恩病、缺血再灌注等因素造成的肠粘膜损伤,修复肠粘膜屏障,改善腹痛、腹泻等不良症状。在肠道,KGF多由TCRγδT细胞分泌,在肠粘膜遭受刺激时,KGF表达可升高。多项研究表明,KGF的表达与细胞因子IL-17A高度相关,而作为IL-17A主要细胞来源的Th17细胞,理论上可直接受吗替麦考酚酯的抑制,根据以上反应链条,不难推测:在肠道,吗替麦考酚酯可能通过抑制Th17细胞及其IL-17A的分泌,减少TCRγδT细胞的活化和KGF的表达,进而造成肠粘膜屏障结构和功能受损,这可能是吗替麦考酚酯引发胃肠反应的作用机制之一。为了验证该假说,我们拟建立吗替麦考酚酯诱导的小鼠肠粘膜损伤模型,外源性给予KGF治疗,观察效果并探讨原因;设计体内、外实验,进一步探究吗替麦考酚酯是否通过作用Th17细胞及其特征性细胞因子IL-17A,进而影响肠道TCRγδT细胞表达KGF的部分作用机制。本研究可为减轻吗替麦考酚酯造成的胃肠道反应提供新的研究思路和干预措施。方法:1.建立吗替麦考酚酯诱导小鼠肠粘膜屏障损伤模型C57雄性小鼠,重20 g-25 g,按照:500 mg/kg,每天灌胃1次吗替麦考酚酯混悬液;或:250mg/kg,每天早、晚各灌胃1次的方式建模,连续灌胃14天,每天固定时间称量小鼠的体重,观察小鼠大便性状,处死后称量肠道湿重,并做病理检查,比较两种方法的建模效果。2.外源性KGF对吗替麦考酚酸酯诱导的肠粘损害的保护作用研究我们设计实验,拟从小鼠体重等大体指标、肠道病理变化、肠粘膜通透性、肠上皮细胞凋亡、增殖,紧密链接蛋白表达以及肠粘膜TCRγδ+IEL细胞比例变化等角度,探究外源性KGF对于MMF模型的肠粘膜保护作用。（1）取30只C57小鼠随机分成3组,每组10只,分别为吗替麦考酚酯组（MMF组）,吗替麦考酚酯+重组角化上皮生长因子组（MMF+KGF组）和对照组（Control组）;（2）称量各组小鼠体重、观察肛门血污、肠道肉眼下状态并测量其长度;（3）用FITC-Dextran和多功能酶标仪检测小鼠肠粘膜通透性;（4）取小肠做HE染色并用Chiu’s评分法做病理评分,评估各组小鼠肠粘膜损伤情况;（5）免疫荧光法和蛋白印迹法检测肠粘膜细胞紧密链接蛋白表达情况;（6）分别用Brd U法和TUNEL法检测肠粘膜上皮细胞增殖和凋亡情况;（7）流式细胞仪检测对比各组小鼠肠道TCRγδ+IEL细胞比例。3.吗替麦考酚酯对小鼠肠粘膜Th17细胞比例及IL-17A表达的影响。建立吗替麦考酚酯诱导的肠粘膜损伤模型,并在模型基础上给予Th17细胞回输,或IL-17A细胞因子腹腔注射,观察各组小鼠肠粘膜损伤,Th17细胞比例以及IL-17A表达情况,以期阐释吗替麦考酚酯的肠粘膜损害作用是否与Th17细胞抑制及其IL-17A表达下调有关。（1）动物模型的建立与分组:取40只C57小鼠随机分成4组,每组10只,分别为空白对照组（Control组）,吗替麦考酚酯组（MMF组）,MMF+Th17细胞回输组（MMF+Th17组）,和MMF+IL-17A腹腔注射组（MMF+IL-17A组）;（2）取小肠做HE染色并用Chiu’s评分法做病理评分,评估各组小鼠肠粘膜损伤情况;（3）流式细胞仪检测各组小鼠肠粘膜Th17细胞比例;（4）免疫印迹法检测各组小鼠肠粘膜IL-17A的表达;4.IL-17A作用Vγ4细胞表达KGF机制的初步探讨（1）用IL-17A（1μg/kg/day,连续5天）腹腔注射野生型小鼠、抗体清除Vγ1细胞小鼠、抗体清除Vγ4细胞小鼠、JAK/STAT信号阻断剂（AG490）小鼠,空白对照组以同样方式注射生理盐水。5天后,用免疫组化法观察KGF表达情况,蛋白印迹法检测JAK/STAT信号通路蛋白磷酸化情况;（2）体外培养Vγ4T淋巴细胞,实验组用IL-17A刺激,对照组加等量PBS缓冲液,6 h后用ELISA法检测细胞培养上清液中KGF蛋白的表达,用RT-PCR法检测KGF在RNA水平的变化,蛋白印迹法检测Vγ4T细胞内JAK/STAT信号通路蛋白磷酸化情况。结果:1.与以往报道的方法相比,在保证灌饲吗替麦考酚酯总量不变的情况下,早8:00,晚6:00两个时间点分别灌胃的方法具有省时、稳定的优点,所以,我课题组采用这一方法建模。2.与对照组相比,MMF组小鼠体重减轻,肠粘膜损伤和通透性增加,紧密链接蛋白（ZO-1、Claudin-1）的表达减少,分布紊乱。肠粘膜上皮细胞的增殖减少,凋亡增加;相对于MMF组,MMF+KGF组肠粘膜屏障损害减轻,肠上皮细胞增殖增加,凋亡减少;肠上皮细胞间的紧密链接蛋白更加稳定,肠上皮细胞内的TCRγδ+细胞比例升高。3.与对照组相比,MMF组肠粘膜病理损伤严重,而MMF+Th17组和MMF+IL-17A组肠粘膜损伤好转,病理评分比MMF组下降;流式细胞检测显示MMF组肠粘膜Th17细胞比例下降,MMF+Th17组肠粘膜Th17细胞比例有所回升,MMF+IL-17A组肠粘膜Th17细胞比例与MMF组未见差异。4.免疫组化结果显示,与空白对照组相比,用IL-17A腹腔注射后,模型对照组、抗体清除Vγ1细胞组肠粘膜KGF表达增多,抗体清除Vγ4细胞组、AG490组小鼠KGF表达未见差异;蛋白印迹结果显示,用IL-17A腹腔注射后,与空白对照组相比,模型对照组、抗体清除Vγ1细胞组p-JAK2、p-STAT3表达上升,抗体清除Vγ4细胞组、AG490组小鼠p-JAK2、p-STAT3表达未见差异;在体外细胞培养实验中,相对于对照组,实验组（IL-17A刺激）KGF在蛋白和RNA水平表达升高,蛋白印迹法检测到Vγ4T细胞内p-JAK2、p-STAT3表达升高。5.结论:1.相对于传统,改良后的建模方法（早8:0,晚6:00用250 mg/m L的吗替麦考酚酯混悬液100μL灌胃）,建模时间缩短,肠粘膜损伤明确,最终血药浓度与传统方法无差异。模型的稳定性好,成功率高。2.外源性给予KGF可以有效减轻吗替麦考酚酯造成的肠粘膜损伤,这一作用可能是通过促进肠粘膜上皮细胞增殖、抑制其凋亡,保护肠上皮细胞间的紧密链接蛋白（ZO-1、Claudin-1）,稳定肠上皮内的TCRγδ+细胞实现的。3.回输Th17细胞和腹腔注射IL-17A细胞因子可以有效减轻吗替麦考酚酯造成的肠粘膜损伤,这些结果提示:吗替麦考酚酯抑制肠粘膜Th17细胞及IL-17A表达有可能是其造成肠粘膜损伤的部分机制。4.肠粘膜上分泌KGF的γδT细胞亚型主要是Vγ4;IL-17A可以激活Vγ4细胞,增加KGF分泌;体在外实验中,IL-17A可以通过激活JAK/STAT信号通路,上调p-JAK2、p-STAT3水平,进而调控KGF表达;JAK2抑制剂AG490可以有效抑制Vγ4细胞分泌KGF。这些结果提示:IL-17A可通过上调肠粘膜Vγ4细胞JAK/STAT信号通路磷酸化水平调控KGF表达。
陈金水[8]（2020）在《脱细胞基质生物材料DNA去除标准和免疫原性研究》文中认为研究目的:本研究通过不同脱细胞方法制备不同梯度DNA、脂质以及内毒素残留量的ACTM生物材料,深入比较不同DNA、脂质和内毒素残留量与ACTM生物材料体外免疫原性、体内宿主免疫应答、材料重塑和组织再生的相关性,对ACTM生物材料中残留DNA、脂质、内毒素等可能致免疫原性的因素进行分析,确认ACTM生物材料免疫原性的关键因素,建立新的DNA残留标准,为规范脱细胞技术制备ACTM生物材料提供新的方向和标准。因此本研究分为三个部分进行:1.不同DNA/脂质/内毒素残留量ACTM生物材料制备和测定;2.不同DNA/脂质/内毒素残留量ACTM生物材料体外及体内免疫原性实验;3.不同DNA/脂质/内毒素残留量ACTM生物材料大鼠部分腹壁肌缺损修复实验。研究方法:1.不同DNA/脂质/内毒素残留量ACTM生物材料制备和测定:（1）利用猪SIS和UBM材料采用梯度递进的脱细胞方法制备出不同梯度DNA、脂质、内毒素残留量的ACTM生物材料:PAA处理SIS制备SIS-1组材料;PAA+脱脂处理SIS制备SIS-2组材料;PAA+脱脂+去内毒素处理SIS制备SIS-3组材料;PAA处理UBM制备UBM组材料;以未做脱细胞处理SIS作为阳性对照SIS-PC组;以强酸强碱过度脱细胞处理SIS作为阴性对照SIS-NC组。（2）检测各组材料的细胞成分残留、DNA、脂质、内毒素、α-Gal抗原、PAA、环氧乙烷、病毒残留等指标:HE染色观察各组材料是否有细胞核成分残留;用磁珠抽提+Picogreen法检测各组材料的DNA残留量;用索氏抽提法测定各组材料的脂肪含量;用鲎试剂并采用动态光度法（定量）和凝胶法（半定量）两种方法检测法检测材料内毒素残留量;用抑制ELISA方法进行α-Gal抗原清除率测定;用酸度计检测各组材料的PAA残留;采用气相色谱法检测材料环氧乙烷残留量;用细胞培养法验证PAA处理对各组材料的病毒灭活效果。2.不同DNA/脂质/内毒素残留量ACTM生物材料体外及体内免疫原性实验:（1）体外免疫原性实验,分别从T淋巴细胞增殖实验、B淋巴细胞增殖实验、腹腔巨噬细胞活化实验及巨噬细胞分泌炎症介质（TNF-α和NO）量等方面评价ACTM生物材料的体外免疫原性。（2）体内免疫原性实验则选择小鼠腹腔植入ACTM生物材料模型,分别评价腹腔内植入材料后外周血免疫炎性反应（包括不同白细胞种类的数量、免疫球蛋白量）、腹腔免疫炎性反应（包括腹腔液巨噬细胞数量、产生炎性细胞因子量）以及脾脏指数、脾脏细胞增殖活性（检测不同淋巴细胞亚群比例）。3.不同DNA/脂质/内毒素残留量ACTM生物材料大鼠部分腹壁肌缺损修复实验:（1）构建大鼠部分腹壁肌肉缺损模型,采用同体对照法,分别于每只大鼠两侧腹壁各造一处腹壁肌部分肌肉缺损,两侧的缺损分别用同等大小不同研究材料补片Inlay法修复;（2）术后随访观察,包括大鼠基本活动、血清肿发生、手术部位感染、腹壁膨出、死亡等;（3）观察补片皱缩情况;（4）获取组织标本行组织学检测（HE染色、Masson三色染色）、免疫组化检测（CD68、CCR7、CD206、CD3、CD19、CD4、CD8）,评价修复区域的炎症细胞浸润、巨噬细胞分型及比例、淋巴细胞分型及比例以及补片降解、再生血管、再生胶原纤维等情况。研究结果:1.研究所用各组材料均无PAA残留,环氧乙烷及病毒灭活均降低至不产生显着影响水平,组间没有明显差异。除了SIS-PC组,其余各组均无细胞核成分残留,且α-gal抗原清除率无显着差异。SIS-1组材料DNA残留、脂质含量和内毒素残留水平均显着高于SIS-2组及SIS-3组材料（p<0.001）。而SIS-2组材料DNA残留量、脂质含量与SIS-3组材料相似;UBM组内毒素残留显着低于SIS-1组和SIS-2组材料,与SIS-3组材料相似,但是DNA残留和脂质含量与SIS-1组材料没有显着差异;通过前面描述的脱细胞处理方法制备出的4组研究材料DNA残留、脂质含量、内毒素残留等指标组间差距明显,四组材料特点如下:SIS-1组材料高DNA、高脂质、高内毒素;SIS-2组材料中DNA、低脂质、中内毒素;SIS-3组材料低DNA、低脂质、低内毒素;UBM组材料高DNA、高脂质、低内毒素。2.ACTM生物材料体外免疫原性实验结果显示:SIS-1组的T、B淋巴细胞增殖率均低于SIS-2组;而TNF-α、NO释放量高于SIS-2组;与SIS-2组相比,SIS-3组在T、B淋巴细胞增殖率、巨噬细胞活化率以及分泌促炎细胞因子（TNF-α和NO）方面均显着降低。UBM组、SIS-3组均没有显着提高巨噬细胞的增殖率,SIS-1组同样没有激活巨噬细胞。但TNF-α、NO的释放量与脱细胞程度正相关,SIS-2组促炎细胞因子释放量显着高于SIS-3组,而后者与UBM组无显着性差异。3.体内免疫原性实验结果显示:SIS-1组促炎细胞因子TNF-α和IFN-γ高于SIS-2组,而抗炎细胞因子IL-4和IL-10则相反;SIS-1组Th细胞比例低于SIS-2组,而CTL细胞比例则更高,SIS-1组CD4+/CD8+细胞比例显着低于SIS-2组;SIS-3组腹腔巨噬细胞总数显着低于SIS-2组,而且SIS-3组促炎细胞因子TNF-α和IFN-γ分泌则显着低于SIS-2,而抗炎细胞因子IL-4和IL-10分泌则相反。4.在大鼠部分腹壁肌缺损修复实验中,术后1周,SIS-1组修复区血清肿发生率为70%（21/30）,SIS-2组修复区血清肿发生率为40%（12/30）,而SIS-PC组修复区血清肿发生率高达90%（27/30）,而SIS-3、UBM及SIS-NC组未发生。SIS-3、UBM组补片皱缩不明显,术后8周,SIS-1和SIS-2组补片皱缩显着明显高于SIS-3和UBM组,而SIS-1组补片皱缩最明显,仅剩植入面积的57.1%。SIS-1和SIS-2组修复区炎性细胞浸润程度显着高于SIS-3和UBM组。SIS-3和UBM组胶原纤维再生情况也较SIS-1和SIS-2组良好。SIS-1和SIS-2修复区的细胞浸润均以M1型巨噬细胞为主,而SIS-3和UBM组则以M2型巨噬细胞为主。SIS-1和SIS-2组修复区的M1/M2比例始终显着高于SIS-3和UBM组。SIS-3和UBM的T淋巴细胞浸润以Th为主,而SIS-1、SIS-2组均以CTL为主;术后1周、4周、8周均是SIS-1修复区的CD4+/CD8+细胞比例最低,SIS-2组其次,SIS-3和UBM组始终显着高于SIS-1和SIS-2组。研究结论:1.组织材料来源不同和脱细胞方法不同,可以影响ACTM生物材料内DNA、脂质及内毒素残留等潜在引起免疫反应因素。采用逐步递进的脱细胞方法可以制备出不同梯度DNA残留、脂质含量、内毒素残留量的SIS材料和UBM材料。2.ACTM生物材料体外免疫原性实验及腹腔植入ACTM生物材料体内免疫原性实验结果均显示,ACTM生物材料免疫原性与DNA残留、脂质含量无关,而与内毒素残留有关。3.大鼠腹壁肌修补模型评价结果进一步证实,内毒素残留是ACTM生物材料植入术后早期修复区炎症-免疫反应的主要影响因素。随着内毒素残留的降低,术后早期血清肿、补片皱缩等炎症反应发生率均可降低,而低内毒素生物材料植入体内后可诱导再生组织胶原纤维有序排列,促进修复区组织重塑。4.DNA残留、脂质含量不是影响ACTM生物材料免疫炎症反应和修复效果的关键因素,需要确认新的ACTM生物材料中DNA残留量标准。内毒素残留与ACTM生物材料的免疫原性密切相关,内毒素应作为衡量ACTM生物材料免疫原性和安全性的重要指标。创新点:国内外首先研究确认残留DNA是否为影响ACTM宿主-材料反应类型和免疫原性的关键因素,提出内毒素是宿主-材料反应类型决定因素,内毒素是ACTM免疫原性和安全性的重要指标。这对于ACTM材料脱细胞新的标准制定具有重要意义,对于今后ACTM生物材料在我国大规模生产研发和临床应用具有重要的意义。
金圣博[9]（2020）在《基于Toll样受体信号介导炎症反应探讨温针灸对自发性高血压大鼠的抗炎机制》文中研究表明目的:本实验以自发性高血压大鼠为动物模型,在“从脾论治”高血压病的理论指导下,探寻温针灸足三里穴对自发性高血压大鼠降压机制,同时通过Toll受体信号通路（TLR4/My D88/NF-κB）介导下游炎症反应,从而探讨温针灸对自发性高血压大鼠抗炎机制及内皮细胞保护作用机制,为高血压病中医药临床防治提供可靠的基础理论依据。材料与方法:将10只雄性京都种大鼠（WKY）纳入空白组,依照随机数字表格法将40只雄性自发性高血压大鼠（SHR）随机分至模型组、温针灸组、针刺组、艾灸组,每组10只。常规饲料适应性喂养一周,采用智能无创血压计测量各组大鼠尾动脉血压,测量3次取平均值。开始实验,予正常组和模型组大鼠单纯固定20min,日一次,不予针灸干预;予温针灸组大鼠温针灸双侧足三里穴20min;予针刺组大鼠针刺双侧足三里穴20min;予艾灸组大鼠艾灸双侧足三里穴20min,日一次,连续治疗15天,同时测量实验开始后的第1、3、5、7、9、11、13、15、17、19、21天上午9点～11点的各组大鼠血压,连续测量3次取平均值,录入Excel并待统计。治疗结束,予各组大鼠水合氯醛（10%）腹腔麻醉,固定、脱毛、消毒,沿腹中线开腹,暴露腹主动脉并迅速采血,将血液离心后取上清液放入无菌EP管中冻存备用,采用ELISA法检测血清炎症因子IL-6、IFN-β、TNF-α含量;血清免疫指标Ig A、Ig M、Ig G含量;血管收缩因子Ang-Ⅱ、ET-1、VEGF含量。取一段完整的腹主动脉1cm,漂洗后用4%多聚甲醛溶液固定,HE染色法进行修块、包埋、制片,荧光显微镜下观察腹主动脉壁病理形态学变化。探查腹部,迅速取脾脏组织50mg放入EP管中冻存备用,HE染色法将固定好的大鼠脾脏组织修块、包埋、制片,荧光显微镜下观察脾脏组织病理学改变及炎性细胞浸润状态;采用Western Blot法,取脾脏组织50mg,研磨、离心,吸取上清液,提取脾脏组织蛋白质,使用BCA检测法测定蛋白质浓度,通过Image J软件计算灰带条图片灰度值,定量分析出各组TLR4、My D88、NF-κB p65蛋白表达量及NF-κB p65蛋白磷酸化水平;取脾脏组织100mg,提取大鼠脾脏组织m RNA,采用q PCR法,通过逆转录反应、PCR扩增反应,导出q PCR数据并计算分析出TLR4、My D88、NF-κB p65 m RNA的表达水平。实验相关数据使用SPSS 22.0软件进行统计学分析。实验结果以均数±标准差（x±s）表示;组间数据差异比较采用单因素方差分析（one-way ANOVA）,以P<0.05表示具有统计学差异。结果:1.各组大鼠治疗前后血压变化:实验第2天温针灸组、针刺组血压开始逐渐下降,实验第7天血压开始显着下降,温针灸组下降幅度大于针刺组;实验第15天实验干预结束,血压降幅明显程度依次为温针灸组、针刺组、艾灸组;实验干预结束后继续测量血压至第21天发现,温针灸组与艾灸组血压较为平稳,无明显浮动,而针刺组、模型组、正常组血压均有不同程度上浮,其中针刺组血压上升幅度较为明显。2.各组大鼠脾脏动脉周围淋巴鞘及淋巴细胞分布情况:正常组与温针灸组白髓面积相对较大,动脉周围淋巴鞘组织较厚,可清晰观察到鞘内侧淋巴小结,鞘外侧分布大量且密集的淋巴细胞;而模型组、针刺组和艾灸组白髓和脾小结所占面积均有不同程度缩小,动脉周围淋巴鞘显着缩小,鞘周围淋巴细胞分布也较为稀少,其中以模型组缩小程度最为明显。3.各组大鼠血清炎症因子IL-6、IFN-β、TNF-α含量分析:与正常组比较,模型组、针刺组、艾灸组IL-6、TNF-α含量显着升高,IFN-β含量显着降低;温针灸组TNF-α含量显着升高,IFN-β含量显着降低。与模型组比较,温针灸组IL-6、TNF-α含量显着降低、IFN-β含量显着升高;针刺组TNF-α含量显着降低,艾灸组IFN-β含量显着升高。与温针灸组比较,针刺组与艾灸组IL-6、TNF-α含量显着升高,IFN-β含量显着降低。与针刺组比较,艾灸组TNF-α含量显着升高。以上差异皆具有统计学意义（P<0.05）。4.血压异常与免疫炎症状态之间存在密切关联且相互影响:大鼠收缩压、舒张压与IL-6、TNF-α含量之间呈正相关,与IFN-β含量之间呈负相关,说明随着大鼠血压值的升高,血清内IL-6、TNF-α含量也随之增加,加快血清炎症因子的表达,而IFN-β含量随之降低。5.Toll样受体信号通路（TLR4/My D88/NF-κB）中的各信号分子蛋白表达及NF-κB p65磷酸化水平:与正常组比较,模型组、针刺组TLR4、My D88、NF-κB p65蛋白表达及NF-κB p65蛋白磷酸化水平显着升高,温针灸组只有TLR4蛋白表达和NF-κB p65蛋白磷酸化水平显着升高,而艾灸组TLR4、NF-κB p65蛋白表达及NF-κB p65蛋白磷酸化水平显着升高;与模型组相比,温针灸组TLR4、My D88、NF-κB p65蛋白表达及NF-κB p65蛋白磷酸化水平显着降低;与温针灸组比较,针刺组TLR4、My D88、NF-κB p65蛋白表达及NF-κB p65蛋白磷酸化水平显着升高,而艾灸组TLR4、NF-κB p65蛋白表达及NF-κB p65蛋白磷酸化水平显着升高。以上差异皆具有统计学意义（P<0.05）。6.Toll样受体信号通路（TLR4/My D88/NF-κB）中的各信号分子基因表达情况:与正常组比较,模型组、针刺组、艾灸组大鼠脾脏组织TLR4、My D88、NF-κB p65 m RNA表达水平显着升高,温针灸组TLR4、My D88表达水平显着升高;与模型组比较,温针灸组大鼠脾脏组织TLR4、My D88、NF-κB p65 m RNA表达水平显着降低,针刺组TLR4表达水平有所降低,而艾灸组TLR4、My D88 m RNA表达水平下降;与温针灸组比较,针刺组和艾灸组大鼠脾脏组织TLR4、My D88、NF-κB p65 m RNA表达水平显着升高。以上差异皆具有统计学意义（P<0.05）。7.各组腹主动脉壁HE染色结果分析:正常组主动脉壁内膜光滑完整,各层细胞排列有序,内皮细胞未见脱落、增生,中膜平滑肌细胞及弹性纤维紧密排列有序;模型组腹主动脉壁内膜明显增生、增厚、凸起,内皮细胞存在脱落情况,中膜平滑肌层排列混乱,有增生、肥大,部分区域出现变形、萎缩,弹性纤维间隔参差不齐,偶有断裂、皱褶现象,外膜细胞欠平整,偶有脱落情况;温针灸组腹主动脉壁内膜略粗糙,少许内皮细胞脱落,中膜平滑肌细胞排列偶有弯曲、褶皱,弹性纤维间隙大致均匀,部分出现缩小现象;针刺组大鼠腹主动脉壁内膜粗糙、欠平整,内皮细胞存在脱落现象,中膜平滑肌细胞增生、肥大、排列紊乱,弹性纤维出现褶皱、变形,间隙欠均匀,部分外膜出现突起、变形及细胞脱落现象;艾灸组大鼠腹主动脉壁内膜褶皱、变形,内皮细胞有脱落现象,中膜平滑肌细胞部分萎缩、减少,排列欠整齐,弹性纤维间隙不均匀,外膜欠光滑,偶有增生现象。8.各组血清免疫学指标比较:与正常组比较,模型组和艾灸组血清Ig A、Ig G含量显着降低,血清Ig M含量显着升高,而针刺组血清Ig A含量显着降低;与模型组比较,温针灸组血清Ig A、Ig G含量显着升高,艾灸组血清Ig G含量显着降低;与温针灸组比较,针刺组血清Ig A含量显着降低,艾灸组血清Ig A、Ig G含量显着降低;与针刺组比较,艾灸组血清Ig G含量显着降低。以上差异皆具有统计学意义（P<0.05）。9.各组血清AngⅡ、ET-1、VEGF含量比较:与正常组比较,模型组、艾灸组血清AngⅡ、ET-1、VEGF含量显着升高,温针灸组血清ET-1含量显着升高,针刺组血清AngⅡ、ET-1含量显着升高;与模型组比较,温针灸组AngⅡ、ET-1、VEGF含量显着降低,针刺组ET-1、VEGF含量显着降低,艾灸组ET-1含量显着降低;与温针灸组比较,针刺组ET-1含量显着增高,艾灸组AngⅡ、ET-1、VEGF含量显着增高,以上差异均有统计学意义（P<0.05）。结论:1温针灸足三里可显着降低自发性高血压大鼠血压,疗效平稳、持久。2血压异常与免疫炎症状态之间存在密切关联且相互影响;温针灸足三里穴可显着改善自发性高血压大鼠体内存在的炎症状态。3温针灸足三里穴可通过抑制大鼠脾组织Toll样受体信号通路中TLR4、My D88、NF-κB p65蛋白及m RNA表达调控信号传导。4温针灸足三里穴可通过调控TLR4/My D88/NF-κB信号通路,减轻血清炎症状态,提高血清抗炎能力,良性调控血管舒缩功能,从而降低炎性损伤程度,发挥对内皮细胞的保护作用。
倪达[10]（2020）在《外泌体介导心肌损伤保护作用的机制研究》文中进行了进一步梳理背景:近年来,外泌体在心肌保护的研究中逐渐受到越来越多的关注。心血管系统是外泌体进行细胞间信号传递的重要场所之一,外泌体介导的心肌细胞间信号传递广泛涉及心血管系统疾病的生理及病理过程。在心肌缺血后,不同细胞来源的外泌体介导的信号传递和组织修复可能发挥着重要作用,其含有的大量与其结构和功能密切相关的物质可通过自分泌或旁分泌的方式作用于自身或远隔的靶细胞,修复受损心肌,对心肌梗死以及心肌缺血再灌注损伤引发的心肌细胞凋亡具有一定保护作用,可能减少梗死面积、增加新生血管数量,从而改善心脏功能。但外泌体如何发挥心肌保护作用的具体机制仍有待进一步研究。本课题研究拟从两部分内容进行阐述:首先从探讨多种来源外泌体在体外循环围手术期的水平变化的角度阐述外泌体与心肌保护之间的关联与作用,然后选取来源广泛且具有多向分化功能的骨髓间充质干细胞来源外泌体,拟从细胞和整体动物两个层面,通过一系列实验,深入研究外泌体介导心肌损伤保护作用的具体机制。第一部分研究多种来源外泌体在体外循环围手术期的表达变化情况目的:探究外周血内皮细胞、树突状细胞、巨噬细胞和血小板等多种来源的外泌体在体外循环围手术期的变化情况。方法:选择2017年1月-2017年12月行体外循环下先天性心脏畸形矫治术患儿60例,于体外循环前、再灌注1h、6h、12h、24h、48h、72h分别采集桡动脉血,采用生物素双抗体夹心酶联免疫吸附法（ELISA）检测患儿血浆中c Tn T的浓度水平,并提取桡动脉血内皮细胞、树突状细胞、巨噬细胞和血小板,分别采用超速离心法分离内皮细胞、树突状细胞和巨噬细胞来源的外泌体,采用离心法分离血小板来源的外泌体。结果:体外循环再灌注1h、6h、12h、24h、48h c Tn T浓度[（1.352±0.233、1.653±0.231、1.263±0.224、0.623±0.145、0.231±0.025）μg/l]均明显高于体外循环前[（0.013±0.001）μg/l]（P<0.05）,再灌注1h、6h、12h、24h、48h内皮细胞来源外泌体含量[（167.55±26.67、210.57±31.12、189.56±26.32、142.28±4.27、91.02±3.16）×106微粒/ml]均明显高于体外循环前[（76.78±13.14）×106微粒/ml]（P<0.05）,再灌注1h、6h、12h、24h、48h树突状细胞来源外泌体含量[（87.51±6.28、92.12±5.37、83.14±4.29、68.37±3.28、50.49±3.94）×106微粒/ml]均明显高于体外循环前[（34.27±4.52）×106微粒/ml]（P<0.05）,再灌注1h、6h、12h、24h、48h巨噬细胞来源外泌体含量[（92.16±2.73、101.26±3.47、88.19±3.20、65.45±2.76、43.28±1.97）×106微粒/ml]均明显高于体外循环前[（28.78±2.64）×106微粒/ml]（P<0.05）,再灌注1h、6h、12h、24h、48h血小板来源外泌体含量[（134.27±4.28、141.28±3.06、135.84±3.29、105.61±2.58、65.24±3.10）×106微粒/ml]均明显高于体外循环前[（41.51±2.02）×106微粒/ml]（P<0.05）,再灌注72h各指标和体外循环前比较无统计学意义（P>0.05）。结论:外周血内皮细胞、树突状细胞、巨噬细胞、血小板来源的外泌体浓度水平在体外循环围手术期明显增高,且与代表心肌损伤的c Tn T浓度变化一致,证明外泌体具有心肌保护作用。第二部分研究骨髓间充质干细胞来源外泌体调控自噬发挥心肌保护作用机制目的:探讨骨髓间充质干细胞移植对心肌梗死的影响是否与自噬有关,以及外泌体在其中发挥的作用。方法:1.建立小鼠心肌梗死模型,将骨髓间充质干细胞注入梗死周围心肌（4处20μl,共2×105个细胞）,分别于术后1、3、7、14、28天检测心功能的变化;术后28天取心脏标本,经Masson染色后,比较梗死面积的差异;TUNNEL法检测各组心肌细胞凋亡情况。2.在心肌梗死后1天采集心肌细胞,比较各组心肌组织自噬水平的变化。3.将骨髓间充质干细胞与心肌细胞共培养,在缺氧培养箱中模拟心肌梗死情况,检测心肌细胞自噬水平,并观察使用自噬抑制剂3-MA后的变化情况。4.提取骨髓间充质干细胞来源的外泌体,在缺氧条件下与心肌细胞共培养,检测心肌细胞自噬水平。结果:1.骨髓间充质干细胞移植组术后28天时心功能较心肌梗死组明显改善;骨髓间充质干细胞移植组小鼠心肌梗死面积较心肌梗死组明显减少;骨髓间充质干细胞移植组心肌细胞凋亡率低于心肌梗死组。2.骨髓间充质干细胞移植组LC3-I、LC3-II、p53和BNIP3的表达明显降低。3.缺氧组p53和BNIP3水平升高,骨髓间充质干细胞共培养组p53和BNIP水平降低,使用自噬抑制剂后,心肌细胞死亡率下降。4.骨髓间充质干细胞来源外泌体共培养组LC3-Ⅰ、LC3-Ⅱ、p53和BNIP3在蛋白和m RNA水平上均明显低于缺氧组。结论:骨髓间充质干细胞分泌的外泌体可通过P53/BNIP3信号通路下调心肌细胞自噬水平,减少心肌细胞自噬死亡,从而改善心功能,减少心肌重塑,发挥心肌保护作用。
二、大鼠心脏移植后外周血T淋巴细胞rDNA转录活性变化及其意义（论文开题报告）
（1）论文研究背景及目的
此处内容要求：
首先简单简介论文所研究问题的基本概念和背景，再而简单明了地指出论文所要研究解决的具体问题，并提出你的论文准备的观点或解决方法。
写法范例：
本文主要提出一款精简64位RISC处理器存储管理单元结构并详细分析其设计过程。在该MMU结构中,TLB采用叁个分离的TLB,TLB采用基于内容查找的相联存储器并行查找,支持粗粒度为64KB和细粒度为4KB两种页面大小,采用多级分层页表结构映射地址空间,并详细论述了四级页表转换过程,TLB结构组织等。该MMU结构将作为该处理器存储系统实现的一个重要组成部分。
（2）本文研究方法
调查法：该方法是有目的、有系统的搜集有关研究对象的具体信息。
观察法：用自己的感官和辅助工具直接观察研究对象从而得到有关信息。
实验法：通过主支变革、控制研究对象来发现与确认事物间的因果关系。
文献研究法：通过调查文献来获得资料，从而全面的、正确的了解掌握研究方法。
实证研究法：依据现有的科学理论和实践的需要提出设计。
定性分析法：对研究对象进行“质”的方面的研究，这个方法需要计算的数据较少。
定量分析法：通过具体的数字，使人们对研究对象的认识进一步精确化。
跨学科研究法：运用多学科的理论、方法和成果从整体上对某一课题进行研究。
功能分析法：这是社会科学用来分析社会现象的一种方法，从某一功能出发研究多个方面的影响。
模拟法：通过创设一个与原型相似的模型来间接研究原型某种特性的一种形容方法。
三、大鼠心脏移植后外周血T淋巴细胞rDNA转录活性变化及其意义（论文提纲范文）
（1）髓系抑制细胞通过增强Th17反应促进原发性膜性肾病的疾病进展（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 英文缩略词 |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 原发性膜性肾病 |
| 1.1.1 原发性膜性肾病的发病机制 |
| 1.1.2 原发性膜性肾病的研究进展 |
| 1.1.3 治疗上的新进展 |
| 1.2 原发性膜性肾病与免疫细胞间的关系 |
| 1.2.1 原发性膜性肾病与Th2细胞 |
| 1.2.2 原发性膜性肾病与B淋巴细胞 |
| 1.2.3 原发性膜性肾病与Th17细胞 |
| 1.2.4 原发性膜性肾病与自然杀伤细胞(natural killer, NK) |
| 1.2.5 原发性膜性肾病与Treg |
| 1.3 MDSC |
| 1.3.1 MDSC的生物分类和功能特征 |
| 1.3.2 MDSC在自身免疫性疾病中的作用 |
| 1.3.3 MDSC在肿瘤中的作用 |
| 1.3.4 MDSC在免疫相关性肾病中的研究进展 |
| 1.3.5 MDSC与其他免疫细胞相互作用 |
| 1.4 Th17与自身免疫性疾病 |
| 1.4.1 Th17细胞的分化和表达调控 |
| 1.4.2 Th17细胞功能 |
| 1.4.3 Th17细胞在自身免疫性疾病中的促炎作用 |
| 1.4.4 Th17细胞在肾脏炎症和肾脏自身免疫性疾病中的作用 |
| 第2章 原发性膜性肾病患者中MDSC通过促进Th17细胞极化促进疾病进展 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.2.1 材料和试剂 |
| 2.2.2 仪器 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 研究对象入组及排除标准 |
| 2.3.2 密度梯度离心法分离外周血单个核细胞(peripheral blood mononuclear cell, PBMC) |
| 2.3.3 磁珠分选初始CD4~+ T细胞 |
| 2.3.4 流式分选MDSC |
| 2.3.5 MDSC抑制功能实验 |
| 2.3.6 Th17极化实验 |
| 2.3.7 Th2极化实验 |
| 2.3.8 培养MDSC |
| 2.3.9 细胞外染色 |
| 2.3.10 细胞内IFN-γ/IL-4/IL-17A染色 |
| 2.3.11 Treg染色 |
| 2.3.12 酶联免疫吸附法检测血浆中抗磷脂酶A2受体抗体(PLA2R)IgG |
| 2.3.13 人Th1/Th2/Th17 细胞因子检测 |
| 2.3.14 血浆Arg-1 和IL- 13 检测 |
| 2.3.15 荧光定量PCR |
| 2.3.16 组织染色 |
| 2.3.17 多色免疫组化(Multiplex immunohistochemistry,IHC) |
| 2.3.18 统计分析 |
| 2.4 结果 |
| 2.4.1 PMN患者病变肾组织的特征性病理改变 |
| 2.4.2 PMN患者血浆中抗PLA2R抗体含量与尿蛋白定量正相关 |
| 2.4.3 CD3~+ T细胞与CD11b~+ 细胞在PMN患者病变肾组织中沉积 |
| 2.4.4 PMN患者Th2反应增强并与疾病活动度正相关 |
| 2.4.5 PMN患者外周血Th1细胞比例下调 |
| 2.4.6 PMN患者外周血Treg细胞比例下调 |
| 2.4.7 PMN患者外周血MDSC及亚群数量显着增加并与疾病活动度正相关 |
| 2.4.8 PMN患者的MDSC具有更强的抑制自体初始CD4+ T细胞增殖的功能 |
| 2.4.9 PMN患者Th2比例增加与MDSC增加正相关 |
| 2.4.10 体外IL -6 和IL-10 增强MDSC抑制Th2分化的能力 |
| 2.4.11 IL-17~+ 细胞和CD11b~+ 细胞在PMN患者病变肾组织中沉积 |
| 2.4.12 PMN患者Th17反应增强并与疾病活动度正相关 |
| 2.4.13 PMN患者Th17反应与MDSC正相关 |
| 2.4.14 MDSC以Arg-1 依赖的方式促进Th17细胞分化 |
| 2.4.15 PMN 患者血浆 Arg-1 含量增加并与疾病活动度相关 |
| 2.4.16 IL-6 和IL-10 促进MDSC分泌Arg-1 |
| 2.5 讨论 |
| 2.6 小结 |
| 第3章 去除MDSC缓解PMN模型小鼠的肾脏损伤 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.2.1 实验动物 |
| 3.2.2 实验材料和试剂 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 膜性肾病小鼠模型的构建及GEM治疗 |
| 3.3.2 PBMC的分离 |
| 3.3.3 背部和腋窝淋巴结细胞分离 |
| 3.3.4 脾脏单细胞悬液制备 |
| 3.3.5 流式检测MDSC |
| 3.3.6 Treg细胞内染色 |
| 3.3.7 Th1/2/17 细胞内染色 |
| 3.3.8 荧光定量PCR |
| 3.3.9 小鼠尿白蛋白/尿肌酐比率的测定 |
| 3.3.10 小鼠血清尿素氮测定 |
| 3.3.11 肾组织病理染色 |
| 3.3.12 肾脏透射电镜制备 |
| 3.3.13 统计分析 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 应用rh-α3NC1成功构建小鼠PMN模型 |
| 3.4.2 PMN小鼠MDSC及其亚群比例增加 |
| 3.4.3 GEM可有效去除小鼠外周血中MDSC |
| 3.4.4 去除MDSC减轻PMN模型小鼠的肾组织损伤 |
| 3.4.5 去除MDSC减弱PMN小鼠Th17免疫反应 |
| 3.4.6 去除MDSC减弱PMN小鼠Th2免疫反应 |
| 3.4.7 去除MDSC增强PMN小鼠Th1免疫反应 |
| 3.4.8 去除MDSC增加PMN小鼠Treg比例 |
| 3.5 实验讨论 |
| 3.6 小结 |
| 第4章 结论 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 作者简介及在学期间所取得的科研成果 |
| 致谢 |
（2）白介素-37通过髓源性抑制细胞影响急性胰腺炎炎症反应的机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 第1章 绪论 |
| 1.1 急性胰腺炎 |
| 1.1.1 急性胰腺炎概述 |
| 1.1.2 AP的发病机制 |
| 1.2 调节性免疫细胞 |
| 1.2.1 调节性T细胞 |
| 1.2.2 调节性B细胞 |
| 1.2.3 调节性NK细胞 |
| 1.2.4 调节性DC细胞 |
| 1.2.5 调节性巨噬细胞 |
| 1.3 髓源性抑制细胞 |
| 1.3.1 髓源性抑制细胞概述 |
| 1.3.2 MDSC的产生与分化 |
| 1.3.3 MDSC的功能 |
| 1.3.4 影响MDSC功能的因素 |
| 1.3.5 MDSC与疾病 |
| 1.4 TIGIT |
| 1.4.1 耗竭性T细胞概述 |
| 1.4.2 TIGIT概况 |
| 1.4.3 TIGIT在肿瘤中的研究 |
| 1.4.4 TIGIT在移植中的研究 |
| 1.4.5 TIGIT在感染性疾病中的研究 |
| 1.4.6 TIGIT在自身免疫性疾病中的研究 |
| 1.5 IL-37 |
| 1.5.1 IL-37 的调控作用 |
| 1.5.2 IL-37 在疾病中的作用 |
| 1.6 MDSC与 TIGIT的关系及其调控机制 |
| 1.7 展望 |
| 第2章 AP患者中MDSC数量及功能分析 |
| 2.1 引言 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.2.1 试剂耗材 |
| 2.2.2 仪器设备 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 实验对象 |
| 2.3.2 样本采集与保存 |
| 2.3.3 梯度密度离心法分离PBMC |
| 2.3.4 细胞计数 |
| 2.3.5 细胞表面染色 |
| 2.3.6 体外刺激PBMC实验 |
| 2.3.7 细胞内染色 |
| 2.3.8 流式分选MDSC细胞 |
| 2.3.9 磁珠分选CD3~+T 细胞 |
| 2.3.10 MDSC抑制实验 |
| 2.3.11 抑制实验检测 |
| 2.3.12 ROS染色 |
| 2.3.13 统计学方法 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.4.1 HC、MAP、SAP患者一般信息及临床特点 |
| 2.4.2 MAP、SAP患者外周血中MDSC细胞升高 |
| 2.4.3 SAP患者腹腔积液中MDSC细胞比例较外周血升高 |
| 2.4.4 AP患者外周血中MDSC升高与疾病严重程度相关 |
| 2.4.5 G-MDSC和 M-MDSC与疾病严重程度相关性分析 |
| 2.4.6 SAP患者外周血中MDSC对 T细胞的抑制作用更强 |
| 2.4.7 AP患者与健康对照外周血中 MDSC中 Arg-1、ROS分析 |
| 2.4.8 AP患者与健康对照外周血中MDSC表面CD155 表达分析 |
| 2.5 讨论 |
| 2.6 小结 |
| 第3章 TIGIT在 AP患者外周血中表达及其功能分析 |
| 3.1 引言 |
| 3.2 实验材料 |
| 3.2.1 试剂耗材 |
| 3.2.2 仪器设备 |
| 3.3 实验方法 |
| 3.3.1 研究对象、入选标准、排除标准及疾病严重程度分级标准 |
| 3.3.2 样本采集与保存 |
| 3.3.3 外周血PBMC的获取 |
| 3.3.4 细胞计数 |
| 3.3.5 细胞表面染色 |
| 3.3.6 PBMC体外刺激实验 |
| 3.3.7 细胞内染色 |
| 3.3.8 流式分选CD3~+TIGIT~+、CD3~+TIGIT~-细胞 |
| 3.3.9 细胞增殖实验 |
| 3.3.10 细胞增殖实验检测 |
| 3.3.11 数据分析及统计方法 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 AP外周血中CD3~+ T 细胞及CD3~+CD4~+、CD3~+CD8~+ T细胞百分比及数量减少 |
| 3.4.2 AP外周血中CD3~+ T 细胞及CD3~+CD4~+、CD3~+CD8~+ T细胞表面TIGIT表达下降 |
| 3.4.3 SAP患者外周血中CD3~+ T 细胞及其亚群CD4~+、CD8~+ T细胞功能检测 |
| 3.4.4 TIGIT~+T 细胞增殖能力较TIGIT~-T 细胞增殖能力强 |
| 3.5 实验讨论 |
| 3.6 小结 |
| 第4章 IL-37 通过影响 CD155 表达影响 MDSC对 T细胞的抑制功能 |
| 4.1 引言 |
| 4.2 实验材料 |
| 4.3 实验方法 |
| 4.3.1 研究对象、入选标准、排除标准及疾病严重程度分级标准 |
| 4.3.2 样本采集与保存 |
| 4.3.3 外周血PBMC的获取 |
| 4.3.4 细胞计数 |
| 4.3.5 细胞表面染色 |
| 4.3.6 PBMC体外刺激实验 |
| 4.3.7 细胞内染色 |
| 4.3.8 流式分选MDSC细胞及CD3~+TIGIT~+、CD3~+TIGIT~-细胞 |
| 4.3.9 细胞增殖实验 |
| 4.3.10 细胞增殖实验检测 |
| 4.3.11 ELISA法检测血浆IL-37 浓度 |
| 4.3.12 数据分析及统计方法 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.4.1 AP患者血清中及单核细胞中IL-37 表达升高 |
| 4.4.2 IL-37对MDSC表型的影响 |
| 4.4.3 IL-37对MDSC抑制功能的影响 |
| 4.4.4 IL-37对MDSC抑制功能的影响的机制 |
| 4.4.5 MDSC表面CD155 的表达依赖于ROS的表达 |
| 4.4.6 MDSC通过CD155/TIGIT途径抑制T细胞功能 |
| 4.5 实验讨论 |
| 4.6 小结 |
| 第5章 结论 |
| 创新点 |
| 参考文献 |
| 作者简介及博士在读期间科研成果 |
| 致谢 |
（3）蒙药“巴布-7”对大肠杆菌性腹泻小鼠肠黏膜屏障保护机制的相关研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 缩略语表 |
| 1 引言 |
| 1.1 大肠杆菌及大肠杆菌性腹泻的相关概述 |
| 1.1.1 大肠杆菌的概述 |
| 1.1.2 大肠杆菌性腹泻病的概述 |
| 1.2 蒙医药及蒙药“巴布-7”研究进展 |
| 1.2.1 蒙医药研究进展 |
| 1.2.2 蒙药“巴布-7”研究进展 |
| 1.3 大黄素研究进展 |
| 1.4 肠道屏障的概述 |
| 1.4.1 肠道屏障功能的概述 |
| 1.4.2 肠黏膜机械屏障 |
| 1.4.3 肠黏膜免疫屏障 |
| 1.4.4 肠黏膜化学屏障 |
| 1.4.5 肠黏膜生物屏障 |
| 1.5 研究目的及意义 |
| 2 大肠杆菌性腹泻模型的建立 |
| 2.1 实验材料 |
| 2.1.1 试剂与耗材 |
| 2.1.2 实验用菌 |
| 2.1.3 实验动物 |
| 2.1.4 主要仪器 |
| 2.2 实验方法 |
| 2.2.1 受试菌培养及菌悬液制备 |
| 2.2.2 腹泻模型建立方法 |
| 2.2.3 模型评价标准 |
| 2.3 数据处理 |
| 2.4 实验结果 |
| 2.4.1 小鼠临床症状 |
| 2.4.2 DAI评分、腹泻率及死亡率 |
| 2.4.3 小鼠肠道病理学观察及炎性因子的检测 |
| 2.5 讨论 |
| 2.6 结论 |
| 3 蒙药BBS复方对大肠杆菌性腹泻小鼠肠黏膜生物屏障的影响 |
| 3.1 实验材料 |
| 3.1.1 实验用菌 |
| 3.1.2 实验动物 |
| 3.2 实验方法 |
| 3.2.1 药物制备 |
| 3.2.2 受试菌培养 |
| 3.2.3 实验分组及给药方案 |
| 3.2.4 DNA提取 |
| 3.2.5 16S rRNA基因扩增 |
| 3.2.6 文库构建和测序 |
| 3.2.7 测序数据处理 |
| 3.2.8 OTU聚类和物种注释 |
| 3.2.9 样本复杂度分析(Alpha Diversity) |
| 3.2.10 多样本比较分析(Beta Diversity) |
| 3.3 数据统计 |
| 3.4 实验结果 |
| 3.4.1 物种多样性曲线及物种累积箱形图结果 |
| 3.4.2 Alpha Diversity指数分析结果 |
| 3.4.3 多样本比较分析结果(Beta Diversity) |
| 3.4.4 门水平分析结果 |
| 3.4.5 目水平分析结果 |
| 3.4.6 属水平分析结果 |
| 3.4.7 LEf Se分析 |
| 3.5 讨论 |
| 3.6 小结 |
| 4 蒙药BBS复方对大肠杆菌性腹泻小鼠肠黏膜机械屏障的影响 |
| 4.1 实验材料 |
| 4.1.1 试剂与耗材 |
| 4.1.2 实验菌株 |
| 4.1.3 实验动物 |
| 4.1.4 主要仪器 |
| 4.2 实验方法 |
| 4.2.1 药物制备 |
| 4.2.2 受试菌培养 |
| 4.2.3 实验分组及给药方案 |
| 4.2.4 实验流程及样品采集 |
| 4.2.5 HE染色 |
| 4.2.6 透射电镜检测 |
| 4.2.7 免疫组织化学检测 |
| 4.2.8 RT-PCR |
| 4.2.9 Western bolt |
| 4.2.10 ELISA法 |
| 4.3 数据处理 |
| 4.4 实验结果 |
| 4.4.1 对大肠杆菌性腹泻小鼠肠道病理损伤的影响 |
| 4.4.2 对大肠杆菌性腹泻小鼠绒毛长度、隐窝深度及其比值的影响 |
| 4.4.3 对大肠杆菌性腹泻小鼠肠道超微结构的影响 |
| 4.4.4 Occludin 免疫组化检测结果 |
| 4.4.5 Claudin-1免疫组化检测结果 |
| 4.4.6 Zo-1 蛋白及基因检测结果 |
| 4.4.7 JAMA检测结果 |
| 4.4.8 MLCK检测结果 |
| 4.4.9 DAO、D-LA、ET检测结果 |
| 4.5 讨论 |
| 4.5.1 对小肠形态的影响 |
| 4.5.2 对小肠超微结构的影响 |
| 4.5.3 对紧密连接相关蛋白的影响 |
| 4.5.4 对肠黏膜通透性的影响 |
| 4.6 结论 |
| 5 蒙药BBS复方对大肠杆菌性腹泻小鼠肠黏膜免疫屏障的影响 |
| 5.1 实验材料 |
| 5.1.1 试剂与耗材 |
| 5.1.2 实验菌种 |
| 5.1.3 实验动物 |
| 5.1.4 主要仪器 |
| 5.2 实验方法 |
| 5.2.1 蒙药BBS传统复方的制备 |
| 5.2.2 受试菌培养 |
| 5.2.3 实验分组及给药方案 |
| 5.2.4 实验流程及样品采集 |
| 5.2.5 流式细胞术 |
| 5.2.6 流式细胞术(TH1、TH2) |
| 5.2.7 ELISA |
| 5.3 数据处理 |
| 5.4 实验结果 |
| 5.4.1 CD3~+T、CD19~+B细胞百分比检测结果 |
| 5.4.2 CD4~+T、CD8~+T细胞百分比检测结果 |
| 5.4.3 Th_1、Th_2细胞检测结果 |
| 5.4.4 细胞因子检测结果 |
| 5.4.5 免疫球蛋白检测结果 |
| 5.4.6 sIgA检测结果 |
| 5.5 讨论 |
| 5.5.1 对T淋巴细胞及其亚群的影响 |
| 5.5.2 对B淋巴细胞及抗体的影响 |
| 5.5.3 对炎性细胞因子的影响 |
| 5.6 小结 |
| 6 蒙药BBS复方对大肠杆菌性腹泻小鼠肠黏膜化学屏障的影响 |
| 6.1 实验材料 |
| 6.1.1 试验与耗材 |
| 6.1.2 菌种 |
| 6.1.3 实验动物 |
| 6.1.4 主要仪器 |
| 6.2 实验方法 |
| 6.2.1 蒙药BBS传统复方的制备 |
| 6.2.2 受试菌培养 |
| 6.2.3 实验分组及给药方案 |
| 6.2.4 PAS染色 |
| 6.2.5 免疫荧光 |
| 6.2.6 ELISA |
| 6.3 数据处理 |
| 6.4 实验结果 |
| 6.4.1 肠组织杯状细胞检测结果 |
| 6.4.2 MUC-2 的检测结果 |
| 6.4.3 溶菌酶及ITF的检测结果 |
| 6.4.4 二糖酶活力的检测结果 |
| 6.5 讨论 |
| 6.6 小结 |
| 总体讨论 |
| 总体结论 |
| 创新点 |
| 致谢 |
| 参考文献 |
| 作者简介 |
（4）基于CD4+T淋巴细胞探究健脾祛湿和络方治疗特发性膜性肾病的作用机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| ABSTRACT |
| 符号说明 |
| 第一章 文献综述 |
| 综述一 中医药治疗特发性膜性肾病的机制研究进展 |
| 1. 中医药保护IMN足细胞 |
| 2. 中医药减轻IMN肾脏纤维化 |
| 3. 中医药调节IMN免疫反应 |
| 4. 中医药抗IMN氧化应激反应 |
| 5. 中医药改善IMN高凝状态 |
| 6. 中医药对IMN其他方面的影响 |
| 7. 小结与讨论 |
| 参考文献 |
| 综述二 特发性膜性肾病外周血TB淋巴细胞的研究进展 |
| 1.T淋巴细胞 |
| 2. B淋巴细胞 |
| 3. 小结与讨论 |
| 参考文献 |
| 第二章 基于CD4~+T淋巴细胞探究健脾祛湿和络方治疗特发性膜性肾病的作用机制 |
| 前言 |
| 研究内容与方法 |
| 1. 研究对象 |
| 2. 诊断标准 |
| 3. 纳入及排除标准 |
| 4. 病例治疗方案 |
| 5. 观测指标 |
| 6. 随访 |
| 7. 疗效评价 |
| 8. 实验方法 |
| 9.统计学方法 |
| 研究结果 |
| 1. 一般资料 |
| 2. 临床资料 |
| 3. 健脾祛湿和络方对IMN临床指标的影响 |
| 4. 健脾祛湿和络方治疗IMN的临床缓解率 |
| 5. 外周血细胞免疫指标的基线分析 |
| 6. 健脾祛湿和络方对IMN外周血细胞免疫指标的影响 |
| 7. 健脾祛湿和络方治疗IMN有效组和无效组外周血细胞免疫指标的比较 |
| 讨论 |
| 1. 健脾祛湿和络方治疗IMN的临床疗效 |
| 2. 健脾祛湿和络方治疗IMN的外周血免疫机制 |
| 小结 |
| 结语 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 在学期间主要研究成果 |
（5）多发性骨髓瘤患者外周血ILCs和淋巴细胞亚群变化与疗效关系的研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 第一章 前言 |
| 1.1 多发性骨髓瘤概述 |
| 1.2 多发性骨髓瘤发病机制 |
| 1.2.1 细胞遗传学异常及基因表达异常 |
| 1.2.2 表观遗传学 |
| 1.2.3 多发性骨髓瘤免疫微环境紊乱 |
| 1.3 固有淋巴样细胞 |
| 1.3.1 固有淋巴样细胞概述 |
| 1.3.2 固有淋巴样细胞在非血液系统肿瘤中的作用 |
| 1.3.3 固有淋巴样细胞在血液肿瘤中的研究现状 |
| 第二章 材料与方法 |
| 2.1 研究对象 |
| 2.1.1 病例选择 |
| 2.1.2 健康对照组选择 |
| 2.1.3 临床疗效检测指标 |
| 2.2 实验材料 |
| 2.2.1 实验仪器 |
| 2.2.2 实验试剂 |
| 2.3 实验方法 |
| 2.3.1 淋巴细胞刺激剂配制 |
| 2.3.2 流式细胞术检测ILCs亚群比例 |
| 2.3.3 流式细胞术检测Th1/Th2/Th17/Th22 细胞比例 |
| 2.4 实验结果分析及统计学方法 |
| 第三章 结果 |
| 3.1 MM患者外周血细胞中ILC细胞比例 |
| 3.1.1 ILC1 亚群比例 |
| 3.1.2 ILC2 亚群比例 |
| 3.1.3 ILC3 亚群比例 |
| 3.2 Th1/Th2/Th17/Th22 细胞与ILCs之间的关系 |
| 3.3 MM患者CD3+T/CD3+CD4+T/CD3+CD8+/NK细胞与ILCs之间的关系 |
| 3.4 MM患者外周血细胞因子与ILCs之间的关系 |
| 3.5 MM患者外周血ILC1s、ILC2s、ILC3s之间的关系 |
| 第四章 讨论 |
| 4.1 ILC1、CD3+T、CD3+CD4+T、CD3+CD8+T、NK细胞及细胞因子IFN-γ、IL-12 在MM中的水平与免疫调控 |
| 4.2 ILC2、IL-2、TNF-α、IL-4、IL-1β、IFN-α在MM中的水平与免疫调控 |
| 4.3 ILC3与Th-17 及细胞因子IL-5在MM中的水平与免疫调控 |
| 4.4 MM患者ILCs亚群之间的相关性 |
| 4.5 实验不足与展望 |
| 第五章 结论 |
| 参考文献 |
| 缩略词表 |
| 附录 |
| 在学期间研究成果 |
| 致谢 |
（6）褪黑素调控PI3K/AKT/mTOR自噬通路治疗早发性卵巢功能不全的机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| Abstract |
| 符号说明及缩略语对照 |
| 前言 |
| 第一部分 褪黑素在早发性卵巢功能不全治疗中的临床疗效及机制研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第二部分 基于PI3K/AKT/mTOR自噬通路探讨褪黑素治疗早发性卵巢功能不全的机制研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 第三部分 褪黑素对POI大鼠卵巢功能保护作用的实验研究 |
| 材料与方法 |
| 结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 全文小结 |
| 结论 |
| 参考文献 |
| 综述一 卵巢功能不全的病因学研究及治疗进展 |
| 参考文献 |
| 综述二 生殖细胞能量代谢与女性生育能力关系的研究进展 |
| 参考文献 |
| 致谢 |
| 攻读学位期间参与科研项目及发表的学术论文目录 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 |
| English paper 1 |
| English paper 2 |
| English paper 3 |
（7）MMF通过抑制Th17细胞及IL-17A下调Vγ4细胞表达KGF的机制研究（论文提纲范文）
| 缩略词表 |
| Abstract |
| 中文摘要 |
| 第一章 前言 |
| 第二章 建立吗替麦考酚酯诱导小鼠肠粘膜屏障损伤模型 |
| 2.1 前言 |
| 2.2 实验材料和方法 |
| 2.3 实验结果 |
| 2.4 讨论 |
| 2.5 结论 |
| 第三章 外源性 KGF 对吗替麦考酚酸酯诱导的肠粘损害的 保护作用研究 |
| 3.1 前言 |
| 3.2 实验材料和方法 |
| 3.3 结果 |
| 3.4 讨论 |
| 3.5 结论 |
| 第四章 吗替麦考酚酯降低小鼠肠粘膜Th17细胞比例及IL-17A的表达 |
| 4.1 前言 |
| 4.2 实验材料和方法 |
| 4.3 结果 |
| 4.4 讨论 |
| 4.5 总结 |
| 第五章 IL-17A调控Vγ4 细胞表达KGF机制的初步探讨 |
| 5.1 前言 |
| 5.2 实验材料和方法 |
| 5.3 结果 |
| 5.4 讨论 |
| 5.5 总结 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 文献综述 γδT细胞在人类疾病中的免疫学作用 |
| 参考文献 |
| 攻读学位期间的研究成果 |
| 致谢 |
（8）脱细胞基质生物材料DNA去除标准和免疫原性研究（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 中英文缩略语表 |
| 前言 |
| 第一部分 不同DNA/脂质/内毒素残留量ACTM生物材料制备和测定 |
| 一、实验材料与方法 |
| 二、实验结果 |
| 三、讨论 |
| 第二部分 不同DNA/脂质/内毒素残留量ACTM生物材料体外及体内免疫原性实验 |
| 一、体外免疫原性实验 |
| (一)材料与试剂 |
| (二)实验方法 |
| (三)实验结果 |
| (四)讨论 |
| 二、体内免疫原性实验 |
| (一)动物模型的制备 |
| (二)实验方法 |
| (三)实验结果 |
| (四)讨论 |
| (五)结论 |
| 第三部分 不同DNA/脂质/内毒素残留量ACTM材料大鼠部分腹壁肌缺损修复实验 |
| 一、动物模型的创建及修复 |
| (一)材料与分组方法 |
| (二)实验方法 |
| 二、实验结果 |
| 三、讨论 |
| 四、结论 |
| 全文总结 |
| 参考文献 |
| 附录 材料病毒灭活验证方法 |
| 文献综述 脱细胞组织基质(ACTM)生物材料研究进展 |
| 参考文献 |
| 攻读博士学位期间发表论文和参加科研工作情况说明 |
| 致谢 |
（9）基于Toll样受体信号介导炎症反应探讨温针灸对自发性高血压大鼠的抗炎机制（论文提纲范文）
| 摘要 |
| abstract |
| 英文缩略词表 |
| 前言 |
| 论文一 温针灸对自发性高血压大鼠血压及炎症状态的调控作用 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 论文二 温针灸对自发性高血压大鼠TLR4/MyD88/NF-κB信号通路调控机制研究 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 论文三 温针灸通过调控炎症反应发挥对自发性高血压大鼠内皮细胞保护作用的机制 |
| 材料与方法 |
| 实验结果 |
| 讨论 |
| 小结 |
| 结论 |
| 本研究创新性的自我评价 |
| 参考文献 |
| 附图 |
| 附图1 Toll样受体家族及其信号传导通路 |
| 附图2 Toll受体信号通路影响血压机制 |
| 附图3 动物实验技术路线图 |
| 附图4 qPCR实验过程中部分扩增曲线 |
| 附图 5qPCR实验过程中部分熔解曲线 |
| 综述 |
| 综述一 TLRs通路各层级在高血压病及免疫功能调节中的作用机理分析 |
| 综述二 针灸调节血压及免疫功能机制的研究进展 |
| 综述三 高血压病与炎症因子之间的相关性分析 |
| 参考文献 |
| 个人简介 |
| 在学期间科研成绩 |
| 致谢 |
（10）外泌体介导心肌损伤保护作用的机制研究（论文提纲范文）
| 中文摘要 |
| abstract |
| 前言 |
| 1 研究背景 |
| 2 总体设计思路 |
| 参考文献 |
| 第一部分 研究多种来源外泌体在体外循环围手术期的改变情况 |
| 1 引言 |
| 2 材料和方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 第二部分 研究骨髓间充质干细胞来源外泌体调控自噬发挥心肌保护作用机制 |
| 1 引言 |
| 2 材料和方法 |
| 3 结果 |
| 4 讨论 |
| 5 结论 |
| 参考文献 |
| 综述 外泌体的研究进展及在心血管疾病中的临床应用价值 |
| 参考文献 |
| 攻读博士期间发表的论文 |
| 中英文缩略词表 |
| 致谢 |
四、大鼠心脏移植后外周血T淋巴细胞rDNA转录活性变化及其意义（论文参考文献）
- [1]髓系抑制细胞通过增强Th17反应促进原发性膜性肾病的疾病进展[D]. 李会敏. 吉林大学, 2021(01)
- [2]白介素-37通过髓源性抑制细胞影响急性胰腺炎炎症反应的机制研究[D]. 丁黎莉. 吉林大学, 2021(01)
- [3]蒙药“巴布-7”对大肠杆菌性腹泻小鼠肠黏膜屏障保护机制的相关研究[D]. 高瑞娟. 内蒙古农业大学, 2021(01)
- [4]基于CD4+T淋巴细胞探究健脾祛湿和络方治疗特发性膜性肾病的作用机制[D]. 曾勤. 北京中医药大学, 2021(08)
- [5]多发性骨髓瘤患者外周血ILCs和淋巴细胞亚群变化与疗效关系的研究[D]. 关智媛. 兰州大学, 2021(12)
- [6]褪黑素调控PI3K/AKT/mTOR自噬通路治疗早发性卵巢功能不全的机制研究[D]. 李琰珉. 山东大学, 2020(04)
- [7]MMF通过抑制Th17细胞及IL-17A下调Vγ4细胞表达KGF的机制研究[D]. 宋亚军. 中国人民解放军陆军军医大学, 2020(07)
- [8]脱细胞基质生物材料DNA去除标准和免疫原性研究[D]. 陈金水. 中国人民解放军海军军医大学, 2020(02)
- [9]基于Toll样受体信号介导炎症反应探讨温针灸对自发性高血压大鼠的抗炎机制[D]. 金圣博. 辽宁中医药大学, 2020(01)
- [10]外泌体介导心肌损伤保护作用的机制研究[D]. 倪达. 苏州大学, 2020(06)